MicroRNAs簡稱miRNAs,是生物體內的一組具有高度保守性的非編碼RNA。研究發(fā)現(xiàn)MicroRNAs可以調控細胞的增殖、分化、凋亡等生命現(xiàn)象,亦是迄今為止最重要的心血管生理功能調控分子。細胞自噬(autophagy)是生命體普遍存在的一種代謝途徑,是一種高度保守的分解代謝過程,通過自噬溶酶體途徑清除受損細胞器和蛋白聚集物,并將其產(chǎn)物循環(huán)利用來維持細胞內的穩(wěn)態(tài)。已有研究指出細胞自噬可調節(jié)運動性心肌肥大。運動性心肌肥大是心肌細胞及其間質細胞受機械牽張或生長因子刺激后,心肌細胞內與細胞生長增殖有關基因的表達發(fā)生變化的一種運動引起的適應性反應。已有研究表明,miR-26b-5p在運動性心肌肥大的形成中扮演著重要角色,然而其具體調控機制尚不完善。研究目的:本研究旨在探討miR-26b-5p在運動性心肌肥大中的表達情況及其調控作用,以及確定miR-26b-5p通過靶基因ULK1調控運動性心肌肥大的分子機制。研究方法:選取24只6周齡清潔級雌性Wistar大鼠,隨機分成安靜對照組(CON,n=12)、運動性心肌肥大模型組(EX,n=12)。安靜組大鼠普通籠內飼養(yǎng),不進行任何運動。模型組大鼠參...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
論文資助說明
摘要
ABSTRACT
符號說明
第1章 文獻綜述
    1.1 運動性心肌肥大生理學研究進展
        1.1.1 運動性心肌肥大的類型
        1.1.2 生理性心肌肥大與病理性心肌肥大的比較研究進展
    1.2 MIRNA的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 miRNA的命名
        1.2.2 miRNA的特征
        1.2.3 miRNA的作用機制
        1.2.4 miRNA參與調節(jié)心肌肥大機制研究進展
        1.2.5 miRNA與運動性心肌肥大相關誘導因子
    1.3 自噬的研究進展
        1.3.1 自噬的概念及類型
        1.3.2 自噬的作用機制
        1.3.3 自噬與miRNA研究進展
        1.3.4 自噬與運動性心肌肥大研究進展
    1.4 展望
第2章 實驗部分
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 過表達miR-26b-5p腺病毒和干擾表達miR-26b-5p腺病毒
        2.1.4 主要實驗試劑
        2.1.5 主要實驗試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實驗動物的飼養(yǎng)與動物模型的建立
    2.3 實驗動物的取材
        2.3.1 大鼠心肌組織取材
        2.3.2 大鼠心肌形態(tài)學檢測
        2.3.3 大鼠心肌組織蛋白的提取
        2.3.4 大鼠心肌組織RNA的提取
    2.4 H9C2 心肌細胞的培養(yǎng)
        2.4.1 H9C2 心肌細胞換液
        2.4.2 H9C2 心肌細胞傳代
        2.4.3 H9C2 心肌細胞凍存
        2.4.4 H9C2 心肌細胞復蘇
    2.5 MIR-26B-5P腺病毒感染細胞
    2.6 實時熒光定量PCR實驗
        2.6.1 細胞RNA提取
        2.6.2 反轉錄
        2.6.3 RT-qPCR反應
        2.6.4 miRNA的 RT-qPCR反應
    2.7 WESTERN BLOT實驗
        2.7.1 細胞總蛋白的提取
        2.7.2 蛋白濃度測定
        2.7.3 SDS-PAGE電泳
        2.7.4 轉膜
        2.7.5 免疫印跡及化學發(fā)光
    2.8 細胞免疫熒光實驗
    2.9 生物信息學預測靶基因
    2.10 統(tǒng)計學分析
第3章 實驗結果
    3.1 運動性心肌肥大動物模型的評價
        3.1.1 運動10 周后大鼠全心指數(shù)、左室指數(shù)的變化
        3.1.2 運動10 周后大鼠心肌細胞形態(tài)變化
        3.1.3 運動10 周后大鼠超聲心動圖像分析
        3.1.4 運動10 周后大鼠心肌組織ANP、α-MHC、β-MHC、α-actin mRNA表達水平的變化
    3.2 運動性心肌肥大動物模型中miR-26b-5p的表達變化
        3.2.1 基因芯片分析miR-26b-5p表達
        3.2.2 運動10 周后大鼠心肌組織miR-26b-5p表達水平
    3.3 運動性心肌肥大動物模型心肌組織自噬水平的變化
        3.3.1 透射電鏡觀察運動10 周后大鼠心肌組織自噬小體
        3.3.2 運動10 周后大鼠心肌組織LC3、Beclin1 蛋白和mRNA表達水平的變化
        3.3.3 運動10 周后大鼠心肌組織ULK1 蛋白和mRNA表達水平的變化
    3.4 生物信息學預測MIR-26B-5P的靶基因
    3.5 MIR-26B-5P通過靶向ULK1 調控運動性心肌肥大
        3.5.1 過表達miR-26b-5p的重組腺病毒感染H9C2 心肌細胞
        3.5.2 過表達miR-26b-5p腺病毒感染H9C2 心肌細胞中ULK1 表達水平變化
        3.5.3 干擾表達miR-26b-5p腺病毒感染H9C2 心肌細胞的結果
    3.6 ULK1與MIR-26B-5P的靶向關系驗證
        3.6.1 psiCHECK-2/ULK1 野生、突變型質粒構建成功
        3.6.2 ULK1是miR-26b-5p直接調控的靶基因
    3.7 過表達、干擾表達MIR-26B-5P后心肌自噬變化
第4章 討論與分析
    4.1 運動性心肌肥大動物模型的建立與評價
    4.2 運動性心肌肥大中自噬的變化
    4.3 miR-26b-5p靶作用于自噬相關基因ULK1
    4.4 運動通過影響miR-26b-5p調控運動性心肌肥大的可能機制
第5章 結論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的論文及獲得的獎勵
致謝



本文編號：3885032