【摘要】： 目的：應(yīng)用免疫組化SABC法、Western blot免疫印跡法及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)性大鼠腦挫傷后腦組織中β-APP和MAP-2的表達(dá)變化規(guī)律,以期為法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中大致推斷顱腦損傷時(shí)間提供科學(xué)的參考依據(jù)。 方法：采用Feeney s法建立大鼠腦挫傷模型。選取64只健康成年SD大鼠,雌雄不限,體重250±10g(由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=56)及對(duì)照組(n=8),實(shí)驗(yàn)組依據(jù)損傷時(shí)間不同再分為7個(gè)亞組。均實(shí)施麻醉后,實(shí)驗(yàn)組大鼠采用自由落體打擊法于顱骨中線旁3mm處造成腦挫傷模型,通過常規(guī)HE染色認(rèn)定損傷部位及損傷程度,對(duì)大鼠腦挫傷后14d內(nèi)繼發(fā)性腦損傷的病理學(xué)改變、β-APP和MAP-2的分布特征進(jìn)行光鏡觀察,同時(shí)分別于損傷后1h、4h、12h、48h、72h、7d、14d七個(gè)時(shí)間點(diǎn)(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只)取挫傷處腦組織各100mg,置于液氮中保存?zhèn)溆茫粚?duì)照組大鼠未打擊造傷,其余處理與實(shí)驗(yàn)組相同。應(yīng)用免疫組化SABC法、免疫印跡Western blot法從蛋白水平觀察腦挫傷后β-APP、MAP-2的時(shí)序性變化,結(jié)合圖像分析技術(shù)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析進(jìn)行結(jié)果分析；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)并結(jié)合圖像分析技術(shù)從核酸水平定量半檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組動(dòng)物的各腦組織β-APP、MAP-2mRNA的時(shí)序性變化,觀察上述指標(biāo)與損傷時(shí)間的關(guān)系。 結(jié)果：三種方法統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：(1)大鼠腦挫傷后β-APP在腦組織中的表達(dá)于傷后12h達(dá)到峰值,隨后陽性反應(yīng)細(xì)胞逐漸減少,7d后仍有少量表達(dá)但仍高于對(duì)照組,14d后表達(dá)基本恢復(fù)至接近對(duì)照組水平；(2) MAP-2于腦挫傷后1h表達(dá)明顯丟失,4h后蛋白丟失達(dá)到高峰,12h蛋白開始部分恢復(fù)表達(dá),48h蛋白量逐漸增多,14d蛋白表達(dá)達(dá)到高峰。 結(jié)論：大鼠腦挫傷后腦組織中β-APP和MAP-2表達(dá)隨著損傷時(shí)間呈規(guī)律性變化,有望用于法醫(yī)學(xué)鑒定及早期法醫(yī)學(xué)損傷時(shí)間推斷。免疫組化技術(shù)操作簡(jiǎn)單且易行,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)分子水平的變化敏感而且精確,適合法醫(yī)學(xué)研究及檢案的需要。
【圖文】：

圖1腦挫傷后p一妙P的表達(dá)的時(shí)相分布etime一dePendeniehangesofthep一APPPositiveeellnumbersaftep一APP免疫組化SABC法X400;圖B實(shí)驗(yàn)性大鼠腦挫傷4h后p一APunohistoehemistryofp一APPineontrolSABCMethodx400;Phooehe而stryofp一APPin4haftertheexPerimentaltra切rnatiebodx400

圖2腦挫傷后不同時(shí)間段MAP一2的表達(dá)的時(shí)相分布(P<0time一dePendentehangesoftheMAP一2Positiveeellnurnbersafte組MAP一2免疫組化SABC法x400;圖B實(shí)驗(yàn)性大鼠腦挫傷SABC法X400:PhotoAInllnUnohistoehe而stryofMAP一2OO;PhotoBInunUnohistochemistryofMAP一in4hafterraininjuryinratsSABCMethodx400:
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：D919.4

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本文編號(hào)：2525442