【摘要】：神經(jīng)病理性疼痛是由于軀體感覺系統(tǒng)的損傷或疾病所導(dǎo)致的疼痛,臨床發(fā)病率較高,表現(xiàn)為持續(xù)性自發(fā)痛、痛覺超敏和痛覺過敏。神經(jīng)系統(tǒng)痛覺傳導(dǎo)通路興奮性增高常被認為是產(chǎn)生神經(jīng)病理性疼痛的基礎(chǔ),包括外周敏化和中樞敏化,而神經(jīng)元自發(fā)異位電活動被認為是外周敏化的基礎(chǔ)之一。M通道在調(diào)節(jié)神經(jīng)興奮性方面發(fā)揮重要作用,它是一種閾電位附近激活的非失活的鉀電流,能抑制神經(jīng)元反復(fù)放電,穩(wěn)定膜電位,控制神經(jīng)元興奮性。開放M通道(KCNQ基因編碼,又稱Kv7通道)將引起細胞膜超極化從而降低細胞神經(jīng)元興奮性,M通道開放劑可治療癲癇、焦慮、精神分裂癥和偏頭痛、神經(jīng)病理性疼痛、炎性痛等神經(jīng)興奮性相關(guān)的疾病。QO-58lysine是經(jīng)過高通量篩選發(fā)現(xiàn)的一個具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新化合物,作用靶點為Kv7/M通道。QO-58對Kv7.1-Kv7.5各亞基均有不同程度的開放作用,對Kv7.2/7.3的開放作用最強。前期對QO-58lysine的藥效學(xué)觀察中,發(fā)現(xiàn)QO-58lysine有一定抗癲癇和鎮(zhèn)痛作用,現(xiàn)擬對QO-58lysine的鎮(zhèn)痛機制及作用的效果進行觀察,包括外周坐骨神經(jīng)損傷誘發(fā)病理性疼痛、三叉神經(jīng)痛和糖尿病神經(jīng)病理性疼痛,為進一步新藥開發(fā)提供依據(jù)。目的:液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測定QO-58lysine在大鼠DRG和TG神經(jīng)元中分布的濃度;膜片鉗技術(shù)分析QO-58lysine對DRG和TG神經(jīng)元M電流的影響;觀察藥物對神經(jīng)病理性疼痛動物模型的治療作用。方法:(1)100 mg/kg QO-58lysine灌胃7天后,分離大鼠DRG和TG組織。液質(zhì)聯(lián)用測定組織中藥物濃度。(2)原代培養(yǎng)SD大鼠的DRG和TG神經(jīng)元,采用全細胞膜片鉗方式,記錄中小直徑神經(jīng)元細胞的M電流。然后給予不同濃度的QO-58lysine溶液,觀察其對M電流的作用。(3)通過CCI手術(shù)建立外周神經(jīng)損傷致神經(jīng)病理性疼痛模型,25 mg/kg、50mg/kg、100mg/kgQO-58lysine重復(fù)給藥后測量機械刺激縮足閾值(mwt)和熱刺激縮足潛伏期(twl),評價其治療作用。(4)通過ion-cci手術(shù)建立三叉神經(jīng)痛模型,25mg/kg、50mg/kgQO-58lysine重復(fù)給藥后測量mwt,評價其治療作用。(5)60mg/kg腹腔注射2%stz,建立stz致糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型,12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kgQO-58lysine重復(fù)給藥后測量50%mwt,評價其治療作用。(6)免疫組化分析DRG和tg中kcnq3蛋白的表達變化。結(jié)果:(1)DRG組織中QO-58lysine含量為13.16±7.76μg/mg;tg組織中QO-58lysine含量為8.89±1.48μg/mg。(2)QO-58lysine可激活m通道。1、3、10、100μmQO-58lysine增大DRG神經(jīng)元m電流的倍數(shù)分別為0.43±0.03、0.65±0.11、1.59±0.63、2.17±0.14(n=3-6),ec50為7.1μm。與給藥前相比,p0.001,均具有顯著性差異。0.01、0.1、1、3、10、30、100μmQO-58lysine增大tg神經(jīng)元m電流的倍數(shù)分別為0.09±0.005、0.24±0.09、0.36±0.16、0.73±0.16、1.46±0.24、1.92±0.20、2.30±0.05(n=3-8),ec50為9.3±3.3μm。與給藥前相比,p0.001,均具有顯著性差異。(3)建立cci模型,造模成功率為85%,術(shù)后第8天灌胃給藥,測mwt和twl。模型組在術(shù)后第13天mwt值和twl值最低(分別為14.9±2.3g;8.8±0.6s)。陽性藥普瑞巴林pgb組在術(shù)后第13、15、17天,mwt值(分別為23.9±4.6g、25.3±4.2g、26.2±3.9g)和twl值(11.6±1.6s、11.8±0.8s、11.5±1.1s)均有顯著提高(p0.001或p0.05)。QO-58lysine25mg/kg組在術(shù)后第13、15天mwt值分別為22±7g、24.4±4.5g;術(shù)后第13、15、17天twl值分別為10.9±1.6s、10.7±1.2s、10.5±1s,與模型組相比均有顯著提高(p0.01或p0.05)。QO-58lysine50mg/kg組在術(shù)后第13天mwt值為19.8g±4.9g;第13、17天twl值分別為9.7±1.1s、10.1±1.3s,與模型組相比均有顯著提高(p0.05)。QO-58lysine100mg/kg組在術(shù)后第15天mwt值為24.2±3.7g;第13、15、17天twl值分別為10.1±0.7s、10.3±0.7s、10.2±0.7s,與模型組相比均有顯著提高(p0.01或p0.05)。(4)建立三叉神經(jīng)痛模型,術(shù)后第10天灌胃給藥。與模型組相比,在術(shù)后第14、17、21、28天,卡馬西平組MWT(分別為1.43±0.64 g、3.50±1.91 g、3.6±2.19 g、11.2±3.6 g),QO-58lysine 25 mg/kg組MWT(分別為1.43±0.64 g、2.8±1.10 g、2.16±1.07 g、7.33±2.3 g),QO-58lysine 50 mg/kg組MWT(分別為1.45±0.74 g、1.83±1.06 g、1.70±0.33 g、8.8±1.8 g)均有顯著提高(P0.01或P0.05)。(5)建立STZ致糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型,造模成功率為68%,造模后第22天灌胃給藥。STZ造模后第28、31天,與模型組50%MWT(分別為3.24±0.62 g、3.43±0.44 g)相比,陽性藥普瑞巴林PGB組50%MWT(分別為13.72±4.92 g、11.54±3.82 g)、QO-58lysine 12.5 mg/kg組50%MWT(分別為8.25±3.83 g、9.36±4.83 g)均有顯著提高(P0.05或P0.01)。STZ造模后第28天,QO-58lysine 25 mg/kg組50%MWT(8.05±4.76 g)有顯著提高(P0.05)。造模后第31天,QO-58lysine 50mg/kg組50%MWT(6.89±3.41 g)有顯著提高(P0.05)。(6)免疫組化結(jié)果顯示,KCNQ3蛋白在神經(jīng)元細胞膜上表達。直徑較大的神經(jīng)元上表達較少或不表達,中小直徑神經(jīng)元呈強表達。與對照組(平均光密度為0.180±0.04)相比,模型組的表達明顯降低(平均光密度為0.161±0.03),(P0.05)。與模型組相比,PGB組、QO-58lysine12.5 mg/kg和50 mg/kg組的表達增強(分別為0.216±0.01、0.188±0.01、0.184±0.005),有顯著性差異(P0.001或P0.05)。結(jié)論:灌胃給藥后,QO-58lysine在大鼠DRG和TG神經(jīng)元有一定的濃度分布;QO-58lysine能夠增大DRG和TG神經(jīng)元上的M電流,對坐骨神經(jīng)痛、三叉神經(jīng)痛和糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠有明確療效,并能提高糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠DRG和TG神經(jīng)元KCNQ通道表達。QO-58lysine通過調(diào)節(jié)M通道,可以達到治療神經(jīng)病理性疼痛的作用。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R965

【參考文獻】

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本文編號：2425533