本文關(guān)鍵詞：棉花農(nóng)桿菌活體轉(zhuǎn)化方法及其在棉籽品質(zhì)改良上的應(yīng)用

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【摘要】：棉花是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物。作為一種優(yōu)質(zhì)的天然纖維,棉纖維是紡織業(yè)的重要原料。除此以外,棉花也是一種重要的油料作物,棉籽中含有大量的蛋白質(zhì)和脂肪,這使得棉籽成為生產(chǎn)蛋白質(zhì)和食用油等的潛在資源,棉籽的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)也逐漸成為研究的熱點(diǎn),改良和利用棉籽的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)性狀是棉花育種的重要目標(biāo)。本研究以高油基因VgDGAT1a為目的基因,以具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗草甘膦基因(EPSPS-G6)為植物篩選標(biāo)記基因,通過(guò)農(nóng)桿菌活體轉(zhuǎn)化技術(shù)將表達(dá)載體轉(zhuǎn)入受體棉花植株-中棉所49中,獲得轉(zhuǎn)基因植株,并經(jīng)過(guò)一系列的自交純化,獲得純化轉(zhuǎn)基因種質(zhì)系-T3種子,采用無(wú)損分析技術(shù)-近紅外光譜分析技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因種質(zhì)系進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的分析,評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)VgDGAT1a棉花種質(zhì)系的利用價(jià)值。主要研究結(jié)果如下： 1.利用已經(jīng)構(gòu)建的帶有VgDGAT1a目的基因和植物篩選標(biāo)記(抗潮霉素基因-hyp)的植物表達(dá)載體pCAMBIA1301,用具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的草甘膦抗性基因EPSPS-G6替代表達(dá)載體自帶的抗潮霉素基因hyp,重新構(gòu)建表達(dá)載體。 2.將重組質(zhì)粒pCAMBIA1301-VgDGAT1a+EPSPS-G6轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中,利用農(nóng)桿菌活體轉(zhuǎn)化技術(shù)將其轉(zhuǎn)入棉花植株中,收獲轉(zhuǎn)化種子共1268g。 3.用20mmol/l的草甘膦對(duì)擬轉(zhuǎn)化幼苗進(jìn)行篩選,獲得轉(zhuǎn)基因植株共125株,自交后獲得T1種子,繼續(xù)進(jìn)行草甘膦篩選和嚴(yán)格自交,并經(jīng)PCR鑒定和Southern blot檢測(cè)確定,最終獲得51個(gè)純合轉(zhuǎn)VgDGAT1a基因的種質(zhì)系。 4.對(duì)51份純合轉(zhuǎn)基因種質(zhì)系和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ障颠M(jìn)行種子營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的無(wú)損分析,與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)VgDGAT1a種質(zhì)系棉籽的油分含量提高,平均為32.70%;蛋白質(zhì)含量降低,平均為45.18%；氨基酸含量也都降低。轉(zhuǎn)基因種質(zhì)系的蛋白質(zhì)與油分負(fù)相關(guān)關(guān)系并沒(méi)有改變,即轉(zhuǎn)入VgDGAT1a基因提高棉子中含油量,但降低了其蛋白質(zhì)的含量,同時(shí)也降低了其氨基酸的含量。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S562

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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本文編號(hào)：1161940