本文關(guān)鍵詞：兩種新型β-受體激動(dòng)劑溴布特羅和西布特羅酶免疫分析法的建立

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【摘要】：β-受體激動(dòng)劑也就是人們常說的瘦肉精,這類物質(zhì)具有營養(yǎng)再分配的作用,能有效提高動(dòng)物體的瘦肉率,常被用于畜牧業(yè)生產(chǎn),并通過食物鏈危害人們的身體健康。在畜產(chǎn)品中殘留而引發(fā)的食物中毒事件見諸報(bào)端,中華人民共和國農(nóng)業(yè)部已多次頒布公告,明確提出禁止在動(dòng)物飼料及其飲用水中添加β-激動(dòng)劑。目前,最常使用的β-激動(dòng)劑主要有鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇,近幾年也出現(xiàn)了一種新的β-激動(dòng)劑苯乙醇胺A,這幾種瘦肉精都已具備了相應(yīng)的檢測方法。然而,作為新型瘦肉精的溴布特羅和西布特羅,其結(jié)構(gòu)與克倫特羅相似,但測定方法有限。為對今后可能存在的瘦肉精類食品安全問題加以防范,建立溴布特羅和西布特羅的快速測定方法很有必要。本研究考慮到溴布特羅和西布特羅的結(jié)構(gòu)十分相近,苯環(huán)上都帶有氨基,因而均采用重氮化法合成溴布特羅與西布特羅的包被抗原及免疫原,最終得到溴布特羅和西布特羅兩種多克隆抗體,分別建立了靈敏度高、特異性強(qiáng)的酶聯(lián)免疫吸附分析(ic-ELISAs)法,同時(shí)通過高效液相色譜(HPLC)法印證了該法測定實(shí)際樣品的可行性。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,基于溴布特羅抗體的ELISAs法的IC50值在0.165-0.243ng·m L-1之間,基于西布特羅抗體的ELISAs法的IC50值為0.218 ng·mL-1,表明本研究所建立的酶聯(lián)免疫吸附分析法靈敏度高。同時(shí)該方法的交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)表明了其較高的特異性。本研究選擇豬肉、豬肝和豬飼料這三種實(shí)際樣品進(jìn)行加標(biāo)回收測定,考察方法的準(zhǔn)確性和精密度,其中,測定溴布特羅的回收率為91.9 115.4%,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)為1.5 9.5%(n=3),批間CV為1.7 13.4%(n=3);測定西布特羅的回收率在95.41 114.5%,批內(nèi)CV為2.2 9.3%(n=3),批間CV為2.3 12.3%(n=3)。與HPLC的測定結(jié)果相比,基于溴布特羅和西布特羅的兩種ELISA方法均與HPLC有著很好的相關(guān)性。此外,針對西布特羅酶免疫分析方法,本研究還選取了基于金納米顆粒的免疫層析試劑條作為方法對照,半定量試劑條的最低檢測限在3 ng·m L-1,該靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如ELISA法。因此,經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證實(shí),本論文建立的ELISA法是一種可靠的測定飼料及組織樣品中溴布特羅和西布特羅的方法,且具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：酶聯(lián)免疫吸附分析法 β-受體激動(dòng)劑 溴布特羅 西布特羅 多克隆抗體 食品安全
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O657
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 緒論12-34
• 1.1 引言12
• 1.2 β-激動(dòng)劑概述12-15
• 1.2.1 β-激動(dòng)劑簡介12-14
• 1.2.2 β-激動(dòng)劑作用機(jī)理14-15
• 1.2.3 β-激動(dòng)劑的檢測現(xiàn)狀15
• 1.3 酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）15-33
• 1.3.1 引言15-16
• 1.3.2 抗原16-20
• 1.3.2.1 抗原的定義16
• 1.3.2.2 抗原的特異性和交叉反應(yīng)16
• 1.3.2.3 半抗原的修飾原則16-17
• 1.3.2.4 半抗原的修飾方法17-18
• 1.3.2.5 完全人工抗原的合成18-20
• 1.3.2.6 完全人工抗原的純化和鑒定20
• 1.3.3 抗體20-23
• 1.3.3.1 抗體的定義和類型20
• 1.3.3.2 抗體的制備20-21
• 1.3.3.3 抗體的純化21-23
• 1.3.4 抗原-抗體反應(yīng)23-24
• 1.3.4.1 抗原-抗體反應(yīng)的原理[17]23
• 1.3.4.2 抗原-抗體反應(yīng)的特點(diǎn)23-24
• 1.3.4.3 抗原-抗體反應(yīng)的影響因素24
• 1.3.5 免疫分析24-25
• 1.3.6 酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）25-30
• 1.3.6.1 ELISA的概念及原理[49]25
• 1.3.6.2 ELISA的分類25-27
• 1.3.6.3 ELISA的特點(diǎn)27
• 1.3.6.4 ELISA的應(yīng)用27
• 1.3.6.5 ELISA的進(jìn)展27-30
• 1.3.7 膠體金免疫層析（GICA）技術(shù)簡介30-33
• 1.3.7.1 GICA的概念與原理30
• 1.3.7.2 GICA的特點(diǎn)30-31
• 1.3.7.3 GICA的分類31-33
• 1.3.7.4 GICA的應(yīng)用33
• 1.4 本研究的目的和意義33-34
• 第二章 溴布特羅酶聯(lián)免疫吸附分析法的建立34-53
• 2.1 引言34
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料34-36
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑34-35
• 2.2.2 溶液配制35-36
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備36
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物36
• 2.3 免疫原、包被抗原的制備36-37
• 2.4 多克隆抗體的制備37-38
• 2.4.1 首次免疫37
• 2.4.2 加強(qiáng)免疫37
• 2.4.3 抗血清的監(jiān)測37-38
• 2.4.4 抗血清的收集38
• 2.5 間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析法的建立38-42
• 2.5.1 間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析方法38-39
• 2.5.2 ELISA實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化39
• 2.5.3 交叉反應(yīng)39-41
• 2.5.4 樣品的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)41
• 2.5.5 ELISA與HPLC的對照實(shí)驗(yàn)41-42
• 2.6 結(jié)果與討論42-52
• 2.6.1 免疫原與包被抗原的鑒定42-43
• 2.6.2 多克隆抗體的驗(yàn)證和監(jiān)測43-45
• 2.6.3 ELISA實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化以及方法的靈敏度與穩(wěn)定性45-46
• 2.6.4 ELISA方法的特異性46-47
• 2.6.5 樣品的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)47-49
• 2.6.6 ELISA與HPLC的相關(guān)性49-52
• 2.7 本章小結(jié)52-53
• 第三章 西布特羅酶聯(lián)免疫吸附分析法的建立53-74
• 3.1 引言53
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料53-56
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑53-55
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備55-56
• 3.2.3 溶液配制56
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物56
• 3.3 免疫原、包被抗原的制備56-57
• 3.4 多克隆抗體的制備57-58
• 3.4.1 首次免疫57
• 3.4.2 加強(qiáng)免疫57-58
• 3.4.3 抗血清的監(jiān)測58
• 3.4.4 抗血清的收集58
• 3.5 間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析法的建立58-62
• 3.5.1 間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析方法58-59
• 3.5.2 ELISA實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化59
• 3.5.3 交叉反應(yīng)59-61
• 3.5.4 樣品的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)61
• 3.5.5 ELISA與HPLC的對照實(shí)驗(yàn)61-62
• 3.6 免疫層析分析方法的探討62-63
• 3.6.1 抗體的純化62
• 3.6.2 AuNPs-Ab復(fù)合物的制備62
• 3.6.3 免疫層析試劑條的制備62-63
• 3.6.4 基于AuNPs的免疫層析過程63
• 3.7 結(jié)果與討論63-73
• 3.7.1 免疫原與包被抗原的鑒定63-64
• 3.7.2 多克隆抗體的驗(yàn)證和監(jiān)測64-65
• 3.7.3 ELISA實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化以及方法的靈敏度與穩(wěn)定性65-67
• 3.7.4 ELISA方法的特異性67-68
• 3.7.5 樣品的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)68-69
• 3.7.6 ELISA與HPLC的相關(guān)性69-72
• 3.7.7 AuNPs的表征與免疫層析試劑條抑制信號(hào)的考察72-73
• 3.8 本章小結(jié)73-74
• 總結(jié)74-75
• 參考文獻(xiàn)75-80
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文80-81
• 致謝81-82

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1 Г.В.貝可夫;任新民;;布特列洛夫化學(xué)結(jié)構(gòu)學(xué)說的基本原理及其發(fā)展[J];化學(xué)通報(bào);1954年05期

2 Л.А.資威特科夫;繼健;;中學(xué)化學(xué)課程中布特列洛夫化學(xué)結(jié)構(gòu)理論的教學(xué)[J];化學(xué)通報(bào);1954年05期

3 Б.А.Арбузов;人風(fēng);;鹵素衍生物與烯屬烴之化合作用 布特列洛夫—愛列且柯夫二氏反應(yīng)[J];化學(xué)世界;1954年01期

4 王原;;布特拉嗪結(jié)構(gòu)分析[J];齊魯藥事;1989年04期

5 吳培云,梁玉堂;班布特羅制備工藝的改進(jìn)[J];中國藥業(yè);2000年03期

6 吳海虹,張雪利,朱雪焱,楊t 蘋;班布特羅的合成研究[J];合成化學(xué);2000年02期

7 ;[J];;年期

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1 記者 李自旺 支祿 實(shí)習(xí)生 杜研 通訊員 王新棟 趙中革;揭批“伊扎布特”宣講活動(dòng)廣泛開展[N];吐魯番報(bào)(漢);2007年

2 本報(bào)駐曼谷記者 吳建友;美俄圍繞布特案持續(xù)角力[N];光明日報(bào);2010年

3 石宏;美為何鐵心引渡“戰(zhàn)爭之王”[N];國防時(shí)報(bào);2010年

4 本報(bào)駐曼谷記者 吳建友;布特案引發(fā)美俄外交角逐[N];光明日報(bào);2010年

5 管克江;給未來留下遺產(chǎn)[N];人民日報(bào);2006年

6 陳立希;《戰(zhàn)爭之王》真實(shí)版,“死亡販子”被誘捕[N];新華每日電訊;2008年

7 凌朔;美俄爭奪“死亡販子”,曼谷難抉擇[N];新華每日電訊;2009年

8 凌朔;美俄曼谷爭奪“死亡販子”[N];中國國防報(bào);2009年

9 李鳳紊;維克托·布特:世界頭號(hào)軍火販[N];中國國防報(bào);2009年

10 閆潔;泰國“死亡販子”案：背后是美俄政治角力[N];新華每日電訊;2009年

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1 潘麗玉;羅氟司特和班布特羅對OVA誘導(dǎo)豚鼠/大鼠哮喘氣道炎癥和肺功能改善的藥效學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2016年

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3 張琳捷;英國卡迪夫布特社區(qū)更新機(jī)制及啟示[D];西安建筑科技大學(xué);2016年

4 趙婷;左旋班布特羅的臨床藥代動(dòng)力學(xué)及其代謝產(chǎn)物研究[D];華南理工大學(xué);2015年

5 張小會(huì);阿爾及利亞布特弗利卡改革研究[D];外交學(xué)院;2011年

6 劉慧;班布特羅左旋異構(gòu)體對動(dòng)物哮喘模型的藥理學(xué)研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2010年

7 李林嘉;布特弗利卡執(zhí)政時(shí)期的阿爾及利亞外交政策及對中國—阿爾及利亞關(guān)系的影響[D];外交學(xué)院;2014年

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