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咖啡因?qū)θ槭竽X皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡的作用

發(fā)布時間:2019-07-16 21:26
【摘要】:目的考察咖啡因?qū)θ槭竽X皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡的作用。方法取出生后2~3d的乳鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元,在37℃、5%CO2、100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d后,分別加入終濃度為300μmol/L和1 000μmol/L的鹽酸咖啡因培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)6~36h后,流式細胞儀測定細胞內(nèi)鈣離子濃度、線粒體膜電位和細胞凋亡率,酶標儀測定Caspase-9的活性,電鏡和Hoechst 33258熒光染色觀察細胞的形態(tài)學改變。結(jié)果與正常組相比較,300μmol/L和1 000μmol/L鹽酸咖啡因組在給藥后6h的鈣離子平均熒光強度明顯增強(P0.05),由正常值43.13±2.02分別增加到45.28±1.16和46.92±1.99;在給藥后8h的線粒體膜電位下降最明顯(P0.05),由正常值443.58±11.77分別下降到289.53±16.47和165.14±14.72;在給藥后10h的Caspase-9活性最高(P0.05),由正常值1.00±0.000分別增加到5.33±1.02和8.33±0.92;在給藥后36h的細胞凋亡率明顯升高(P0.05),由正常值4.94±1.74分別增加到15.98±2.03和18.70±2.09;在給藥后24h熒光顯微鏡下見典型凋亡小體。結(jié)論咖啡因?qū)θ槭竽X皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡有促進作用。
文內(nèi)圖片:神經(jīng)元內(nèi)線粒體膜電位的變化(n=12)
圖片說明: CH IN J FORENS IC MED 2009年第24卷第6期位的變化,具有時間和劑量依賴性(圖1)。表2 咖啡因?qū)ι窠?jīng)元凋亡率的影響(n=12)Table2 Effects of caffeine on the rate ofapoptosis in neurons (n=12)檢測時間神經(jīng)元凋亡率(% )對照組實驗Ⅰ組實驗Ⅱ組12h 2. 55±1. 52 5. 23±1. 34*7. 55±1. 80*24h 3. 79±1. 25 7. 69±1. 74*10. 53±2. 14*36h 4. 94±1. 74 15. 98±2. 03* 18. 70±2. 09**與對照組相比P<0. 01;*P<0. 01, as compared with controlgroup圖1 神經(jīng)元內(nèi)線粒體膜電位的變化(n=12)Fig1 The change ofm itochondrialm embranepotentials in neurons(n=12)2. 2. 4 神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白 Caspase-9活性檢測與正常組相比較,實驗組在加入咖啡因應(yīng)用液10h時,Caspase-9的活性最高, 12h時有所下降,但仍高于正常組(P<0. 01),提示咖啡因引起腦皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白Caspase-9活性的變化,且具有時間和劑量依賴性(圖2)。圖2 神經(jīng)元內(nèi)半胱天冬酶活性的變化(n=12)Fig2 The change ofCaspase-9activities in neurons(n=12)3 討 論本實驗以乳鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)作為研究對象
文內(nèi)圖片:神經(jīng)元內(nèi)半胱天冬酶活性的變化(n=12)
圖片說明: 正常組(P<0. 01),提示咖啡因引起腦皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白Caspase-9活性的變化,且具有時間和劑量依賴性(圖2)。圖2 神經(jīng)元內(nèi)半胱天冬酶活性的變化(n=12)Fig2 The change ofCaspase-9activities in neurons(n=12)3 討 論本實驗以乳鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)作為研究對象,觀察和了解咖啡因?qū)ζ溆绊。電鏡及熒光顯微鏡對神經(jīng)元形態(tài)學動態(tài)觀察結(jié)果表明:在咖啡因終濃度300~1 000μmol/L劑量范圍內(nèi),神經(jīng)元出現(xiàn)明顯的凋亡。通過本研究可以觀察到,加入終濃度300~1000μmol/L咖啡因應(yīng)用液6h時,神經(jīng)元內(nèi)鈣離子活性與對照組相比明顯增高,其后逐漸下降。說明鈣離子活性增高是咖啡因引起神經(jīng)元凋亡發(fā)生的一個早期事件。給藥8h時,神經(jīng)元線粒體膜電位與對照組相比明顯下降,其后逐漸上升。說明咖啡因?qū)ι窠?jīng)元線粒體產(chǎn)生了損傷
【作者單位】: 中國刑事警察學院法醫(yī)學系;沈陽市公安局交警支隊;中國人民公安大學;
【分類號】:D919.1

【參考文獻】

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