本文關(guān)鍵詞：抗MUC1單克隆抗體制備及其MR納米探針的構(gòu)建與初步研究

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【摘要】：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,早期診斷有重要意義。目前,乳腺癌的分子診斷,尤其是基于單克隆抗體的診斷以其靶向性好,特異性高而備受關(guān)注。MUC1是一種在乳腺癌等惡性腫瘤細(xì)胞中高度表達(dá)的多形上皮粘蛋白,是一個重要的腫瘤相關(guān)抗原,而目前國內(nèi)并沒有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗MUC1單克隆抗體。因此,制備一種高特異性的,高親和力的抗MUC1單克隆抗體,并且經(jīng)與金磁納米顆粒耦聯(lián),應(yīng)用于乳腺癌活體分子成像臨床基礎(chǔ)研究,會為今后乳腺癌分子診斷的臨床應(yīng)用研究奠定重要基礎(chǔ)。目的本研究擬探討抗MUC1單抗及其納米探針的制備、鑒定及初步應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)過程分為兩個部分:1.制備并鑒定抗MUC1單克隆抗體,檢測其在乳腺癌免疫組化中的初步應(yīng)用;2.制備并鑒定靶向抗MUC1的MR納米探針,應(yīng)用3.0T磁共振設(shè)備檢測其在乳腺癌磁共振分子成像中的初步應(yīng)用的可行性。方法1.用合成的MUC1重復(fù)序列短肽與KLH蛋白偶聯(lián)后作為抗原免疫Balb/c小鼠,雜交瘤技術(shù)篩選出穩(wěn)定分泌單克隆抗體的細(xì)胞株。制備單克隆抗體,以ELISA、Western blot、流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光法對抗體進(jìn)行鑒定及亞類分析,用免疫組織化學(xué)染色方法將抗體應(yīng)用于人乳腺癌組織、良性纖維腺瘤、乳腺囊性增生癥及正常乳腺組織的臨床檢測。2.用研制的抗MUC1單克隆抗體,與金磁納米顆粒耦聯(lián),構(gòu)建MUC1特異性MR分子探針MUC1@Gold Mag,用流式細(xì)胞術(shù),透射電鏡,激光共聚焦顯微鏡等方法檢測其與乳腺癌細(xì)胞結(jié)合的特異性;應(yīng)用3.0T磁共振掃描儀,將乳腺癌細(xì)胞MCF-7和肝癌細(xì)胞Hep G-2這兩種細(xì)胞分別與MUC1@Gold Mag和無關(guān)抗體@Gold Mag交叉配對,對各組細(xì)胞行T2W1并分別測量其信號強(qiáng)度。建立MCF-7和Hep G-2荷瘤裸鼠模型,對兩組荷瘤裸鼠經(jīng)尾靜脈注射MUC1@Gold Mag和無關(guān)抗體@Gold Mag,分別在注射前、注射后6 h、12 h和24 h行MR掃描,觀察其對腫瘤信號T2W1的影響,分別測量其信號強(qiáng)度,探討其應(yīng)用于MR體內(nèi)成像的可行性,分析比較信號強(qiáng)度的差異性。結(jié)果1.獲得4株穩(wěn)定分泌抗MUC1的雜交瘤細(xì)胞株,第1株反應(yīng)性最強(qiáng),效價1:10以上。抗體亞型3株為Ig G1,1株為Ig M,輕鏈均為?型。經(jīng)Western blot、流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光、免疫組化檢測證實(shí)抗體與乳腺癌細(xì)胞MCF-7特異性結(jié)合,單克隆抗體檢測MUC1在乳腺癌組織與良性纖維瘤、囊性增生以及正常乳腺組織之間的表達(dá)存在顯著性差異(P0.01)。2.成功構(gòu)建MUC1特異性MR分子探針MUC1@Gold Mag,流式細(xì)胞術(shù),透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)MCF-7細(xì)胞與MUC1@Gold Mag特異性結(jié)合。MUC1@Gold Mag可顯著性降低MCF-7的T2W1信號。MCF-7荷瘤裸鼠注射MUC1@Gold Mag后,6 h、12 h、24 h腫瘤組織T2W1信號強(qiáng)度較平掃顯著降低(P0.05)。而Hep G-2荷瘤裸鼠在平掃和注射對比劑后6 h、12 h、24 h的腫瘤信號強(qiáng)度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論1.成功制備了抗MUC1單克隆抗體,經(jīng)檢測該抗體特異性強(qiáng),效價高。這為乳腺癌早期診斷和靶向治療的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。2.MUC1靶向性MR分子探針MUC1@Gold Mag具有良好的理化性質(zhì)和免疫活性,可特異性降低MCF-7細(xì)胞的T2W1信號,對活體乳腺癌組織具有靶向性的增強(qiáng)效果。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 MUC1 單克隆抗體 納米探針 MR成像
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-12
• 文獻(xiàn)回顧12-20
• 實(shí)驗(yàn)一 抗MUC1單克隆抗體的制備鑒定與初步應(yīng)用研究20-33
• 1 前言20
• 2 材料20-21
• 3 方法21-27
• 4 結(jié)果27-31
• 5 討論31-33
• 實(shí)驗(yàn)二 MR納米探針的構(gòu)建、鑒定及其體內(nèi)成像的初步研究33-42
• 1 前言33
• 2 材料33-34
• 3 方法34-37
• 4 結(jié)果37-41
• 5 討論41-42
• 小結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 附錄48-50
• 個人簡歷和研究成果50-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 閻洪彥,王立順;MUC1粘蛋白—腫瘤生物治療的新靶點(diǎn)[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2000年02期

2 孔君;劉箐;韓躍武;王天昌;劉金芝;;單克隆抗體制備技術(shù)的最新進(jìn)展及應(yīng)用前景[J];免疫學(xué)雜志;2011年02期

3 馬忠良,李振甫,張虹,王占民;抗乳腺癌單克隆抗體的制備及其應(yīng)用[J];四川腫瘤防治;2001年02期

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本文編號：702279