本文關(guān)鍵詞：規(guī)律運(yùn)動(dòng)對(duì)Nmnat基因差異表達(dá)中老齡果蠅心臟功能的影響

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【摘要】：1研究目的:研究生命早期實(shí)施運(yùn)動(dòng)干預(yù)對(duì)心臟Nmnat基因RNAi、過(guò)量表達(dá)和定點(diǎn)突變中老齡果蠅心臟收縮功能、心臟節(jié)律、運(yùn)動(dòng)能力和生命周期的影響,探討Nmnat的運(yùn)動(dòng)抗心臟衰老功能。2研究方法:W1118、NMNAT-RNAi(v107262)、NMNAT-HA(39702)、NMNAT-WR(39700)和NMNAT-H30A(39701)處女蠅分別與Hand-Gal4雄蠅雜交,收集F1代Hand-Gal4/+(nmnat基因正常表達(dá)果蠅),Handnmnat RNAi(nmnat基因敲減果蠅),Handnmnat-HA(nmnat基因過(guò)表達(dá)果蠅),Handnmnat-WR和Handnmnat-H30A(nmnat基因突變果蠅)處女蠅,隨機(jī)分為:Hand-Gal4/+-C、Hand-Gal4/+-E、Handnmnat RNAi-C、Handnmnat RNAi-E、Handnmnat-HA-C、Handnmnat-HA-E、Handnmnat-WR-C、Handnmnat-WR-E、Handnmnat-H30A-C、Handnmnat-H30A-E,每組400只,每管20只,25℃恒溫、50%恒濕、12小時(shí)晝/夜交替光照飼養(yǎng)。各運(yùn)動(dòng)組(E組)果蠅采用翻轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng),運(yùn)動(dòng)裝置電機(jī)轉(zhuǎn)速為0.5 r/s,于羽化后第2天實(shí)行連續(xù)3周,每周5d,每天2.5h翻轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。運(yùn)動(dòng)裝置從初始狀態(tài)開始,以轉(zhuǎn)軸為中心逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)180°——停留16s——順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)180°——停留16s,依此重復(fù)翻轉(zhuǎn)誘導(dǎo)果蠅運(yùn)動(dòng),訓(xùn)練時(shí)間為9:00-11:30。通過(guò)q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)7天齡Hand-Gal4/+-C組,Handnmnat-WR-C組,Handnmnat-H30A-C組,Handnmnat-HA-C組,Handnmnat RNAi-C組果蠅心臟Nmnat基因m RNA表達(dá)水平;應(yīng)用M-mode心動(dòng)圖檢測(cè)3周運(yùn)動(dòng)后(21天齡)和運(yùn)動(dòng)結(jié)束休息2周后(35天齡)果蠅心臟功能;采用攀爬指數(shù)評(píng)定于1周運(yùn)動(dòng)后次日及以后每周的第7天(直至7周齡)果蠅運(yùn)動(dòng)能力;各組于羽化后第1天隨機(jī)取果蠅200只,相同條件飼養(yǎng),培養(yǎng)基兩天更換一次,同時(shí)記錄果蠅死亡數(shù),繪制存活曲線圖,計(jì)算中位生存期。3研究結(jié)果3.1果蠅心臟Nmnat基因m RNA表達(dá)檢測(cè)結(jié)果與Hand Gla4/+-C組相比,Handnmnat RNAi-C組、Handnmnat-HA-C組果蠅心臟Nmnat的相對(duì)表達(dá)量分別約有50%的下降和42%的上升(P0.001,P0.01);Handnmnat-WR-C組和Handnmnat-H30A-C組表達(dá)高于Hand Gla4/+-C組,其中Handnmnat-H30A-C組有顯著性差異(P0.05)。3.2果蠅心臟功能的M-mode心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果(1)3周齡果蠅心臟功能的M-mode心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果與Hand Gla4/+組相比,相同干預(yù)條件Handnmnat RNAi組FS下降(P0.001),DD、SD增加(P0.001);Handnmnat HA組、Handnmnat WR組、Handnmnat H30A組較相同干預(yù)條件Handnmnat RNAi組FS增加(P0.001);與Handnmnat RNAi-C組相比,Handnmnat WR-C組SIAI下降(P0.01)。與Handnmnat RNAi-C組相比,Handnmnat RNAi-E組果蠅FS增加(P0.05);HandGla4/+-E組、Handnmnat HA-E組、Handnmnat WR-E組和Handnmnat H30A-E組較相同遺傳背景C組FS增加(P0.05);Handnmnat H30A-E組較Handnmnat RNAi-E組SIAI、AI下降(P0.01,P0.05)。(2)5周齡果蠅心臟功能的M-mode心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果與Hand Gla4/+組相比,相同干預(yù)條件Handnmnat RNAi組FS下降(P0.001),DD、SD均增加(P0.001);Handnmnat HA-C組、Handnmnat WR-C組和Handnmnat H30A-C組較Handnmnat RNAi-C組FS增加(P0.05,P0.001,P0.001);與Handnmnat HA組相比,相同干預(yù)條件Handnmnat H30A組FS增加(P0.05,P0.01);與Hand Gla4/+-C組相比,Handnmnat RNAi-C組、Handnmnat HA-C組、Handnmnat H30A-C組AI增加(P0.05),Handnmnat WR-C組AI下降(P0.05);Handnmnat WR-C組、Handnmnat H30A-C組較Handnmnat HA-C組SIAI下降(P0.001)。除Handnmnat HA組外,Hand Gla4/+-E組、Handnmnat RNAi-E組、Handnmnat WR-E組、Handnmnat H30A-E組較相同遺傳背景C組果蠅FS增加(P0.05);Handnmnat RNAi-E組、Handnmnat HA-E組、Handnmnat WR-E組、Handnmnat H30A-E組較相同遺傳背景C組果蠅AI下降(P0.05)。3.3隨年齡增加果蠅攀爬指數(shù)檢測(cè)結(jié)果隨年齡增加,E組果蠅攀爬指數(shù)逐漸下降。從3周齡開始,C組果蠅隨年齡增加攀爬指數(shù)逐漸下降。與1W-Hand Gla4/+-C組相比,1W-Hand Gla4/+-E攀爬指數(shù)增加;運(yùn)動(dòng)前2周,Handnmnat RNAi-E較Handnmnat RNAi-C攀爬指數(shù)升高;Handnmnat HA-E組在連續(xù)3周運(yùn)動(dòng)周較同齡Handnmnat HA-C組果蠅攀爬指數(shù)升高;隨后周齡,Hand Gla4/+E組、Handnmnat RNAi-E組、Handnmnat HA-E組攀爬指數(shù)始終低于相同遺傳背景C組。Handnmnat WR-E組和Handnmnat H30A-E組攀爬指數(shù)低于相同遺傳背景C組。3.4果蠅生命周期檢測(cè)結(jié)果與Hand Gla4/+-C組相比,Handnmnat WR-C組、Handnmnat H30A-C組存活曲線右移、上移;Handnmnat RNAi-C組較Hand Gla4/+-C組、Handnmnat HA-C組、Handnmnat WR-C組、Handnmnat H30A-C組存活曲線左移、下移,且中位生存期縮短(P0.001);從第40天齡(6周齡)開始,Handnmnat WR-C組存活曲線較Handnmnat HA-C組右移、上移,且中位生存期延長(zhǎng)(P0.01)。與Hand Gla4/+-C組相比,Hand Gla4/+-E組中位生存期延長(zhǎng)(P0.05);與Handnmnat RNAi-C組相比,Handnmnat RNAi-E組存活曲線右移、上移,且中位生存期延長(zhǎng)(P0.01);與Handnmnat HA-C組相比,Handnmnat HA-E組中位生存期縮短(P0.01);Handnmnat WR-C組、Handnmnat H30A-C組存活曲線較相同遺傳背景E組變化不大。4結(jié)論4.1 Nmnat在維持心臟正常收縮功能和節(jié)律方面發(fā)揮重要作用。4.2較早年齡段運(yùn)動(dòng)能有效改善果蠅因Nmnat基因敲減引起的心臟收縮功能下降和收縮間期節(jié)律紊亂,且對(duì)心肌Nmnat基因敲減、過(guò)表達(dá)、失去酶活性的中老齡果蠅心臟收縮功能下降和心律失常有很好的減緩作用。4.3較早年齡段運(yùn)動(dòng)使Nmnat基因正常表達(dá)、Nmnat基因敲減、Nmnat基因過(guò)表達(dá)果蠅運(yùn)動(dòng)能力在生命早期有所提高,表現(xiàn)出Nmnat表達(dá)上調(diào)果蠅更高的運(yùn)動(dòng)適應(yīng)性,而隨年齡增加能量代謝下降導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)效果減弱。4.4較早年齡段實(shí)行運(yùn)動(dòng)干預(yù)能有效延長(zhǎng)Nmnat基因差異表達(dá)果蠅中位生存期,可能與運(yùn)動(dòng)上調(diào)果蠅體內(nèi)NAD+水平延緩衰老進(jìn)程有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶 規(guī)律運(yùn)動(dòng) 心臟收縮 心臟節(jié)律 衰老
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：G804.2
【目錄】：

• 摘要4-9
• ABSTRACT9-17
• 1 前言17-20
• 2 材料與方法20-27
• 2.1 果蠅品系及飼養(yǎng)20
• 2.2 主要儀器與試劑20-21
• 2.2.1 主要儀器20-21
• 2.2.2 主要試劑21
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法21-26
• 2.3.1 果蠅雜交方法與分組21
• 2.3.2 果蠅運(yùn)動(dòng)方案21-22
• 2.3.3 指標(biāo)檢測(cè)及其方法22-26
• 2.4 質(zhì)量控制26
• 2.4.1 果蠅飼養(yǎng)條件控制26
• 2.4.2 運(yùn)動(dòng)過(guò)程控制26
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 3.1 果蠅心臟Nmnat基因mRNA表達(dá)檢測(cè)結(jié)果27-28
• 3.2 果蠅心臟功能的M-mode心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果28-30
• 3.2.1 3 周齡果蠅心臟功能的M-mode心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果28-29
• 3.2.2 5 周齡果蠅心臟功能的M-mode心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果29-30
• 3.3 隨年齡增加果蠅攀爬指數(shù)測(cè)量結(jié)果30-31
• 3.4 果蠅生命周期測(cè)量結(jié)果31-33
• 4 分析與討論33-38
• 4.1 果蠅心臟Nmnat基因差異表達(dá)對(duì)收縮功能和節(jié)律的影響33-34
• 4.2 規(guī)律運(yùn)動(dòng)對(duì)果蠅心臟功能、運(yùn)動(dòng)能力及生命周期的影響34-35
• 4.3 規(guī)律運(yùn)動(dòng)對(duì)Nmnat基因差異表達(dá)果蠅收縮功能和節(jié)律的影響35-36
• 4.4 規(guī)律運(yùn)動(dòng)對(duì) Nmnat 基因差異表達(dá)果蠅運(yùn)動(dòng)能力的影響36-37
• 4.5 規(guī)律運(yùn)動(dòng)對(duì)Nmnat基因差異表達(dá)果蠅生命周期的影響37-38
• 5 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 綜述44-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 常見縮略詞表（中英文對(duì)照）52-53
• 致謝53

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 夏曉璇;規(guī)律運(yùn)動(dòng)對(duì)Nmnat基因差異表達(dá)中老齡果蠅心臟功能的影響[D];湖南師范大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：603351