本文選題：抗菌肽 + 大腸桿菌�。� 參考：《天津科技大學》2016年碩士論文

【摘要】：抗菌肽Plantaricin ZJ5是2014年從傳統(tǒng)發(fā)酵菜中分離得到的一種細菌素類抗菌肽,具有廣譜抗菌性,由22個氨基酸組成,分子量為2572.9 Da。抗菌肽Mytichitin-A是2014年從厚殼貽貝的血清中分離得到的一種新型抗菌肽,由55個氨基酸組成,分子量為6621.55 Da,分子內有6個半胱氨酸,形成三對二硫鍵。在本研究中,將抗菌肽基因Plantaricin ZJ5和Mytichitin-A分別克隆到載體PGEX-2T和pMAL-c2x中,并轉入大腸桿菌BL21中,在IPTG的誘導下分別與GST標簽和MBP標簽進行融合表達。并采用親和純化的方法得到了純度較高的融合蛋白GST-PlantaricinZJ5 和 GST-Mytichitin-A,產(chǎn)量分別為 113 mg/L 和 84 mg/L。用腸激酶將親和純化后融合蛋白的標簽去除得到無氨基酸殘留的抗菌肽做抑菌圈實驗。但是,抑菌實驗的結果顯示,大腸桿菌表達系統(tǒng)獲得的抗菌肽Plantaricin ZJ5和Mytichitin-A均沒有抑菌活性。之后,我們將抗菌肽基因Mytichitin-A克隆到外泌型表達載體pPICZαA上。通過電轉化的方法,將SacI酶線性化的重組質粒pPICZαA-Mytichitin-A轉入畢赤酵母GS115中。經(jīng)甲醇誘導后目的蛋白存在于酵母發(fā)酵液上清中。經(jīng)鎳柱親和純化其產(chǎn)量為150mg/L。抑菌實驗結果表明,重組表達抗菌肽Mytichitin-A對革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)和枯草芽孢桿菌151-1均有明顯的抑制作用,純化后的重組抗菌肽對金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)有較強的抑制作用,最小抑制濃度(MIC)為31μg/mL。綜上所述,我們的實驗結果表明來源于厚殼貽貝血清中的抗菌肽Mytichitin-A能夠在畢赤酵母中有效表達并分泌至胞外。這是抗菌肽Mytichitin-A首次通過基因工程的方法成功表達且具有抑菌活性,這為抗菌肽的應用提供了非常寶貴的實踐經(jīng)驗。
[Abstract]:In this study , we cloned the antibacterial peptide gene , Plantaricin ZJ5 , and Mytidyl - A into Pichia pastoris GS115 . The results showed that the antibacterial peptide Mytidyl - A was successfully expressed in Pichia pastoris .

【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：O629.72

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本文編號：1798532