本文關(guān)鍵詞：TGF-β-Smad信號通路相關(guān)細(xì)胞因子在小鼠非酒精性脂肪肝干預(yù)中的差異表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:探討有氧運動訓(xùn)練和中藥干預(yù)對高脂膳食誘導(dǎo)下小鼠非酒精性脂肪肝形成的抑制作用,初步揭示有氧運動訓(xùn)練和中藥對改善小鼠非酒精性肝臟損傷的機(jī)制,并探討相關(guān)細(xì)胞因子的關(guān)聯(lián)作用。研究方法:實驗對象及分組:KM種雄性小鼠80只,體重18~22g,室溫23℃到25℃自然光照飼養(yǎng)。實驗小鼠購入后,通過高糖高脂膳食灌胃建立小鼠非酒精性脂肪肝模型。每天固定時間進(jìn)行灌胃,每日1次(下午13時),每周6次。通過5周灌胃構(gòu)建小鼠非酒精性肝損傷模型。建模結(jié)束后隨機(jī)選取模型小鼠5只,取新鮮肝組織進(jìn)行HE染色,檢驗細(xì)胞中脂滴著色情況。從造模成功所有小鼠中,淘汰傷病小鼠,保留60只。隨機(jī)分成5組,每組12只,各組分別為:陰性對照組(OJ)、陽性對照組(Y)、中藥組(M)、有氧運動組(E)、中藥聯(lián)合有氧運動組(E+M)。實驗方案:有氧運動干預(yù)采用水平動物跑臺方式,前3天為適應(yīng)性跑臺訓(xùn)練,每次30min,速度8m/min。第4-6天運動時間逐漸遞增至60min,速度12m/min(Pm15:00-17:00),維持此運動量持續(xù)訓(xùn)練7周,每周訓(xùn)練6次,運動訓(xùn)練時驅(qū)趕停止不動的小鼠已達(dá)到額定訓(xùn)練負(fù)荷。中藥干預(yù)的最佳有效劑量通過按人和小鼠的體表面積折算得出等效劑量,并通過口灌胃進(jìn)行干預(yù),灌胃前配備成0.5ml灌胃(藥劑濃度為0.2Λg/g)。中藥聯(lián)合運動組劑量:按200ml/kg體重在實驗前配備成所需要濃度進(jìn)行灌服給藥(總體積0.5ml)。陰性對照組、跑臺組采用相同時間灌服同體積生理鹽水進(jìn)行干預(yù),陽性對照組主要使用水飛薊賓懸浮液進(jìn)行灌服,每次灌胃劑量按人與小鼠體表面積折算0.5ml/次(相當(dāng)于人體用藥的20倍)。所有需要進(jìn)行灌胃干預(yù)的小鼠均灌服7周,每周6次。實驗期間記錄小鼠的行為學(xué)變化。7周干預(yù)實驗結(jié)束后,小鼠禁食過夜,隨后將肝組織從體內(nèi)剝離進(jìn)行取材,對各個干預(yù)組的小鼠肝臟組織情況采用顯微結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)觀察,評價各個干預(yù)小組的小鼠肝組織損傷情況;通過免疫組化檢測法來評定小鼠肝組織tgf-β1生長因子的蛋白表達(dá)水平情況;rt-pcr法檢測肝組織中smad3、smad4mrna表達(dá)程度;血生化檢測分析血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alt)、甘油三酯(tg)、以及總膽固醇(tc)、和超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)在血清中的含量水平。研究結(jié)果:(1)he染色顯示:陰性對照組脂肪病變程度最為明顯,小鼠肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量纖維化增生,肝細(xì)胞發(fā)生變性情況嚴(yán)重,有大面積細(xì)胞病變壞死出現(xiàn),細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)變形排列混亂;有氧運動組與陰性對照組肝脂肪病變程度進(jìn)行比較評分有降低;任可見少量肝細(xì)胞纖維化,肝細(xì)胞變性情況;中藥干預(yù)組和運動干預(yù)組與陰性對照組相比,肝組織細(xì)胞任然有較少病變細(xì)胞分布出現(xiàn),肝小葉組織結(jié)構(gòu)有所改變,但肝細(xì)胞排列結(jié)構(gòu)欠整齊;陽性干預(yù)組和中藥聯(lián)合運動干預(yù)組較陰性組對比,肝組織無明顯壞死情況,肝小葉組織結(jié)構(gòu)基本正常,肝細(xì)胞排列較整齊。(2)血清學(xué)結(jié)果:通過單因素方差分析法,將有氧運動組、中藥組、陽性對照組和有氧運動聯(lián)合中藥組與陰性對照組分別進(jìn)行兩兩比較,可知在不同的干預(yù)方式下小鼠血清中ALT、AST和TG、TC、SOD、MDA水平較陰性組都有不同程度降低(P0.05)。與陰性組對比有氧運動聯(lián)合中藥組能明顯降低高脂飲食小鼠肝臟中丙二醛(MDA)的含量的趨勢,(p0.01),從而使肝臟MDA含量進(jìn)一步降低。與陰性組相比有氧運動訓(xùn)練聯(lián)合中藥組,有顯著提高高脂膳食大鼠肝臟氧化物歧化酶(SOD)的活性作用(p0.01)。中藥聯(lián)合有氧運動組與陰性對照組相比ALT、AST和TG、TC檢測指標(biāo)有明顯下降趨勢(P0.05)說明兩者間有協(xié)同作用,ALT,AST、TG、TC的活性表達(dá)程度是進(jìn)一步降低了。(3)免疫組化檢測顯示:各干預(yù)小組中TGF-β1生長因子蛋白表達(dá)水平均低于陰性對照組,其中以中藥聯(lián)合有氧運動組蛋白表達(dá)水平差異最大(P0.01)。(4)RT-PCR結(jié)果顯示:通過檢測,小鼠肝組織中smad3、smad4 mRNA表達(dá)水平由高到低排名依次為:陰性對照組、有氧運動組、陽性組、中藥組以及中藥聯(lián)合有氧運動組。其中中藥聯(lián)合有氧運動組表達(dá)水平最低(P0.01)。結(jié)論:通過中等強(qiáng)度有氧運動同時和中藥配合干預(yù),能較大程度改善小鼠非酒精性脂肪肝中TGF-β-Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通道相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),增強(qiáng)非酒精性肝損傷小鼠的免疫功能,使小鼠非酒精性脂肪肝損傷得以改善,為臨床治療提供有力依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：中藥 有氧運動 非酒精性肝損傷 TGF-β smad3 smad4
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：G804.2
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-14
• 1 前言14-18
• 2 實驗材料與方法18-24
• 2.1 實驗對象18
• 2.2 主要試劑與儀器18-20
• 2.2.1 主要試劑18-19
• 2.2.2 主要儀器19-20
• 2.3 實驗方法20-23
• 2.3.1 實驗對象分組及模型的構(gòu)建20
• 2.3.2 給藥方案20
• 2.3.3 運動方案20
• 2.3.4 樣品采集與處理20-21
• 2.3.5 病理學(xué)觀察與血清學(xué)指標(biāo)檢測21
• 2.3.6 免疫組化21-22
• 2.3.7 Realtime-PCR檢測TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA的表達(dá)22
• 2.3.8 質(zhì)量控制22-23
• 2.4 統(tǒng)計學(xué)分析23-24
• 3 實驗結(jié)果24-32
• 3.1 一般情況24
• 3.2 肝臟形態(tài)學(xué)觀察24-25
• 3.2.1 模型制備情況24-25
• 3.2.2 運動和藥物干預(yù)階段后25
• 3.3 血生化指標(biāo)25-32
• 3.3.1 肝指數(shù)變化25-26
• 3.3.2 各干預(yù)組對NAFLD小鼠肝組織中SOD、MDA的含量水平以及變化影響26-27
• 3.3.3 各干預(yù)組對NAFLD小鼠血液中SOD、MDA的含量水平以及變化影響27-28
• 3.3.4 肝功能變化28
• 3.3.5 血液TC、TG變化28-29
• 3.3.6 各小鼠肝組織TGF-β免疫組化檢測29-30
• 3.3.7 Realtime PCR結(jié)果30-32
• 4 討論32-37
• 4.1 非酒精性脂肪肝與TGF-β信號通路相關(guān)因子32-34
• 4.1.1 非酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)制32
• 4.1.2 TGF-β家族在NAFLD中的調(diào)節(jié)作用32
• 4.1.3 Smad蛋白在TGF-β信號通路中的影響機(jī)制32-33
• 4.1.4 TGF-β信號通路在對抗肝纖維化中的機(jī)制作用33-34
• 4.2 有氧運動或中藥對NAFLD的干預(yù)效應(yīng)34-35
• 4.3 有待進(jìn)一步研究的問題35-37
• 5 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述41-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52

【相似文獻(xiàn)】

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊曉;;TGF-β/Smad信號通路維持組織穩(wěn)態(tài)的生理功能和機(jī)制[A];2012全國發(fā)育生物學(xué)大會摘要集[C];2012年

2 張浩;劉伏友;彭佑銘;劉映紅;廖琴;;TGF-β_1介導(dǎo)的Smad信號通路對人腹膜間皮細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)控[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

3 徐丹;龍庭鳳;柴燕杰;涂穎;顧華;何黎;;日光性角化病、鱗狀細(xì)胞癌中TGF-β/Smad信號通路因子及相關(guān)因子表達(dá)變化的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

4 徐丹;袁瑞紅;劉彤云;涂穎;顧華;何黎;;不同強(qiáng)度紫外線對日光性角化病中TGF-β/Smad信號通路及相關(guān)因子表達(dá)變化影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

5 張維溪;戴歡;賀孝良;方麗;趙瑞雪;李昌崇;;糖皮質(zhì)激素調(diào)控哮喘大鼠氣道重塑中TGF-β 1/Smad信號通路的研究[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

6 鄧穎;于力;張瑤;郝志宏;;福辛普利對腎小球系膜細(xì)胞TGF-β1/Smad信號通路的干預(yù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

7 鄧穎;于力;溫捷;;TGF-β/Smad信號通路在腎小球系膜細(xì)胞的表達(dá)及ACEI對其影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（下冊）[C];2012年

8 劉佳琦;胡大海;張戰(zhàn)鳳;官浩;折濤;張軍;白曉智;;IFN-γ對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TGF-β/Smad信號通路作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

9 張維溪;李昌崇;賀孝良;戴歡;方麗;趙瑞雪;;TGF-β 1/Smad信號通路在哮喘氣道重塑中的作用[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

10 祝勝郎;余學(xué)清;孫遼;婁寧;陳文芳;董秀清;;晚期糖基化終產(chǎn)物通過p38MAPK依賴和非依賴途徑活化Smad信號通路并誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 魏瀟凡;Kindlin-2通過促進(jìn)TGF-β-Smad信號通路加速腎臟纖維化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

2 郭慧慧;櫛孔扇貝TGF-β/Smad信號通路基因的克隆、表達(dá)分析及生長性狀相關(guān)SNP位點篩查[D];中國海洋大學(xué);2012年

3 朱智能;FOXQ1介導(dǎo)TGF-β1/Smad信號通路調(diào)控膀胱癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳紅兵;RNF111通過調(diào)控TGF-β/Smad信號通路影響非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的表觀機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2015年

2 李楠;維藥異常黑膽質(zhì)成熟劑對增生性瘢痕增殖與轉(zhuǎn)化生長因子β/Smad信號通路的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

3 朱彥;TGF-β-Smad信號通路相關(guān)細(xì)胞因子在小鼠非酒精性脂肪肝干預(yù)中的差異表達(dá)[D];湖南師范大學(xué);2016年

4 魏緒法;泡球蚴感染中期小鼠纖維化肝組織中TGF-β1/Smad信號通路的表達(dá)和意義[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

5 劉佳琦;干擾素-γ對瘢痕成纖維細(xì)胞TGF-β/Smad信號通路的作用和機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

6 魏翠蕾;TGF-β1/Smad信號通路蛋白、MMP-14與間充質(zhì)干細(xì)胞在血管損傷中的表達(dá)及意義[D];石河子大學(xué);2014年

7 劉璐;陽和平喘顆粒對哮喘大鼠氣道黏液高分泌的干預(yù)作用及對TGF-β1/Smad信號通路的影響[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2014年

8 張琳;TGF-β1/Smad信號通路在糖尿病大鼠心肌組織中的表達(dá)變化及干預(yù)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

9 周雪琴;SUMO化修飾對高糖刺激的腎系膜細(xì)胞TGF-β/Smad信號通路的調(diào)控研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2013年

10 蘇宏;Smad信號通路及CTGF在依那普利抑制高肺血流性肺動脈高壓形成中的作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：TGF-β-Smad信號通路相關(guān)細(xì)胞因子在小鼠非酒精性脂肪肝干預(yù)中的差異表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：317476