本文關(guān)鍵詞：新型固定化金屬螯合親和層析介質(zhì)構(gòu)建及表征　出處：《哈爾濱商業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 瓊脂糖微球 Cu~(2+)-IMAC親和層析介質(zhì) 冷凍凝膠 乳化冷卻

【摘要】：本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)乳化冷卻法制備瓊脂糖微球工藝、瓊脂糖表面改性工藝、瓊脂糖微球表面IDA固定化及冷凍凝膠法制備IMAC (Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC固定化金屬螯合親和層析)介質(zhì)工藝進(jìn)行系統(tǒng)性研究,并對(duì)所制備介質(zhì)進(jìn)行表征及研究其在分離純化生物大分子物質(zhì)方面的應(yīng)用。從而構(gòu)建出可以在復(fù)雜環(huán)境中一步完成目的產(chǎn)物的過濾、分離純化濃縮,減少了固液分離和初級(jí)分離步驟的新型固定化金屬螯合親和層析介質(zhì),具體研究如下：采用乳化冷卻法制備尺寸均一且小于25μm的瓊脂糖微球,以一定質(zhì)量瓊脂糖水溶液作為水相,以一定比例span-85和石蠟油的混合溶液作為油相。通過電子顯微鏡觀察,以觀察所得微球粒徑及其分布率為指標(biāo),研究制備瓊脂糖微球的相關(guān)影響因素。實(shí)驗(yàn)得知：瓊脂糖濃度為4%,乳化劑濃度為3%,攪拌速度為中速,攪拌時(shí)間為2 min。在此條件下,可得粒徑較為集中且尺寸均一且小于25μm的瓊脂糖微球。以瓊脂糖微球?yàn)閷?shí)驗(yàn)材料,以二甲基亞砜、環(huán)氧氯丙烷、NaOH分別作為反應(yīng)體系和活化劑,以微球表面環(huán)氧基修飾密度為指標(biāo),研究固相載體表面活化的相關(guān)影響因素。實(shí)驗(yàn)得知：二甲基亞砜80%、NaOH 0.8 mol·L-1、環(huán)氧氯丙烷10%、反應(yīng)時(shí)間3 h、反應(yīng)溫度50℃、搖床轉(zhuǎn)速170r/min。此條件下,微球表面環(huán)氧基密度最高即活化效率最高。采用冷凍凝膠成型法,以活化后瓊脂糖微球作為實(shí)驗(yàn)材料,戊二醛為交聯(lián)劑,亞氨基二乙酸為配基,制備金屬螯合親和層析介質(zhì)。以IDA接枝密度為指標(biāo),研究瓊脂糖微球表面IDA固定化影響因素。研究發(fā)現(xiàn)：瓊脂糖與IDA添加比例為1：0.58、戊二醛濃度為35%、反應(yīng)環(huán)境pH值為10,在此條件下IDA接枝密度達(dá)到最高。以所制備IMAC固定化金屬螯合親和層析介質(zhì)為實(shí)驗(yàn)材料,對(duì)其性能進(jìn)行表征,同時(shí)研究其對(duì)生物大分子物質(zhì)分離純化能力。研究表明：通過SEM圖像可知,所制備親和層析介質(zhì)經(jīng)過表面改性、IDA固定化,其粒徑仍就較均一且在25μm以下,符合尺寸要求,且制備介質(zhì)具有一定的孔隙結(jié)構(gòu);通過IR圖像分析可知,在910 cm-1有明顯環(huán)氧官能團(tuán)特征峰,表明瓊脂糖微球活化成功；在1630-1700 cm-1區(qū)間的吸收峰應(yīng)為醛或酮類CO雙鍵產(chǎn)生的吸收峰,表明在此峰段內(nèi)產(chǎn)生羧基、羥基特征峰,表明IDA接枝成功；通過銅離子結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線得知,親和層析介質(zhì)銅離子螯合率為73.45%：鹽析法制備卵白蛋白粗品經(jīng)分離純化及SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)得知,固定化金屬螯合親和層析介質(zhì)飽和吸附量為91.95mg,卵白蛋白回收率為85.37%,說明IMAC固定化金屬螯合親和層析介質(zhì)具備較好的分離純化能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱商業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O658

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 劉微;王勇尊;許慧;李優(yōu)鑫;包建民;;羧甲基瓊脂糖微球的制備及其在國產(chǎn)堿性蛋白酶純化中的應(yīng)用[J];現(xiàn)代化工;2013年07期

2 董聿生,梁峰,余向陽,常建華,郭立安;磁性瓊脂糖親和吸附劑的合成與應(yīng)用[J];西北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2001年02期

3 ;[J];;年期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 蘭雄雕;磁性瓊脂糖微球固定化豬肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶分離長蛇鯔降血壓肽的研究[D];廣西大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 景志剛;新型固定化金屬螯合親和層析介質(zhì)構(gòu)建及表征[D];哈爾濱理工大學(xué);2016年

2 林楠;常規(guī)膜乳化法制備大粒徑瓊脂糖微球[D];北京化工大學(xué);2009年

3 宋振陽;交聯(lián)瓊脂糖的制備及作為膽紅素吸附劑的研究[D];大連理工大學(xué);2012年

4 楊帆;固相表面上蛋白質(zhì)空間取向控制方法研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1352915