本文來(lái)自《中國(guó)生物工程雜志》的技術(shù)論文，主要是關(guān)于不同難度閱讀理解測(cè)試學(xué)生元認(rèn)知策略運(yùn)用狀況的相關(guān)研究，詳情請(qǐng)看下面的介紹。

　　鹿銜草為鹿蹄草科植物鹿蹄草(PyrolacallithaH．Andres)或普通鹿蹄草(PyroladecorateH．Andres)的干燥全草，鹿銜草具有增加機(jī)體免疫力、擴(kuò)張血管、促進(jìn)冠脈循環(huán)、降壓、調(diào)脂等作用，對(duì)于治療心腦血管疾病療效確切，有很好的開(kāi)發(fā)利用前景。目前已經(jīng)分離鑒定出金絲桃苷、高熊果酚苷、鹿蹄草素、腎葉鹿蹄草苷、羥基腎葉鹿蹄草苷、沒(méi)食子�；咝芄榆�、2一O一沒(méi)食子�；鸾z桃苷、沒(méi)食子酸、兒茶素等多種黃酮和多酚類(lèi)成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，這些黃酮和多酚類(lèi)化合物是治療心腦血管疾病的主要有效成分。因此，本試驗(yàn)以總黃酮和總多酚含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選最佳提取工藝，為鹿銜草的開(kāi)發(fā)利用和生產(chǎn)實(shí)際提供理論依據(jù)。

　　1儀器與試藥

　　1．1儀器752型紫外分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；760CRT雙光束紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)；BP一121S電子天平(天津儀器廠)；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器廠)。

　　1．2試藥鹿銜草：購(gòu)自山西萬(wàn)榮縣，經(jīng)山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室白云娥副教授鑒定為鹿蹄草科植物普通鹿蹄草(PyroladecorateH．Andres)的干燥全草；蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，10081—9906)；沒(méi)食子酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，0831-9501)；三氯化鋁、醋酸鉀、醋酸鈉、醋酸、碳酸鈉、鎢酸鈉、磷酸等試劑均為分析純。

　　2方法與結(jié)果

　　2．1總黃酮的含量測(cè)定

　　2．1．1溶液的制備：(1)對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品11．0mg，置于25mI量瓶中，加50乙醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得(每mI含蘆丁440g)。(2)供試品溶液制備：精密稱(chēng)取藥材提取物50mg，精密稱(chēng)定，置25mI量瓶中，加50乙醇適量，超聲30rain，放冷用50乙醇適量稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

　　2．1．2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：分別精密量取蘆丁對(duì)照品溶液、供試品溶液適量，置于10mI量瓶中，加0．1mol／l的醋酸鉀溶液3ml，0．1mol／l的三氯化鋁溶液2mI，顯色20min，加5O乙醇稀釋至刻度。以50的乙醇為參比，按照紫外分光光度法在300～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，對(duì)照品和供試品在410nm均有最大吸收，故確定410nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

　　2．1．3線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液0．1ml。0．2ml。0．3ml，0．4ml，0．5mI，0．6mI，置于10mI量瓶中，加0．1mot／l的醋酸鉀溶液3mI，0．1mol／I的三氯化鋁2mI，顯色20rain，加5O乙醇稀釋至刻度，搖勻，同時(shí)作空白。照分光光度法在410nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：A一0．0331C+0．0305(r=0．9999)，結(jié)果表明，蘆丁在4．4～26．4／zg／mI范圍內(nèi)，線性良好。

　　2．1．4樣品含量測(cè)定：取供試品溶液1mI，置于10mI量瓶中，按2．1．3項(xiàng)下顯色方法顯色2Omin，加5O乙醇稀釋至刻度，搖勻，測(cè)定A，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量，總黃酮以蘆丁。

　　2．2總多酚的含量測(cè)定

　　2．2．1溶液的制備：(1)Folin試液的配制：稱(chēng)取10g鎢酸鈉置于圓底燒瓶中，用75mI的蒸餾水溶解，加入85磷酸8mI，回流3h，冷卻移入100mI量瓶中用蒸餾水定容。(2)對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品10．8mg，置于100mI棕色量瓶中，加入30甲醇稀釋至刻度，筆耕論文新浪博客，搖勻，即得(每mI含沒(méi)食子酸108g)。(3)供試品溶液制備：精密稱(chēng)取藥材提取物0．3g，精密稱(chēng)定，置25mI量瓶中，加5O乙醇適量，超聲30rain，放冷用5O9／6乙醇適量稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

　　2．2．2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：精密量取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液、供試品溶液適量，分別置于10mI量瓶中，用0．1mol／I醋酸鈉一醋酸緩沖液定容，搖勻，分別取1mL于10mI量瓶中，加Folin試液0．5mL，用2碳酸鈉溶液定容，放置30rain顯色。按照紫外分光光度法在400～900nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示，顯色后對(duì)照品和供試品在730nm均有最大吸收，故選擇730nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

　　2．2．3線性關(guān)系考察：分別吸取對(duì)照品溶液1．0ml，2．0ml，3．0mI，4．0mI，5．0mI，6．0ml，置于10mI量瓶中，用0．1mol／l醋酸鈉一醋酸緩沖液定容，搖勻，分別取1mI于10mI量瓶中，按2．2．2方法顯色后放置30rain，避光保存，在730nm處測(cè)定吸光度，以吸收度(A)為縱坐標(biāo)，沒(méi)食子酸濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：A一0．1503C+0．0l11(r一0．9999)，結(jié)果表明，沒(méi)食子酸在1．08～6．48~g／mI范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

　　2．2．4樣品含量測(cè)定：取供試品溶液1mI，置于10mI量瓶中，用0．1mol／I醋酸鈉一醋酸緩沖液定容，搖勻，取1mI于10mI量瓶中，按2．2．2項(xiàng)下顯色后避光放置30rain，測(cè)定A，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總多酚含量，總多酚以沒(méi)食子酸計(jì)。

　　2．3鹿銜草提取方法考察稱(chēng)取5g過(guò)2O目篩的鹿銜草干燥粗粉五份，精密稱(chēng)定分別按下列方法提取。

　　乙醇回流提取法：加入50乙醇100mI，回流提取2h，提取液過(guò)濾，將濾液減壓濃縮，真空干燥制成干燥浸膏，精密稱(chēng)定干膏重量，備用。水回流提取法：加入水100mI，回流提取2h，提取液過(guò)濾，將濾液減壓濃縮，真空干燥制成干燥浸膏，精密稱(chēng)定干膏重量，備用。

　　滲漉提取法：50mI50乙醇裝筒浸漬48h，加100mI5O乙醇，以2mI／rain速度滲漉，收集滲漉液，減壓濃縮，真空干燥制成干燥浸膏，精密稱(chēng)定干膏重量，備用。索氏提取法：加100mI50乙醇，索氏提取2h，提取2次，合并提取液，減壓濃縮，真空干燥制成干燥浸膏，精密稱(chēng)定干膏重量，備用。

　　乙醇超聲提取法：加入50乙醇100mL，超聲提取30min，提取液過(guò)濾，將濾液減壓濃縮，真空干燥制成干燥浸膏，精密稱(chēng)定干膏重量，作為提取物備用。將上述5種方法所得的提取物制備供試品溶液，采用分光光度法測(cè)定提取物中總黃酮和總多酚的含量，并計(jì)算5種提取方法的提取率及浸膏中的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明采用乙醇回流提取法，兩類(lèi)有效成分的提取率及浸膏中含量均較高，故確定選用乙醇回流提取法為最佳提取方法。

　　2．4正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)在預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，確定采用乙醇回流提取，對(duì)乙醇濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)和料液比4個(gè)因素，以鹿銜草總黃酮、總多酚提取率為考察指標(biāo)進(jìn)行L。(3)正交實(shí)驗(yàn)。