【摘要】： 目的:彌漫性軸索損傷(diffuse axonal injury,DAI)是指在頭部遭受直線加速性或(和)旋轉(zhuǎn)性暴力打擊時,腦組織由于加速運動而產(chǎn)生剪切、伸展和壓縮應(yīng)力,導(dǎo)致腦白質(zhì)廣泛發(fā)生以神經(jīng)軸索損傷為特征的一系列病理生理變化。意識障礙是其典型的表現(xiàn),臨床診斷較困難,預(yù)后多差。近年來研究發(fā)現(xiàn),彌漫性軸索損傷造成外傷后的腦功能障礙不僅是由于最初的機械外力對組織的剪切、積壓等造成的,更是由于損傷后數(shù)小時甚至數(shù)天中發(fā)生的復(fù)雜的“二次打擊”造成的。以往的研究主要集中在損傷后神經(jīng)元的變化,近年有研究發(fā)現(xiàn)外傷性腦損傷(traumic brain injury,TBI)后中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的小膠質(zhì)細(xì)胞增生,且隨時間的變化而變化。 有研究表明,小膠質(zhì)細(xì)胞是第一個針對損傷發(fā)生應(yīng)答的細(xì)胞。在短暫性前腦缺血模型中,發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)早在20分鐘內(nèi)即發(fā)生。活化的小膠質(zhì)細(xì)胞可出現(xiàn)“呼吸爆發(fā)現(xiàn)象”,產(chǎn)生數(shù)量驚人的自由基,引起脂質(zhì)過氧化,還可引起細(xì)胞成分脂質(zhì)、蛋白之間相互交聯(lián),損傷神經(jīng)元功能。然而DAI后小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的氧化損傷是否參與神經(jīng)元的遲發(fā)性進行性損傷尚未見報道。 本實驗采用Marmarou A等人于1994年首次報道的自由落體撞擊方法復(fù)制大鼠DAI模型,觀察小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng),進一步探討DAI后的神經(jīng)組織中神經(jīng)軸索和小膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用,為進一步闡明DAI的病理生理學(xué)機制奠定基礎(chǔ)。 方法:健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠55只,體重260±21g,隨機分為正常對照組、假手術(shù)組和損傷組(包括:30min、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h和7d)。正常對照組大鼠不作處理;假手術(shù)組大鼠給予手術(shù)及打擊前處理,但不予真正的打擊;損傷組大鼠經(jīng)過手術(shù)后,給予打擊,打擊后按不同時間處死。觀察打擊后大鼠的行為學(xué)表現(xiàn),麻醉灌注后取全腦,制作石蠟切片,采用HE染色和硝酸銀銀染色的方法觀察大鼠腦組織的病理改變。將經(jīng)以上方法驗證符合標(biāo)準(zhǔn)的大鼠列入損傷組,用免疫組織化學(xué)的方法測定腦組織中腦干損傷區(qū)nNOS、iNOS及COX-2表達(dá)的動態(tài)變化。 計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示,用SPSS統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA),用最小顯著差法(LSD)作兩兩比較,P0.05為有顯著性差異。 結(jié)果:1組織病理學(xué)觀察: HE染色形態(tài)學(xué)變化:正常對照組與假手術(shù)對照組的大鼠腦組織結(jié)構(gòu)清晰,無充血水腫及其它病理學(xué)改變;損傷組大鼠腦干部位組織充血水腫,變性壞死,24h達(dá)高峰,48h以后水腫有所減輕。 Bielschowsky’s鍍銀染色軸索的形態(tài)學(xué)變化:正常對照組與假手術(shù)對照組的大鼠腦組織結(jié)構(gòu)清晰,軸索排列整齊,表面光滑;損傷組大鼠打擊后12h可見腦干部位神經(jīng)軸索扭曲、腫脹,呈串珠狀、波浪樣改變,收縮球形成,上述表現(xiàn)于48h及72h更加明顯,7d明顯好轉(zhuǎn)。 2 DAI后腦干β-APP的表達(dá):正常對照組與假手術(shù)對照組大鼠腦干β-APP有弱的表達(dá)。損傷組48h及72h的β-APP表達(dá)量增高,受損軸索直徑增大,在斷裂的軸索周圍可見大量小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤。 3 DAI后腦干CD11b的表達(dá):正常對照組與假手術(shù)對照組大鼠腦干區(qū)域少量淡染的CD11b陽性細(xì)胞,呈棕黃色、分枝狀,胞體小;損傷組活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增加,突起變短、變粗,胞體增大、變圓,染色加深,主要分布于損傷軸索及小血管的周圍。 4 DAI后腦干nNOS的表達(dá):正常對照組與假手術(shù)對照組大鼠腦組織nNOS陽性神經(jīng)元細(xì)胞淡染,呈棕黃色;損傷組大鼠打擊后30min即可見nNOS表達(dá)升高,主要分布于損傷軸索區(qū)域的神經(jīng)核團,且與對照組有明顯差異(P0.05),其表達(dá)量12h至24h達(dá)到峰值, nNOS表達(dá)于24h后開始下降,72h后明顯低于12h組,但與對照組仍然有明顯的差異(P0.05)。 5 DAI后腦干iNOS的表達(dá):正常對照組與假手術(shù)對照組腦干組織小膠質(zhì)細(xì)胞iNOS弱表達(dá);損傷組30min即可見軸索損傷區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞iNOS表達(dá)的升高,與對照組有明顯差異(P0.05),72h表達(dá)量增高達(dá)到峰值,7d表達(dá)開始下降,較24h有非常明顯的降低,但較對照組仍有明顯的差異(P0.05)。 6 DAI后腦干的表達(dá):正常對照組與假手術(shù)對照組腦干組織COX-2弱表達(dá);損傷組30min即可見軸索損傷區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元COX-2表達(dá)升高,與對照組有明顯差異(P0.05),24h表達(dá)量增高達(dá)到峰值,COX-2表達(dá)于24h后開始下降,但與對照組仍然有明顯的差異(P0.05)。 結(jié)論: 1、利用Marmarou A的方法成功復(fù)制了DAI模型。 2、觀察到DAI后小膠質(zhì)細(xì)胞大量表達(dá)iNOS、COX-2,可能對繼發(fā)的氧化應(yīng)激損傷起關(guān)鍵作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：D919

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本文編號：2256504