【摘要】：目的建立抗丁丙諾啡單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,制備高特異性的丁丙諾啡單克隆抗體,并對(duì)其免疫學(xué)特性進(jìn)行鑒定。方法在丁丙諾啡的分子上連接活性羧基基團(tuán),通過縮合反應(yīng)將丁丙諾啡半抗原連接于血藍(lán)蛋白(KLH)和小牛血清白蛋白(BSA),形成完全抗原。以完全抗原免疫Balb/c小鼠,通過細(xì)胞融合,篩選等雜交瘤技術(shù),建立穩(wěn)定的分泌抗丁丙諾啡單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。通過腹腔注射雜交瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生含有單抗的腹水。用辛酸-硫酸銨加親和層析法純化抗丁丙諾啡單克隆抗體。采用酶聯(lián)免疫反應(yīng)和膠體金膜層析實(shí)驗(yàn)測(cè)定丁丙諾啡單抗的特異性以及免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果共獲得3株分泌抗丁丙諾啡單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為7E6,6G4和3C2。7E6,6G4抗體靈敏度為10.0ng/ml,3C2抗體靈敏度為20.0ng/ml。7E6,6G4和3C2抗體的親和常數(shù)分別為3.6×10-9mol/L,4.3×10-9mol/L和6.3×10-9mol/L。特異性測(cè)試結(jié)果表明7E6和6G4抗體與40種藥物、毒品無任何交叉反應(yīng),而3C2抗體與嗎啡有交叉反應(yīng)。結(jié)論雜交瘤細(xì)胞株7E6和6G4產(chǎn)生的抗丁丙諾啡單克隆抗體具有很高的特異性和靈敏度。
[Abstract]:Objective to establish a hybridoma cell line with monoclonal antibody against buprenorphine and to prepare a high specific monoclonal antibody against buprenorphine and to identify its immunological characteristics. Methods the active carboxyl group of buprenorphine was attached to the molecule of buprenorphine, and the hemocyanin (KLH) and bovine serum albumin (BSA) (BSA), were linked to buprenorphine hapten by condensation to form a complete antigen. Balb/c mice were immunized with complete antigen. A stable hybridoma cell line secreting monoclonal antibody against buprenorphine was established by cell fusion and screening. Mice were induced to produce ascites containing monoclonal antibodies by intraperitoneal injection of hybridoma cells. Monoclonal antibodies against buprenorphine were purified by octanoic acid-ammonium sulfate and affinity chromatography. The specificity and kinetic parameters of buprenorphine monoclonal antibody were determined by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) and colloidal gold membrane chromatography. Results three hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies against buprenorphine were obtained and named as 7E6G4 and 3C2.7E6G4, respectively. The sensitivity of antibodies was 10.0 ng / ml ~ 3C2 and the affinity constants of 3C2 antibodies were 3.6 脳 10 ~ (-9) mol / L ~ (4.3 脳 10-9mol/L) and 6.3 脳 10 ~ (-9) mol 路L ~ (-1) 路L ~ (-1), respectively.The affinity constants of these two antibodies were 3.6 脳 10 ~ (-9) mol 路L ~ (-1) and 6.3 脳 10 ~ (-9) mol 路L ~ (-1). The specificity test showed that 7E6 and 6G4 antibodies had no cross reaction with 40 drugs, but 3C2 antibody had cross reaction with morphine. Conclusion Monoclonal antibodies against buprenorphine produced by hybridoma cell lines 7E6 and 6G4 have high specificity and sensitivity.
【作者單位】： 上海市刑事科學(xué)技術(shù)研究所;
【基金】：“十一五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目基金(2006038022001)
【分類號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2233402