本文關(guān)鍵詞：濾膜富集—光鏡檢驗(yàn)硅藻技術(shù)的建立及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：溺死(drowning)是由于液體機(jī)械性地阻塞呼吸道及肺泡,阻礙氣體交換,使機(jī)體缺氧,二氧化碳潴留,導(dǎo)致其窒息死亡。我國沿海、沿江地區(qū)溺死的案件相對較多,水中尸體檢驗(yàn)是法醫(yī)工作中的重要內(nèi)容。實(shí)際檢案中,水中尸體死因多為溺死,但存在拋尸入水偽裝成溺死的可能,因此水中尸體可能與刑事案件相關(guān),必須進(jìn)行法醫(yī)學(xué)鑒定。溺水尸體可呈現(xiàn)出特有的病理征象,如口、鼻部蕈樣泡沫,水性肺氣腫,支氣管內(nèi)異物等。然而對于一些溺死病理不典型的尸體或是高度腐敗的尸體,由于各種病理征象已不復(fù)存在,常需借助其它檢驗(yàn)技術(shù)輔助鑒定溺死。溺死的輔助診斷方法有很多,但其或缺乏特異性,或受尸體腐敗等因素的影響,或者理論、技術(shù)不成熟等,使這些方法難以應(yīng)用于法醫(yī)溺死診斷。溺水過程中,機(jī)體劇烈呼吸使溺液中的硅藻通過肺泡毛細(xì)血管屏障進(jìn)入血管,隨血液循環(huán)進(jìn)入全身各個(gè)臟器,加之硅藻分布廣泛和良好的抗酸性和耐腐蝕性使的硅藻檢驗(yàn)對輔助鑒定溺死具有較強(qiáng)的優(yōu)勢。目前,硅藻檢驗(yàn)被認(rèn)為是水中尸體尤其是腐敗尸體溺死診斷較為可靠的證據(jù)。法醫(yī)學(xué)硅藻檢驗(yàn)實(shí)踐中,主要由三個(gè)過程組成：消解、富集和觀察。法醫(yī)學(xué)者研究的硅藻檢驗(yàn)方法多只針對消解過程進(jìn)行優(yōu)化,而忽略了將三個(gè)過程均進(jìn)行優(yōu)化,他們在實(shí)際應(yīng)用時(shí)存在一些問題,如傳統(tǒng)的強(qiáng)酸消解法消解程序簡單,成本低廉,但存在富集效率較低,靈敏度低的問題；使用掃描電鏡觀察硅藻分辨率高,硅藻觀察清晰,種類鑒定容易,但其成本較高,使其應(yīng)用范圍受到限制。本課題旨在建立一種硅藻檢出率高、操作簡單、安全,對設(shè)備要求不高,檢驗(yàn)成本低的硅藻檢驗(yàn)方法,使其在硅藻檢驗(yàn)過程中獲得良好效果,并為基層法醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供一種合適的硅藻檢驗(yàn)方法。方法：方法建立：分別使用醇類、醛類、酸類、苯類、丁香酚、樹脂類等試劑與水系濾膜(聚醚砜(PES)材料)、有機(jī)系濾膜(尼龍材料)和核孔濾膜(有機(jī)化合物材料)相互反應(yīng),探索建立一種基于濾膜富集和光學(xué)顯微鏡檢測臟器及水樣內(nèi)硅藻的新方法,并對該法的操作步驟進(jìn)行優(yōu)化。動物實(shí)驗(yàn)：10只新西蘭大白兔耳緣靜脈注射過量麻醉劑處死后提取腎臟待檢；廣州市區(qū)段珠江水樣500ml。實(shí)驗(yàn)樣本隨機(jī)分為強(qiáng)酸消解-離心富集-光鏡檢驗(yàn)法組(A組)、微波消解-濾膜富集-掃描電鏡聯(lián)用法組(B組)、微波消解-濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)法組(C組),每組20份樣本；三組樣本分別采用強(qiáng)酸消解-離心富集-光鏡檢驗(yàn)法(方法A)、微波消解-濾膜富集-掃描電鏡聯(lián)用法(方法B)微波消解-濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)法(方法C)處理。觀察指標(biāo)為樣本前處理時(shí)間、組織消解程度、硅藻總回收率、各硅藻種類回收率、應(yīng)用效果。尸體樣本：收集2013年2月至2013年10月廣州市水中尸體56例,其中明確溺死的尸體30例、明確死因?yàn)樗篮髵伿胨氖w26例,并收集同時(shí)段廣州市區(qū)陸地死亡的尸體30例。取上述案例尸體的肺、肝、腎組織和對照水樣并分別采用強(qiáng)酸消解-離心富集-光鏡檢驗(yàn)法(方法A)、微波消解-濾膜富集-掃描電鏡聯(lián)用法(方法B)和微波消解-濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)法(方法C)進(jìn)行硅藻檢驗(yàn)。觀察指標(biāo)為硅藻檢出情況、樣本前處理時(shí)間、觀察效果和結(jié)果比對。結(jié)果：方法建立：經(jīng)使用7類試劑與3種濾膜交叉對比研究,結(jié)果顯示丁香酚一乙酸混合試劑滴加在水系濾膜上立即使濾膜變透明,可直接在光學(xué)顯微鏡下觀察,視野干凈,硅藻觀察清晰。同時(shí),建立了一套新的硅藻檢驗(yàn)方法：微波消解-濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)法。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果：三種硅藻檢驗(yàn)方法處理2g兔腎組織所需的時(shí)間(不包括硅藻觀察),方法A處理時(shí)間最長,方法B其次,方法C處理時(shí)間最短(P0.05)。方法A消解組織不完全,光鏡下可見較多組織碎塊,部分硅藻被碎塊覆蓋,光鏡下計(jì)數(shù)和鑒定硅藻種類困難；方法B消解組織完全,無組織殘留,硅藻表面紋理清楚,易于計(jì)數(shù)和鑒定種類；方法C處理樣品后濾膜透光性好,滿足光鏡檢驗(yàn)要求,消解組織完全,無組織殘留,光鏡下可見硅藻散在密集分布,可觀察到硅藻表面紋理,光鏡下易于計(jì)數(shù)和鑒定硅藻種類。三種方法的硅藻總回收率分別是2.6±1.7%、76.9±20.2%和54.2±23.1%。方法B硅藻總回收率最高,方法C其次,方法C最低(P0.05)。A、B、C三組硅藻各種類的回收率(均值±標(biāo)準(zhǔn)差)分別是2.95±4.11%、65.54±29.66%和45.31±29.69%。方法A硅藻種類回收率最低,方法C其次,方法B硅藻種類回收率最高(P0.05)。尸體樣本結(jié)果：方法A對溺死組肺中的硅藻種類為39.8±34.6%,硅藻數(shù)量為4936.3±9863個(gè)/10g,溺死組肝和腎的硅藻種類和硅藻數(shù)量均低于方法B和方法C。方法B對溺死組肺中的硅藻種類為69.6±38.5%,硅藻數(shù)量為52743.5±82018.8個(gè)/10g,溺死組肝和腎的硅藻種類和硅藻數(shù)量最高。方法C對溺死組肺中的硅藻種類為39.8±34.6%,硅藻數(shù)量為4936.3±9863個(gè)/10g,溺死組肝和腎的硅藻種類和硅藻數(shù)量高于方法A。方法A處理肺、肝、腎組織的時(shí)間較另兩種方法長,方法B其次,方法C處理肺、肝、腎組織樣本的時(shí)間最短(P0.05)。方法A對肝、腎的觀察效果較差,硅藻檢出量少;方法B對肺、肝、腎組織最好,視野干凈,不影響硅藻觀察;方法C對肺臟和水樣的觀察效果較方法B差,會有異物顆粒影響觀察。結(jié)論：本課題建立了一種基于濾膜富集的光學(xué)顯微鏡觀察硅藻新技術(shù)。消解液中的硅藻富集至水系濾膜(聚醚砜材料)后,可與丁香酚-乙酸試劑相互作用,使濾膜能直接置于光學(xué)顯微鏡下觀察。將溺死尸體、死后入水尸體和陸地死亡尸體的樣本采用微波消解-濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)法進(jìn)行硅藻檢驗(yàn)研究,并同時(shí)比較了其它兩種常用硅藻檢驗(yàn)方法。本方法在實(shí)際案例檢驗(yàn)過程中具有靈敏度高、能有效避免污染,且簡單、高效、設(shè)備要求不高、易于推廣等優(yōu)點(diǎn),適用于基層法醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的硅藻檢驗(yàn)。The development and forensic application of diatom test based on membrane filtering and light microscope observation
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)病理學(xué) 溺死 硅藻檢驗(yàn) 微波消解 濾膜富集 光鏡檢驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：D919.4
【目錄】：

• 摘要3-7
• ABSTRACT7-14
• 第一章 引言14-25
• 1 研究背景14-23
• 2 論文總體設(shè)計(jì)23-25
• 第二章 濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)硅藻技術(shù)的建立25-45
• 1 引言25
• 2 材料與方法25-27
• 3 濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)技術(shù)的建立27-31
• 4 濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)技術(shù)的指標(biāo)驗(yàn)證31-44
• 5 本章小結(jié)44-45
• 第三章 濾膜富集-光鏡檢驗(yàn)硅藻技術(shù)的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用45-59
• 1 引言45
• 2 材料與方法45-51
• 3 結(jié)果51-54
• 4 討論54-57
• 5 應(yīng)用案例57
• 6 本章小結(jié)57-59
• 第四章 總結(jié)59-60
• 1 本論文的主要結(jié)論59
• 2 下一步的研究工作59-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 附錄66-89
• 碩士在讀期間成果89-92
• 致謝92-94

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 萬立華,代國新,張忠,雷顯謀,易e，

本文編號：275414