【摘要】：大腸菌群作為評價各種食品、水質和藥品的重要微生物指標之一,不僅可用于判斷樣品是否被糞便污染,還可作為樣品被腸道致病菌污染的指示菌,檢測大腸菌群具有重要的微生物學意義。目前國內仍以傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法來檢測大腸菌群,存在操作步驟繁瑣,耗時長等缺點。近年來,基于特異性酶技術的大腸菌群快速檢測技術,具有特異性強、靈敏度高、檢測快速等優(yōu)點,得到廣泛的認可和應用。雖然基于特異性酶技術的大腸菌群快速檢測技術比傳統(tǒng)的方法有很大的改進,但到目前為止,檢測結果基本都是采用目測定性判斷,然后根據MPN法查得樣品大腸菌群數量。這種結果判定方法容易出現人為誤判,影響實驗結果。此外,MPN法所得的結果精確度不高,MPN法的多管測定也增加了檢測工作量和試劑的使用量�；诖�,本論文研究了一種基于特異性酶技術的大腸菌群單管定量快速檢測技術,結合自制的顯色培養(yǎng)基及快速檢測儀器使用,可以實現單支反應管對大腸菌群進行定量檢測。分別選擇胰蛋白胨、乳糖、氯化鈉作為大腸菌群基礎培養(yǎng)基的氮源、碳源和無機鹽。通過單因素實驗分別驗證胰蛋白胨、乳糖、氯化鈉的最適添加量和最適p H值,通過正交實驗進一步優(yōu)化最適添加量和最適p H值。研究顯色底物鄰硝基苯基β-D-半乳糖苷的適宜添加量,確定適宜的顯色劑濃度。研究不同種類、不同濃度的抑菌劑對雜菌的抑菌效果,選擇合適的抑菌劑及添加量。確定大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基的配方如下:胰蛋白胨15.0g/L,乳糖4.5g/L,氯化鈉4.5g/L,磷酸氫二鉀2.1g/L,磷酸二氫鉀1.0g/L,脫氧膽酸鈉0.2 g/L,ONPG0.5g/L,p H7.0。通過研究大腸菌群快速檢測方法最佳檢測波長,溫度、p H值對大腸菌群生長及培養(yǎng)液吸光度值的影響,確定最適合大腸菌群生長和水解底物檢測的理化條件。通過研究大腸菌群初始接種數量與達到0.2吸光度所需時間的量化關系,建立大腸菌群單管定量快速檢測技術。根據建立的大腸菌群單管定量檢測技術,選擇合適的光源和相關元器件,研制出大腸菌群快速檢測儀器。研究結果表明,在410nm檢測波長處,當大腸菌群初始接種濃度在7-10~5cfu/m L(g)范圍內,大腸菌群初始接種數量與達到0.2吸光度所需時間具有良好的線性關系(R~2=0.995)。當菌濃度為7-10~5cfu/m L(g)時所需檢測時間僅為558-275min。將公式y(tǒng)=-0.014x+8.909固化進軟件,計算機可根據樣品達到0.2吸光度所需要的時間自動計算出大腸菌群的濃度,實現單管定量。研制的大腸菌群單管定量快速檢測儀的八個通道間的精密度良好,檢測限為每克(毫升)樣品中的大腸菌群數不能低于7個。利用大腸菌群單管定量快速檢測儀對食品、環(huán)境水樣進行檢測,檢測結果與國家標準方法比較,不存在顯著性差異(P0.05),相對標準偏差遠遠低于國家標準方法。大腸菌群單管定量快速檢測法具有操作簡單,精確性高,數據準確性高,檢測時間遠小于多管發(fā)酵法,單支反應管就可以實現定量,節(jié)約試劑等優(yōu)點,可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的大腸菌群多管發(fā)酵法,具有良好的應用前景。
【學位授予單位】：華僑大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：TS207.4;X832
【圖文】：

只要設制好檢測時間，就可自動完成檢測�？蓪z測單位、檢測時間、送檢單位、檢測人員、受檢樣品信息等進行自定義存儲。圖3.6 大腸菌群單管定量快速檢測儀樣機

40圖3.7 大腸菌群單管定量快速檢測儀配套軟件主機包括 CPU、主板、數據存貯電路、電源板、顯示器、顯示接口電路、通道控制電路、接口驅動電路，其電路示意圖如圖 3.8 所示。通道控制電路上有光源穩(wěn)壓控制器，可以為單色光源提供恒定的工作電壓，并控制各通道光源開關，解決多通道同時檢測時的干擾問題。檢測數據由數據存貯電路保存在非易失性數據存貯器中，供顯示、查詢，通過串行通訊電路，還可以實現實時或打包非實時地與預裝《微生物檢測系統(tǒng)》處理軟件的計算機進行數據交換。檢測單元包括固定支架、光源、光學傳感器、樣品檢測管、光源的電源、接口線路板、A/D 信號傳輸轉換器。檢測單元含有多個檢測通道，每個檢測通道均含有獨立的固定支架、光源及光學傳感器，并配備有樣品檢測管。單個檢測通道示意圖如圖 3.9 所示。樣品檢測管可以進行高壓蒸汽滅菌

成數字信號，并傳遞給主機，從而實現對樣品的檢測。圖3.8 大腸菌群單管定量快速檢測儀電路功能圖圖3.9 大腸菌群單管定量快速檢測儀單個檢測通道示意圖3.3.4.2 大腸菌群單管定量快速檢測儀操作方法（1）把大腸菌群單管定量快速檢測儀與計算機連接，打開電源。（2）在已經滅過菌的樣品檢測管中加入無菌的大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基，然后加入經過前處理的樣品，將檢測管放進檢測通道中，將整個檢測單元放入微生物培養(yǎng)箱中，設置好培養(yǎng)箱的溫度。

【參考文獻】

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本文編號：2792776