【摘要】：腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最基本的生物學(xué)特征,也是臨床腫瘤患者(90%以上)死亡的最主要原因。目前臨床缺乏有效抗腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物,研制抗侵襲轉(zhuǎn)移藥物已經(jīng)成為腫瘤化療亟待解決的問題。腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移涉及的步驟主要有：腫瘤細(xì)胞在原發(fā)灶增殖及血管生成,細(xì)胞間粘附性改變而從原發(fā)部位脫落,分泌的蛋白水解酶和膠原酶降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)和基底膜,侵入血管或淋巴管,遷移至靶器官通過增殖和血管生成形成一個(gè)新的癌灶。其中,抑制蛋白水解酶的活性和血管生成是抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的重要切入點(diǎn)。 近幾十年來,天然產(chǎn)物已成為創(chuàng)新藥物和藥物先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)的重要源泉,具有抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移活性的天然活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)優(yōu)化是發(fā)現(xiàn)抗腫瘤轉(zhuǎn)移創(chuàng)新藥物的重要途徑。海藻糖衍生物Brartemicin是日本科學(xué)家Igarashi從放線菌(Actinomycete) Nonomuraea sp.代謝產(chǎn)物中分離得到的,結(jié)構(gòu)為6,6’-雙-2,4-二羥基-6-甲基苯甲酸酯-α,α-D-海藻糖。Brartemicin對(duì)結(jié)腸癌Colon26-L5細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗侵襲能力,且毒性低。課題組為獲得活性更優(yōu)的抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的藥物,對(duì)Brartemicin的分子進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì),構(gòu)建了結(jié)構(gòu)多樣性的海藻糖衍生物。經(jīng)篩選和活性比較,發(fā)現(xiàn)化合物6,6’-雙(2,3-二甲氧基苯甲�；�)-α,α-D-海藻糖(6,6'-bis (2,3-dimethoxybenzoyl)-a, a-D-trehalose, DMBT)具有較強(qiáng)的抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移活性。其對(duì)結(jié)腸癌Colon26-L5細(xì)胞的抗侵襲活性比天然產(chǎn)物Brartemicin更高,IC50為0.15μM(0.10μg/mL)。本課題主要通過體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn),研究DMBT對(duì)人乳腺癌細(xì)胞和鼠黑色素瘤細(xì)胞抗侵襲轉(zhuǎn)移的作用,在進(jìn)一步確證化合物DMBT抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移活性的基礎(chǔ)上,探討其作用機(jī)制,為開發(fā)高效低毒具有我國自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移藥物奠定基礎(chǔ)。 體外實(shí)驗(yàn)：MTT及臺(tái)盼藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)顯示,DMBT在64μM時(shí)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的抑制率低于30%,對(duì)B16BL6細(xì)胞的抑制率也低于30%,說明DMBT對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞活力無明顯影響。遷移實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,2-8μM DMBT能顯著抑制腫瘤細(xì)胞的遷移。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,2、4μM DMBT能顯著抑制MDA-MB-231和B16BL6細(xì)胞的侵襲。小管形成實(shí)驗(yàn)顯示,4、8μM DMBT能顯著抑制HUVEC細(xì)胞的管形成。Western blotting及明膠酶譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,DMBT可抑制MDA-MB-231和B16BL6細(xì)胞的MMP-9、VEGF的表達(dá)。在MDA-MB-231細(xì)胞中,DMBT可降低VEGFR2.p-VEGFR2及p-EGFR的表達(dá),引起下游p-AKT表達(dá)降低.在B16BL6細(xì)胞中,DMBT可抑制P13Kp110a、p-AKT、p-GSK-3β、 p-mTOR、mTOR的表達(dá)。Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,DMBT可引起GSK-3βmRNA表達(dá)升高、降低VEGFA.AKTl.P13Krl mRNA表達(dá)。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：尾靜脈注射B16BL6細(xì)胞至C57BL/6J小鼠體內(nèi)構(gòu)建人工肺轉(zhuǎn)移模型,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,給藥14天后,DMBT在1mg/kg、10mg/kg可顯著抑制腫瘤細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移,且無明顯毒副作用。尾靜脈分別注射生物發(fā)光細(xì)胞B16-F10-1uc-G5和MDA-MB-231-luc-D2L2HN細(xì)胞至Balb/c-nu裸鼠體內(nèi)構(gòu)建人工肺轉(zhuǎn)移模型,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,給藥11天后,DMBT在1mg/kg-10mg/kg可顯著抑制腫瘤細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移。雞胚尿囊膜血管形成實(shí)驗(yàn)顯示,DMBT在10mg/ml時(shí)能顯著抑制雞胚尿囊膜血管生成。 結(jié)論：海藻糖衍生物DMBT具有抗腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的活性,且對(duì)細(xì)胞毒性較低。通過影響MMP-9/VEGF、VEGFR2或EGFR來引起下游AKT/GSK-3β/mTOR通路起到抗侵襲轉(zhuǎn)移的作用。因此,DMBT以其高效低毒的特點(diǎn)有潛力成為抗侵襲轉(zhuǎn)移的候選藥物之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2285369