發(fā)布時間：2017-10-13 21:34

  本文關(guān)鍵詞：利用熒光光譜法研究脲和鹽酸胍誘導(dǎo)谷氨酸脫羧酶的去折疊

  更多相關(guān)文章： 谷氨酸脫羧酶 脲 鹽酸胍 熒光相圖法 蛋白質(zhì)去折疊

【摘要】：利用熒光光譜法研究了鹽酸胍和脲誘導(dǎo)的谷氨酸脫羧酶野生酶和突變酶K413A的去折疊過程,以探索與酶穩(wěn)定性相關(guān)的構(gòu)效關(guān)系。以鹽酸胍為變性劑時,野生型酶和突變酶K413A在激發(fā)波長為280 nm的熒光圖譜中色氨酸的最大發(fā)射峰均發(fā)生紅移,色氨酸熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢;以脲為變性劑時,兩種酶熒光圖譜中色氨酸的最大發(fā)射峰同樣發(fā)生紅移,但色氨酸熒光強(qiáng)度持續(xù)下降。無論是以鹽酸胍還是以脲作為變性劑時,野生型酶和突變酶K413A的去折疊過程都符合"三態(tài)模型",說明隨著變性劑濃度的增加,野生型酶和突變酶K413A先從天然態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)椴糠终郫B中間態(tài),并最終轉(zhuǎn)變?yōu)槿フ郫B狀態(tài)。此外,考察了變性劑對谷氨酸脫羧酶活力的影響,當(dāng)以鹽酸胍為變性劑時,野生型酶和突變酶K413A半失活的鹽酸胍濃度分別為0.4 mol×L~(-1)和0.7 mol×L~(-1),而半失活的脲濃度分別為1 mol×L~(-1)和2 mol×L~(-1)。研究表明,突變酶K413A的熱力學(xué)穩(wěn)定性比野生型酶更強(qiáng),K413位點(diǎn)與GAD的結(jié)構(gòu)剛性有重要聯(lián)系。
【作者單位】： 浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院;浙江科技學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院;浙江大學(xué)化學(xué)工程與生物工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 谷氨酸脫羧酶 脲 鹽酸胍 熒光相圖法 蛋白質(zhì)去折疊
【基金】：國家自然科學(xué)基金(21176220,31240054,31470793) 浙江省自然科學(xué)基金(LZ13B060002,LY16B060008) 寧波市自然科學(xué)基金(2013A610087)
【分類號】：Q55;O657.3
【正文快照】： 1前言谷氨酸脫羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD:EC 4.1.1.15)廣泛存在于原核和真核生物細(xì)胞中,能專一性催化L-谷氨酸的α-羧基脫羧生成γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)[1]。GABA是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),具有降血壓、利尿、抗驚厥、預(yù)防癲

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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本文編號：1027201