【摘要】：研究目的:建立電脈沖刺激模型,觀察電脈沖刺激對C2C12細(xì)胞中線粒體結(jié)構(gòu)、功能和自噬的影響,通過蛋白印跡法、免疫熒光等實(shí)驗(yàn)技術(shù)探討電脈沖刺激對骨骼肌C2C12細(xì)胞中線粒體自噬的機(jī)制及FUNDC1在其中的作用。研究方法:C2C12小鼠骨骼肌成肌細(xì)胞珠復(fù)蘇,傳代培養(yǎng)2-3代,分為對照組(C)、DMSO組(D)、AICAR組(A)、Compound C組(Co)、FK506組(F)、電脈沖刺激組(E)、電脈沖刺激+Compound C組(E+Co)、電脈沖刺激+FK506組(E+F),干預(yù)后收集細(xì)胞并進(jìn)行檢測。檢測線粒體定量酶CS含量、生物鏈復(fù)合體COX-I蛋白、生物合成標(biāo)志PGC-1α蛋白,分析線粒體數(shù)量、功能的變化;通過Western blot檢測AMPKα、p-AMPKα(Thr172)、ULK1、p-ULK1(Ser555)蛋白表達(dá),分析能量代謝指標(biāo)的變化;通過免疫熒光分別觀察LC3/COXIV、LC3/FUNDC1、FUNDC1/COXIV共定位情況;通過Western blot印跡檢測線粒體自噬相關(guān)蛋白LC3、p62、FUNDC1、PGAM5的表達(dá),并驗(yàn)證FUNDC1在其中的作用。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析處理。研究結(jié)果:(1)15V,1Hz,2ms、1h電脈沖刺激(EPS)不會引起C2C12細(xì)胞內(nèi)線粒體定量酶CS含量增加(p0.05);會引起線粒體生物合成蛋白PGC-1α、呼吸鏈復(fù)合體COX-I蛋白表達(dá)顯著增加(p0.05);引起自噬相關(guān)蛋白LC3表達(dá)顯著增加和p62蛋白表達(dá)顯著減少(p0.05)。(2)濃度6uM的FK506在24h時不會降低FUNDC1蛋白表達(dá)(p0.05),在48h和72h時可以降低FUNDC1蛋白表達(dá)(p0.01),48h時細(xì)胞活性較高。(3)通過使用FK506抑制FUNDC1蛋白可引起其磷酸酶PGAM5及自噬相關(guān)蛋白LC3表達(dá)下降,p62表達(dá)增加,引起FUNDC1/COXIV和LC3/FUNDC1免疫熒光共定位的水平降低;EPS可引起FUNDC1和LC3蛋白表達(dá)顯著增加,p62蛋白表達(dá)顯著降低(p0.05),免疫熒光雙染LC3/COXIV、FUNDC1/COX-IV、LC3/FUNDC1共定位的水平均顯著升高(p0.01);EPS后給予FK506干預(yù)仍可顯著升高FUNDC1、LC3蛋白表達(dá),降低p62蛋白表達(dá)(p0.05),提高免疫熒光雙染LC3/COXIV、FUNDC1/COXIV、LC3/FUNDC1共定位水平(p0.01),但蛋白及免疫熒光結(jié)果表達(dá)低于EPS作用效果。(4)AMPK激活劑AICAR可使PGC-1α、COX-I蛋白表達(dá)顯著升高(p0.05),使AMPKα、p-AMPKα(Thr172)、p-ULK1(Ser555)、LC3、p62蛋白表達(dá)升高,使LC3/COXIV共定位水平略有下降(p0.05);EPS可使PGC-1α、COX-I、AMPKα、p-AMPKα(Thr172)、ULK1、p-ULK1(Ser555)、FUNDC1、LC3表達(dá)顯著升高,p62蛋白表達(dá)顯著下降(p0.05),顯著提高LC3/COX-IV、FUNDC1/COX-IV、LC3/FUNDC1共定位水平(p0.01);EPS+Compound C可使AMPKα、p-AMPKα(Thr172)、ULK1、p-ULK1(Ser555)、FUNDC1、LC3表達(dá)顯著升高,COX-I、p62蛋白表達(dá)顯著下降(p0.05),PGC-1α蛋白表達(dá)略有升高,并顯著升高LC3/COXIV、FUNDC1/COXIV、LC3/FUNDC1共定位水平(p0.05)。研究結(jié)論:(1)電脈沖刺激C2C12細(xì)胞模擬運(yùn)動能夠誘導(dǎo)線粒體自噬(2)FK506可以有效的降低FUNDC1蛋白的表達(dá)(3)電脈沖刺激通過激活A(yù)MPK—ULK1通路模擬運(yùn)動誘導(dǎo)線粒體自噬的發(fā)生(4)FUNDC1通過AMPK—ULK1途徑參與電脈沖刺激誘導(dǎo)的線粒體自噬。
【圖文】：

圖 2.1 FUNDC1 在低氧和饑餓條件下的調(diào)控機(jī)制動力學(xué)機(jī)制中，線粒體定位的 RING-finger E3 連接酶rane-associatedringfinger(C3HC4)5，MARCH5）是一3 連接酶，通過兩種途徑抑制線粒體的分裂：（1）DNM和裂變受體 FIS1 和 MIEF2 的降解抑制線粒體 DNM15 能夠通過特異性誘導(dǎo) FUNDC1 降解在線粒體形態(tài)和賴氨酸 119（K-119）在低氧條件下對 FUNDC1 的泛素寡聚體，促進(jìn)其與 FUNDC1 的相互作用，應(yīng)對在線粒傷。隨著缺氧時間的延長，F(xiàn)UNDC1 殘基會經(jīng)歷去磷的泛素化和 FUNDC1 的降解，預(yù)防發(fā)生過度或突發(fā)的粒體的正常功能。 與運(yùn)動誘導(dǎo)線粒體自噬的關(guān)系

并在Ser17位點(diǎn)處磷酸化，增強(qiáng)與LC3之間的相互作用，并且在ULK1和FUNDC結(jié)合缺陷的突變體細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，ULK1 轉(zhuǎn)位到線粒體以及線粒體自噬受到影響[86此外，去表達(dá)的 Atg5 蛋白減少了 FUNDC1 介導(dǎo)的線粒體內(nèi)膜蛋白 TIM23，并降低了 LC3-I 到 LC3-II 的轉(zhuǎn)化，表明 FUNDC1 可以依賴 Atg5 介導(dǎo)的線粒體自噬。去表達(dá) BECN1 也抑制饑餓和 mTOR 誘導(dǎo)的自噬[87,88]，而去表達(dá)的 BECN1 并不影響 FUNDC1 誘導(dǎo)的線粒體自噬[89]。
【學(xué)位授予單位】：北京體育大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：G804.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 牟婕;馮文靜;王珊;馮美蘋;毛擁軍;;自噬調(diào)控衰老的研究進(jìn)展[J];中華老年多器官疾病雜志;2019年01期

2 李黎;季漪;李文婷;馬艷霞;李沐涵;吳勉華;;基于細(xì)胞自噬的中醫(yī)藥抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥雜志;2019年01期

3 韓蘇夏;蔡夢嬌;;自噬在腫瘤治療策略中的角色[J];西部醫(yī)學(xué);2018年09期

4 周岐鳴;劉洋;季光;宋海燕;;調(diào)節(jié)自噬改善非酒精性脂肪性肝病的藥物研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2018年10期

5 李曉瓊;何玲玲;李新毅;;自噬與中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病研究進(jìn)展[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2018年10期

6 馬文科;戴舒惠;羅鵬;楊悅凡;費(fèi)舟;;線粒體自噬的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2017年06期

7 付婉;董笛;趙穎;;自噬的相關(guān)分子機(jī)制[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2017年05期

8 方聰聰;毛善平;董慧敏;劉寶輝;王舜;;線粒體自噬與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];卒中與神經(jīng)疾病;2017年02期

9 李旭卉;吳習(xí)習(xí);張凱;羅海霞;李敏;;線粒體自噬與癌癥關(guān)系的研究進(jìn)展[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2017年09期

10 陳延斌;黃建安;;自噬在呼吸系統(tǒng)的研究現(xiàn)狀[J];中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志;2017年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 肖伊寧;呂佩源;;選擇性自噬的研究進(jìn)展[A];7th中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會全國中青年神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會暨第十屆全國神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病與腦脊液細(xì)胞學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2014年

2 胡成楓;胡春蘭;陳良標(biāo);;自噬在斑馬魚細(xì)胞冷應(yīng)激過程中的作用機(jī)制探究[A];2017年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2017年

3 肖伊寧;呂佩源;;選擇性自噬的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2014年

4 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強(qiáng);劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

5 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點(diǎn)研討會論文摘要集[C];2008年

6 余慧芬;唐李;李妍;;自噬現(xiàn)象對腫瘤發(fā)生影響的研究進(jìn)展[A];2017第七屆泛環(huán)渤海生物化學(xué)與分子生物學(xué)會學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2017年

7 王菲菲;邱學(xué)敏;王凌;;自噬對骨代謝的調(diào)節(jié)作用[A];第9屆中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會婦產(chǎn)科專業(yè)委員會第二次學(xué)術(shù)會議論文集[C];2017年

8 申森森;李林楠;徐林楠;白玉;劉虎威;;基于氣相色譜-高分辨質(zhì)譜的饑餓誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞自噬過程的代謝組學(xué)研究[A];第21屆全國色譜學(xué)術(shù)報告會及儀器展覽會會議論文集[C];2017年

9 任栓成;倪娜娜;胡志安;;睡眠覺醒期神經(jīng)元自噬活動的變化[A];中國睡眠研究會第九屆學(xué)術(shù)年會匯編[C];2016年

10 蔣緒順;;自噬在棕櫚酸誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制[A];2016年中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會腎臟疾病專業(yè)委員會學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2016年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 李潔尉　通訊員 周飛;花櫚木通過“自噬”殺死癌細(xì)胞[N];科學(xué)時報;2011年

2 王建新 主持;“自噬”的快車剛剛啟動[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2016年

3 記者 周潔;解密“自噬”，，抗癌治病更近一步[N];河北日報;2016年

4 記者 陸琦 見習(xí)記者 谷雙雙;細(xì)菌通過誘導(dǎo)線粒體自噬求存活[N];中國科學(xué)報;2019年

5 本報記者 房琳琳;“自噬機(jī)制”帶來對抗衰老新希望[N];科技日報;2016年

6 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機(jī)制[N];新清華;2012年

7 本報實(shí)習(xí)生 劉如楠 記者 李晨陽;最新研究揭秘植物是怎樣衰老的[N];中國科學(xué)報;2019年

8 本報首席記者 唐聞佳;上海與新科諾獎得主頗有學(xué)術(shù)緣[N];文匯報;2016年

9 記者 陶婷婷;成功揭示代謝降解調(diào)控新機(jī)制[N];上海科技報;2013年

10 記者 白毅;浙大二院發(fā)現(xiàn)大氣顆粒污染誘導(dǎo)呼吸道自噬性損傷新機(jī)制[N];中國醫(yī)藥報;2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鄭艷榕;軸突線粒體回運(yùn)促進(jìn)的神經(jīng)元線粒體自噬在缺血性神經(jīng)損傷中的保護(hù)作用研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 毛立;外泌體和自噬在山羊副流感病毒3型感染中的作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

3 王現(xiàn)濤;MiR-30e-3p調(diào)控的自噬在冠狀動脈微栓塞致心肌損傷中的作用及機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

4 張丹;黃蜀葵花總黃酮通過NF-κB信號通路調(diào)控自噬治療克羅恩病的作用機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

5 孫蘭弟;基于提高親電性的策略設(shè)計天然導(dǎo)向的抗炎試劑和自噬激活劑及其作用機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

6 楊烽;Klotho對糖尿病腎臟病中細(xì)胞自噬作用的影響及其機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

7 曹文婷;miR-125b-5p在UVB影響SLE自噬中的作用機(jī)制[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2018年

8 孫曉琪;雌二醇通過G蛋白偶聯(lián)雌激素受體30 (GPR30)/ERK1/2信號通路調(diào)節(jié)MC3T3-E1細(xì)胞線粒體自噬的分子機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

9 劉永一;自噬在棕櫚酸誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

10 陳樹東;慢性頸脊毮壓迫的臨床轉(zhuǎn)歸及自噬在脊毮運(yùn)動神經(jīng)元中的作用[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊娟娟;家蠶Bmo-miR-34在脂肪體自噬發(fā)生過程中的功能研究[D];南陽師范學(xué)院;2019年

2 黃燕寧;錳通過BNIP3介導(dǎo)的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元線粒體自噬[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

3 楊雄;兔自體動靜脈瘺術(shù)后內(nèi)膜增生中的自噬現(xiàn)象[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

4 侯含;PVY侵染對煙草過氧化物酶體自噬的調(diào)控研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

5 張陽陽;自噬基因ATG13在人類紅系發(fā)育過程中的功能研究[D];鄭州大學(xué);2019年

6 王遠(yuǎn)卓;與家蠶自噬相關(guān)的長鏈非編碼RNA的篩選和功能初探[D];南陽師范學(xué)院;2019年

7 高久翔;FUNDC1在運(yùn)動誘導(dǎo)骨骼肌線粒體自噬中的作用機(jī)制[D];北京體育大學(xué);2019年

8 楊永樂;見血封喉苷H誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞線粒體自噬機(jī)制研究[D];海南醫(yī)學(xué)院;2018年

9 王玉琳;自噬對PM_（2.5）誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎性小體活化的調(diào)控機(jī)制研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2019年

10 都沙沙;牙周炎對2型糖尿病大鼠胰腺組織自噬的影響及機(jī)制的初步研究[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號：2595695