本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用于甜瓜DUS測(cè)試分子圖譜的構(gòu)建及遺傳多樣性分析

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【摘要】：甜瓜DNA指紋圖譜庫的建立對(duì)甜瓜品種純度及真實(shí)性鑒定、新品種權(quán)保護(hù)等有非常重要應(yīng)用價(jià)值,甜瓜遺傳多樣性的分析對(duì)雜種優(yōu)勢(shì)群劃分、種質(zhì)創(chuàng)新及新品種選育也有非常重要的指導(dǎo)意義。SSR標(biāo)記被認(rèn)為是指紋圖譜構(gòu)建最理想的標(biāo)記。本研究利用SSR標(biāo)記對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化,初次探討了多重SSR-PCR擴(kuò)增體系在甜瓜上的可行性,旨在提高鑒定效率及節(jié)省時(shí)間。在此基礎(chǔ)上,利用13份遺傳差異大的甜瓜種質(zhì)進(jìn)行核心引物的篩選,并通過核心引物對(duì)甜瓜種質(zhì)進(jìn)行指紋圖譜構(gòu)建、遺傳多樣性分析以及對(duì)甜瓜雜交組合進(jìn)行純度鑒定,主要研究結(jié)果如下:1.對(duì)PCR擴(kuò)增體系中的模板DNA、dNTPs、引物、Taq酶及Mg2+的濃度進(jìn)行梯度設(shè)計(jì),得到了最優(yōu)PCR擴(kuò)增體系,同時(shí)建立了適用于甜瓜的雙重SSR-PCR擴(kuò)增體系,使得SSR檢測(cè)效率提高了2倍,節(jié)省了成本。2.從174對(duì)SSR引物中篩選了22對(duì)核心引物,在13個(gè)甜瓜種質(zhì)中共擴(kuò)增了77個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),每對(duì)引物可以檢測(cè)到2~4條數(shù)目不等的多態(tài)性條帶,平均為3.5條,多態(tài)性信息含量(PIC)為0.737~0.839,平均0.806,22對(duì)引物中有18對(duì)分布在甜瓜的10對(duì)染色體上。3.利用22對(duì)核心引物構(gòu)建了52份甜瓜種質(zhì)的指紋代碼,并將其全部轉(zhuǎn)化為二維編碼,其中有7組具有相同指紋代碼的材料,總共涉及23份材料,其余29份甜瓜種質(zhì)的指紋代碼是唯一的。4.基于20個(gè)形態(tài)性狀的聚類分析結(jié)果顯示,遺傳相似系數(shù)為0.07~0.72,平均為0.39,遺傳相似系數(shù)大于0.07時(shí),所有甜瓜種質(zhì)可劃分為9大組群,且組群Ⅰ至組群Ⅳ的多樣性偏低,組群Ⅴ至組群Ⅸ的甜瓜種質(zhì)遺傳多樣性依次增高。5.基于22對(duì)核心引物聚類分析結(jié)果顯示,遺傳相似相系數(shù)在0.55~1.00,平均為0.78。當(dāng)遺傳相似系數(shù)大于0.55時(shí)可將95份甜瓜種質(zhì)分為薄皮甜瓜和厚皮甜瓜兩大類,同時(shí)這兩大類又可按不同變種分為不同的亞類。6.用74對(duì)SSR引物對(duì)16個(gè)甜瓜組合進(jìn)行篩選,獲得了10對(duì)表現(xiàn)出多態(tài)性和共顯性的引物,通過這些引物的不同組合可以將16個(gè)雜交組合鑒定出來,為保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)及實(shí)際應(yīng)用提供了有力支撐。
【關(guān)鍵詞】：甜瓜 核心引物 指紋圖譜 遺傳多樣性分析 純度鑒定
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S652;Q943.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-10
• 第一章 緒論10-19
• 1.1 甜瓜種質(zhì)資源的多樣性10-12
• 1.2 國(guó)內(nèi)外植物品種DUS測(cè)試的發(fā)展現(xiàn)狀12-14
• 1.2.1 植物新品種DUS測(cè)試的概述13
• 1.2.2 DUS測(cè)試方法13-14
• 1.2.3 DUS測(cè)試在育種過程中存在的問題14
• 1.3 分子標(biāo)記技術(shù)在DUS測(cè)試中的應(yīng)用14-15
• 1.4 指紋圖譜技術(shù)在DUS測(cè)試中的應(yīng)用15-16
• 1.5 DNA指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用需解決的問題16
• 1.6 本研究的目的和意義及研究?jī)?nèi)容16-19
• 1.6.1 本研究的目的和意義16-17
• 1.6.2 研究?jī)?nèi)容17-18
• 1.6.3 技術(shù)路線18-19
• 第二章 PCR擴(kuò)增體系的優(yōu)化及多重SSR-PCR體系的建立19-29
• 2.1 PCR擴(kuò)增體系的優(yōu)化19-23
• 2.1.1 試驗(yàn)材料19-20
• 2.1.2 試驗(yàn)方法20-22
• 2.1.3 結(jié)果與分析22-23
• 2.2 多重SSR-PCR擴(kuò)增體系的建立23-27
• 2.2.1 試驗(yàn)材料23-24
• 2.2.2 試驗(yàn)方法24-25
• 2.2.3 結(jié)果與分析25-27
• 2.3 討論27-29
• 第三章 SSR核心引物的篩選與確立29-36
• 3.1 試驗(yàn)材料29-30
• 3.2 試驗(yàn)方法30-31
• 3.2.1 SSR引物的確定30
• 3.2.2 數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì)分析30-31
• 3.3 結(jié)果與分析31-34
• 3.3.1 候選引物的分布31-32
• 3.3.2 核心引物的確定及多態(tài)性信息32-34
• 3.4 討論34-36
• 第四章 部分甜瓜品種（系）指紋圖譜的構(gòu)建36-44
• 4.1 試驗(yàn)材料36
• 4.2 試驗(yàn)方法36-39
• 4.2.1 指紋圖譜代碼36-39
• 4.2.2 指紋圖譜QR編碼39
• 4.3 結(jié)果與分析39-42
• 4.3.1 甜瓜種質(zhì)的指紋代碼分析39-42
• 4.3.2 指紋圖譜QR編碼42
• 4.4 討論42-44
• 第五章 甜瓜種質(zhì)遺傳多樣性分析44-60
• 5.1 供試材料44-45
• 5.2 試驗(yàn)方法45-47
• 5.2.1 形態(tài)性狀記錄45-47
• 5.2.2 形態(tài)學(xué)標(biāo)記和SSR標(biāo)記統(tǒng)計(jì)分析47
• 5.3 結(jié)果與分析47-57
• 5.3.1 基于形態(tài)學(xué)標(biāo)記的聚類分析47-50
• 5.3.2 基于SSR標(biāo)記的聚類分析50-56
• 5.3.3 形態(tài)學(xué)標(biāo)記與SSR標(biāo)記聚類結(jié)果的比較分析56-57
• 5.4 討論57-60
• 5.4.1 基于形態(tài)學(xué)性狀甜瓜遺傳多樣性的分析57-58
• 5.4.2 基于SSR標(biāo)記甜瓜遺傳多樣性的分析58-59
• 5.4.3 基于SSR標(biāo)記甜瓜遺傳多樣性的分析59-60
• 第六章 甜瓜雜交種SSR指紋圖譜構(gòu)建與純度鑒定60-66
• 6.1 試驗(yàn)材料60-61
• 6.2 試驗(yàn)方法61-62
• 6.2.1 多態(tài)性引物的篩選62
• 6.2.2 多態(tài)性引物在雜種純度檢測(cè)中的應(yīng)用62
• 6.3 結(jié)果與分析62-65
• 6.3.1 用于16個(gè)甜瓜組合純度鑒定的多態(tài)性引物62-64
• 6.3.2 甜瓜雜交種的純度鑒定64-65
• 6.4 討論65-66
• 全文結(jié)論66-68
• 參考文獻(xiàn)68-77
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明77-78
• 附錄78-94
• 致謝94-95

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