【摘要】： 毒品是人類社會的一大禍害,毒品在全球范圍的泛濫嚴(yán)重地危害著社會的進(jìn)步和發(fā)展。濫用嗎啡、海洛因等阿片類藥物及其他麻醉藥品、精神藥物的人數(shù)持續(xù)增長,并且青少年占吸毒人員總數(shù)的比例急劇上升。毒品的泛濫遺害無窮。 阿片類藥物成癮是一種慢性復(fù)發(fā)性腦病,是由于長期的藥物濫用使相關(guān)腦神經(jīng)元對其產(chǎn)生適應(yīng)性,使機(jī)體形成一種成癮狀態(tài)。這種適應(yīng)過程及行為表現(xiàn)具有明顯的時程相關(guān)性和腦區(qū)特異性。因此,目前的研究重點(diǎn)已轉(zhuǎn)移到不同腦區(qū)在嗎啡成癮中的作用,如大腦額葉皮質(zhì)(prefrontal cortex, PFC)、海馬(hippocampus, Hip)等,依靠與中腦多巴胺系統(tǒng)的纖維聯(lián)系共同參與藥物精神依賴的形成。在阿片成癮這種復(fù)雜的神經(jīng)、內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)變化過程中,存在多種生物活性物質(zhì)的變化。膽囊收縮素(cholecystokinin, CCK)是存在于體內(nèi)多個系統(tǒng)的一種神經(jīng)肽,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)有著廣泛分布,具有多種生理功能。其中,CCK-8是目前已知的作用最強(qiáng)的內(nèi)源性抗阿片肽類物質(zhì)。 阿片類物質(zhì)濫用引起細(xì)胞的適應(yīng)性改變包括阿片受體下調(diào)、內(nèi)化、與G蛋白脫偶聯(lián)以及環(huán)磷酸腺苷信號(cAMP)系統(tǒng)的上調(diào)和超敏等,這種快速的受體及受體后調(diào)節(jié)過程在阿片成癮過程中發(fā)揮著主要作用。CCK通過和靶細(xì)胞表面的CCK受體結(jié)合而發(fā)揮作用,中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)存在CCK1和CCK2兩種亞型,且主要通過CCK2受體起作用,可參與疼痛、焦慮等情緒調(diào)節(jié)和記憶等過程。實(shí)驗(yàn)研究表明,CCK受體拮抗劑不但能針對戒斷癥狀進(jìn)行對癥治療,而且有防止復(fù)吸的作用,但其具體的作用機(jī)制仍不明確。本研究以劑量遞增法建立嗎啡依賴及急性催促戒斷模型,在此基礎(chǔ)上采用腹腔和側(cè)腦室注射兩種給藥途徑,觀察CCK-8、CCK受體拮抗劑對嗎啡戒斷大鼠的影響,并應(yīng)用放射配基結(jié)合分析技術(shù)測定額葉皮質(zhì)(prefrontal cortex, PFC)、尾殼核(caudate putamen, CPu)、海馬(hippocampus, Hip)μ阿片受體的結(jié)合特征,以探討CCK-8及CCK受體拮抗劑與μ阿片受體的相互作用關(guān)系,為CCK-8在戒毒方面的應(yīng)用提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:研究采用成年雄性Wistar大鼠,體重200±10g按照嗎啡劑量遞增法(10、20、30、40、50mg·kg~(-1))皮下注射嗎啡5天,每日2次(8:00, 20:00),第6天8:00給予嗎啡(50mg·kg~(-1))后兩小時腹腔注射納洛酮(5mg·kg~(-1))急性催促戒斷,建立嗎啡依賴及戒斷模型。應(yīng)用放射配基結(jié)合分析技術(shù)觀察前額葉皮質(zhì)、尾殼核、海馬中μ阿片受體結(jié)合特征的變化。 為觀察CCK-8及CCK1受體拮抗劑L-364,718,CCK2受體拮抗劑LY-288,513對嗎啡戒斷大鼠的影響,研究采用腹腔注射及側(cè)腦室注射兩種給藥途徑,在每次給予嗎啡前30min注射CCK-8(50μg·kg~(-1), i.p. ; 0.1μg/rat, i.c.v)、L-364,718(1mg·kg~(-1), i.p. ; 1μg/rat, i.c.v)、LY-288,513 (1mg·kg~(-1), i.p. ; 1μg/rat, i.c.v)進(jìn)行慢性干預(yù);或在納洛酮催促戒斷前30min給予CCK-8 (100μg·kg~(-1), i.p. ; 1μg/rat, i.c.v)、L-364,718 (5mg·kg~(-1), i.p. ; 10μg/rat, i.c.v)、LY-288,513 (5mg·kg~(-1), i.p. ; 10μg/rat, i.c.v)進(jìn)行急性干預(yù),末次注射嗎啡2小時后均給予納洛酮(5mg·kg~(-1))催促戒斷,觀察嗎啡戒斷癥狀。所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,用SPSS11.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,行單因素方差分析(one way ANOVA),組間比較用最小顯著差法(least significant difference, LSD)進(jìn)行檢驗(yàn),以P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1放射配基結(jié)合分析技術(shù)測定大鼠海馬μ阿片受體結(jié)合特征的方法優(yōu)化 實(shí)驗(yàn)選取蛋白濃度1mg·ml-1、[3H]DAMGO 0.5 nmol·L~(-1) ~ 8nmol·L~(-1) 5個濃度點(diǎn)、非標(biāo)記配基DAMGO濃度5μmol·L~(-1)、4℃孵育過夜作為放射配基結(jié)合分析的主要條件,建立了一套經(jīng)濟(jì)、可靠、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法。 2大鼠嗎啡依賴及催促戒斷模型的建立及CCK-8、CCK受體拮抗劑對嗎啡戒斷癥狀的影響 實(shí)驗(yàn)中觀察到齒顫、濕狗樣抖動、腹瀉、流淚、流涎、跳躍、體重明顯下降等戒斷癥狀,成功建立了嗎啡依賴及催促戒斷模型。通過腹腔和側(cè)腦室兩種給藥方式研究CCK-8及CCK1R和CCK2R高選擇性受體拮抗劑對嗎啡戒斷癥狀的影響,發(fā)現(xiàn)CCK-8、L-364,718、LY-288,513慢性干預(yù)均不同程度的減輕了納洛酮引起的急性催促戒斷癥狀;戒斷前給予急性干預(yù)時,發(fā)現(xiàn)L-364,718、LY-288,513也減輕了催促戒斷癥狀,但是腹腔注射CCK-8卻未觀察到較明顯的作用,而側(cè)腦室注射CCK-8加重了戒斷癥狀。 3 CCK-8、CCK受體拮抗劑對嗎啡戒斷大鼠額葉皮質(zhì)、尾殼核、海馬μ阿片受體的表達(dá)和活性的影響我們應(yīng)用放射配基結(jié)合分析技術(shù)檢測了各組大鼠額葉皮質(zhì)、尾殼核、海馬中μ阿片受體Bmax及Kd值的變化,以反映μ阿片受體的表達(dá)及活性。發(fā)現(xiàn)在慢性嗎啡作用下,與鹽水對照組相比,尾殼核μ阿片受體Bmax值無明顯變化(P0.05),僅Kd值升高(P0.01);而額葉皮質(zhì)、海馬μ阿片受體Bmax值明顯下降(P0.01)Kd值升高(P0.01)。納洛酮催促戒斷后,與嗎啡依賴組相比,額葉皮質(zhì)、尾殼核μ阿片受體Bmax值增加(P0.01),Kd值降低(P0.01);而海馬μ阿片受體Bmax值無明顯變化(P0.05),僅Kd值降低(P0.01)。 CCK-8、L-364,718、LY-288,513慢性干預(yù)對額葉皮質(zhì)μ阿片受體的Bmax值和Kd值、尾殼核μ阿片受體的Bmax值、海馬μ阿片受體Kd值均無明顯影響,與戒斷組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。但是尾殼核μ阿片受體Kd值、海馬μ阿片受體Bmax值升高,與戒斷組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01 or P0.05),其作用程度為:腹腔注射LY-288,513L-364,718CCK-8,側(cè)腦室注射LY-288,513CCK-8L-364,718。 CCK-8、L-364,718、LY-288,513急性干預(yù)對額葉皮質(zhì)μ阿片受體的Bmax值和Kd值、尾殼核μ阿片受體的Bmax值、海馬μ阿片受體Kd值均無明顯影響,與戒斷組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。給予L-364,718、LY-288,513后使尾殼核μ阿片受體Kd值、海馬μ阿片受體Bmax值升高(P0.01 or P0.05),并且L-364,718的作用明顯低于LY-288,513;但是側(cè)腦室注射CCK-8使尾殼核μ阿片受體Kd值、海馬μ阿片受體Bmax值降低(P0.01),而腹腔注射CCK-8干預(yù)后海馬μ阿片受體Bmax值及尾殼核Kd值無明顯變化,與戒斷組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論: 1建立了一套安全、經(jīng)濟(jì)、可靠的實(shí)驗(yàn)條件,為檢測大鼠腦組織μ阿片受體奠定方法學(xué)基礎(chǔ)。 2證實(shí)了CCK-8、L-364,718、LY-288,513慢性干預(yù)均不同程度的減輕了納洛酮引起的急性催促戒斷癥狀;戒斷前給予急性干預(yù)時,發(fā)現(xiàn)L-364,718、LY-288,513也減輕了催促戒斷癥狀,但是腹腔注射CCK-8卻未觀察到較明顯的作用,而側(cè)腦室注射CCK-8加重了戒斷癥狀。且上述作用可通過調(diào)節(jié)μ阿片受體來實(shí)現(xiàn),且具有明顯的腦區(qū)特異性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉碧崇;蘇瑞斌;;鉤藤提取物與阿片受體結(jié)合特點(diǎn)分析[J];成都大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年02期

2 孫雪峰,王新華,傅強(qiáng),石學(xué)銀;嗎啡成癮大鼠四個腦區(qū)μ阿片受體的變化[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年02期

3 項(xiàng)鵬,陳曼玲,吳兆鋒;膽囊收縮素8對大鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞鈣調(diào)素和蛋白激酶C活性的影響[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2001年04期

4 班婷婷;吳強(qiáng)恩;周志俊;;放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)方法介紹[J];毒理學(xué)雜志;2007年03期

5 秦伯益;;從阿片受體角度探討阿片類依賴機(jī)制及戒毒措施[J];中國藥物依賴性通報(bào);1991年01期

6 梁建輝,潘勵山,鄭繼旺;cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白與嗎啡依賴[J];中國藥物依賴性雜志;2000年03期

7 谷建平,叢斌,朱桂云,畢海濤,谷振勇,李淑瑾,楊明;褪黑素對嗎啡戒斷大鼠腦內(nèi)cAMP和cGMP含量的影響[J];中國藥物依賴性雜志;2005年01期

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本文編號：2290135