發(fā)布時間：2018-04-19 18:12

  本文選題：法醫(yī)病理學(xué) + 皮膚損傷��； 參考：《中國醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 目的 皮膚損傷愈合是一個復(fù)雜而連續(xù)的過程,包括血液成分凝集、炎癥、肉芽組織形成、新生上皮覆蓋、結(jié)締組織收縮和纖維化等過程。原癌基因c-jun是即刻早期基因jun家族成員之一,屬于堿性亮氨酸拉鏈家族核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子成員,可以結(jié)合在許多基因的啟動子上參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控,其表達(dá)產(chǎn)物在多種基因表達(dá)、細(xì)胞凋亡、增殖、分化等過程中起重要作用。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色和Westernblot技術(shù),檢測小鼠皮膚損傷區(qū)在損傷后不同時間段c-jun表達(dá)的變化情況,探討c-jun在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時間推斷上應(yīng)用的可能性。 實驗材料與方法 健康成年(8周齡)清潔級昆明系小鼠55只,雌雄不限,體質(zhì)量35～40g,隨機分為11組。其中皮膚切創(chuàng)分為10個時間段組,另一組為正常對照組,每組均為5只小鼠。乙醚氣體吸入麻醉,背部剪毛處理后,常規(guī)手術(shù)消毒,在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口,深達(dá)筋膜。分別于傷后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠脫頸椎處死,取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。對照組小鼠麻醉后背部剪毛,不做切創(chuàng),觀察至14d,脫頸椎處死,取相同部位同等大小皮膚,以備HE染色、免疫組織化學(xué)染色和Western blot檢測應(yīng)用。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色和Western blot技術(shù)檢測55例小鼠皮膚切創(chuàng)后各時間段c-jun變化情況,以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照,顯微鏡×400倍下,在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野,計數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞率。應(yīng)用FluochemV2.0軟件檢測各時間段的平均光密度值,測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示。用SPSS13.0 for Windows進(jìn)行單因素方差分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 正常對照組小鼠皮膚中c-jun主要表達(dá)在表皮、毛囊和皮脂腺等處。傷后3h即可見少數(shù)多核粒細(xì)胞有c-jun表達(dá)。傷后6～24h,大量浸潤的多核粒細(xì)胞和部分單個核細(xì)胞c-jun呈陽性。傷后1～3d,c-jun陽性細(xì)胞主要以單個核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞為主。傷后5～14d,c-jun主要在成纖維細(xì)胞中表達(dá)。傷后0h時c-jun陽性細(xì)胞率比較低,隨著傷后時間的延長,c-jun陽性細(xì)胞率逐漸增加,12h達(dá)到高峰。傷后1～5d一直呈高表達(dá)狀態(tài)。傷后7d時c-jun陽性細(xì)胞率達(dá)到第二峰,隨后逐漸下降。除傷后1d與3d陽性細(xì)胞率差異無統(tǒng)計學(xué)意義外(P＞0.05),其它各組與相鄰上組的細(xì)胞總數(shù)及陽性細(xì)胞率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示正常對照皮膚內(nèi)有c-jun陽性條帶,皮膚切創(chuàng)傷后各時間段組c-jun表達(dá)強度有一定規(guī)律。傷后0～12h,表達(dá)逐漸增強;12h達(dá)高峰。1～5d稍有下降;傷后7d,c-jun表達(dá)稍有上升,隨后表達(dá)漸降低。但12h組中c-jun表達(dá)相對較多,到1 4d時,c-jun基本與對照組表達(dá)情況一致。除0h與對照組間平均光密度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義外(P＞0.05),其余各組間平均光密度值差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論 1、正常對照組小鼠皮膚的表皮、毛囊及皮脂腺中表達(dá)c-jun。 2、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中多核粒細(xì)胞、單個核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞均表達(dá)c-jun。 3、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中c-jun對誘導(dǎo)多核粒細(xì)胞、單個核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞的凋亡可能起著重要作用。 4、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中c-jun表達(dá)的規(guī)律性變化可用于皮膚切創(chuàng)損傷時間的推斷。
[Abstract]:objective
Skin injury healing is a complex and continuous process, including blood component agglutination, inflammation, granulation tissue formation, newborn epithelial cover, connective tissue contraction and fibrosis. Proto oncogene c-jun is one of the immediate early gene jun family members, members of the alkaline leucine zipper family of transcription factors, can be combined in Xu. The multiple gene promoter participates in the regulation of gene transcription, and its expression products play an important role in the process of multiple gene expression, cell apoptosis, proliferation and differentiation. In this study, immunohistochemical staining and Westernblot technique were used to detect the changes of the expression of c-jun in the injured area of mice after injury in the same time period, and the c-Jun was discussed. The role of skin wound healing and the possibility of its application in the estimation of injury time.
Experimental materials and methods
55 healthy adult (8 weeks old) Kunming mice were divided into 11 groups, male and female, with body mass from 35 to 40g, and randomly divided into 11 groups. The skin incision was divided into 10 time groups, the other group was the normal control group, and the other groups were 5 mice. After the ether gas inhalation anesthesia, the back shearing treatment, the routine operation disinfection and the longitudinal length 1.5cm skin in the center of the back. After the injury, 0h, 3h, 6h, 12h, 1D, 3D, 5D, 7d, 10d and 14d respectively removed the mice from the cervical vertebra, and took the 1.5cm x 1.0cm skin tissue in the wound. The application of ern blot detection. The changes of c-jun in 55 mice were detected by immunohistochemistry and Western blot. The non cut mice skin tissue was used as the control, and the microscope x 400 times, the 10 fields were randomly selected in the injured area and the surrounding area. The number of cells, the number of positive cells and the positive cells were counted. The average optical density of each time period was detected by FluochemV2.0 software, and the measured data were measured with mean mean deviation ((?) + s). The single factor variance analysis was carried out with SPSS13.0 for Windows, and the difference was statistically significant with the difference of P < 0.05.
Result
C-Jun was mainly expressed in the skin, hair follicle and sebaceous gland in the skin of normal control mice. A few multinucleated granulocytes were expressed as c-Jun after injury. After injury, 6 to 24h, a large number of infiltrating multinucleated granulocytes and some mononuclear cells were c-Jun positive. 1 to 3D after injury, and the main c-Jun positive cells were mainly mononuclear cells and fibroblasts. 5 ~ 14d after injury, c-jun was mainly expressed in fibroblasts. The rate of c-jun positive cells was lower at 0h after injury. With the prolongation of the injury time, the rate of c-jun positive cells increased gradually and the 12h reached the peak. The rate of 1 to 5D after injury was highly expressed. The rate of c-Jun positive cells reached second peaks at 7d after injury, and then gradually decreased. 1D and 3D positive after injury. The difference of cell rate was not statistically significant (P > 0.05). The difference of cell number and positive cell rate between the other groups and adjacent groups were statistically significant (P < 0.05).Western blot results showed that there were c-Jun positive bands in the normal control skin, and the expression intensity of c-jun in each time group after the skin incisal trauma had a certain regularity. 0 to 12h after injury, expression by 0 to 12h after injury. Gradually, the peak of 12h reached a slight decrease in.1 to 5D, and the expression of 7D, c-jun increased slightly after the injury, and then the expression gradually decreased. But the expression of c-jun in 12h group was relatively more, and at 1 4D, the expression of c-jun was basically the same as that of the control group. The mean light density difference between 0h and control group was not statistically significant (P > 0.05), and the mean light density difference between the other groups was poor. The difference was statistically significant (P < 0.05).
conclusion
1, the epidermis, hair follicle and sebaceous glands of normal control mice were expressed in c-Jun..
2, multinucleated granulocytes, mononuclear cells and fibroblasts were expressed in c-Jun. during wound healing in mice.
3, c-jun may play an important role in inducing apoptosis of multinucleated granulocytes, mononuclear cells and fibroblasts during wound healing in mice.
4, the regular change of c-jun expression during wound healing in mice can be used to deduce the time of wound healing.

【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：D919

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