本文選題：法醫(yī)病理學 + 皮膚損傷��； 參考：《中國醫(yī)科大學》2009年碩士論文

【摘要】： 目的 皮膚損傷愈合是一個復雜而連續(xù)的過程,包括血液成分凝集、炎癥、肉芽組織形成、新生上皮覆蓋、結締組織收縮和纖維化等過程。原癌基因c-jun是即刻早期基因jun家族成員之一,屬于堿性亮氨酸拉鏈家族核內轉錄因子成員,可以結合在許多基因的啟動子上參與基因轉錄的調控,其表達產物在多種基因表達、細胞凋亡、增殖、分化等過程中起重要作用。本研究應用免疫組織化學染色和Westernblot技術,檢測小鼠皮膚損傷區(qū)在損傷后不同時間段c-jun表達的變化情況,探討c-jun在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時間推斷上應用的可能性。 實驗材料與方法 健康成年(8周齡)清潔級昆明系小鼠55只,雌雄不限,體質量35～40g,隨機分為11組。其中皮膚切創(chuàng)分為10個時間段組,另一組為正常對照組,每組均為5只小鼠。乙醚氣體吸入麻醉,背部剪毛處理后,常規(guī)手術消毒,在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口,深達筋膜。分別于傷后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠脫頸椎處死,取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。對照組小鼠麻醉后背部剪毛,不做切創(chuàng),觀察至14d,脫頸椎處死,取相同部位同等大小皮膚,以備HE染色、免疫組織化學染色和Western blot檢測應用。應用免疫組織化學染色和Western blot技術檢測55例小鼠皮膚切創(chuàng)后各時間段c-jun變化情況,以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照,顯微鏡×400倍下,在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野,計數細胞總數、陽性細胞數及陽性細胞率。應用FluochemV2.0軟件檢測各時間段的平均光密度值,測得數據用均數±標準差((?)±s)表示。用SPSS13.0 for Windows進行單因素方差分析,以P＜0.05為差異有統計學意義。 結果 正常對照組小鼠皮膚中c-jun主要表達在表皮、毛囊和皮脂腺等處。傷后3h即可見少數多核粒細胞有c-jun表達。傷后6～24h,大量浸潤的多核粒細胞和部分單個核細胞c-jun呈陽性。傷后1～3d,c-jun陽性細胞主要以單個核細胞和成纖維細胞為主。傷后5～14d,c-jun主要在成纖維細胞中表達。傷后0h時c-jun陽性細胞率比較低,隨著傷后時間的延長,c-jun陽性細胞率逐漸增加,12h達到高峰。傷后1～5d一直呈高表達狀態(tài)。傷后7d時c-jun陽性細胞率達到第二峰,隨后逐漸下降。除傷后1d與3d陽性細胞率差異無統計學意義外(P＞0.05),其它各組與相鄰上組的細胞總數及陽性細胞率差異均有統計學意義(P＜0.05)。Western blot結果顯示正常對照皮膚內有c-jun陽性條帶,皮膚切創(chuàng)傷后各時間段組c-jun表達強度有一定規(guī)律。傷后0～12h,表達逐漸增強;12h達高峰。1～5d稍有下降;傷后7d,c-jun表達稍有上升,隨后表達漸降低。但12h組中c-jun表達相對較多,到1 4d時,c-jun基本與對照組表達情況一致。除0h與對照組間平均光密度值差異無統計學意義外(P＞0.05),其余各組間平均光密度值差異均具有統計學意義(P＜0.05)。 結論 1、正常對照組小鼠皮膚的表皮、毛囊及皮脂腺中表達c-jun。 2、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中多核粒細胞、單個核細胞及成纖維細胞均表達c-jun。 3、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中c-jun對誘導多核粒細胞、單個核細胞及成纖維細胞的凋亡可能起著重要作用。 4、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中c-jun表達的規(guī)律性變化可用于皮膚切創(chuàng)損傷時間的推斷。
[Abstract]:objective
Skin injury healing is a complex and continuous process, including blood component agglutination, inflammation, granulation tissue formation, newborn epithelial cover, connective tissue contraction and fibrosis. Proto oncogene c-jun is one of the immediate early gene jun family members, members of the alkaline leucine zipper family of transcription factors, can be combined in Xu. The multiple gene promoter participates in the regulation of gene transcription, and its expression products play an important role in the process of multiple gene expression, cell apoptosis, proliferation and differentiation. In this study, immunohistochemical staining and Westernblot technique were used to detect the changes of the expression of c-jun in the injured area of mice after injury in the same time period, and the c-Jun was discussed. The role of skin wound healing and the possibility of its application in the estimation of injury time.
Experimental materials and methods
55 healthy adult (8 weeks old) Kunming mice were divided into 11 groups, male and female, with body mass from 35 to 40g, and randomly divided into 11 groups. The skin incision was divided into 10 time groups, the other group was the normal control group, and the other groups were 5 mice. After the ether gas inhalation anesthesia, the back shearing treatment, the routine operation disinfection and the longitudinal length 1.5cm skin in the center of the back. After the injury, 0h, 3h, 6h, 12h, 1D, 3D, 5D, 7d, 10d and 14d respectively removed the mice from the cervical vertebra, and took the 1.5cm x 1.0cm skin tissue in the wound. The application of ern blot detection. The changes of c-jun in 55 mice were detected by immunohistochemistry and Western blot. The non cut mice skin tissue was used as the control, and the microscope x 400 times, the 10 fields were randomly selected in the injured area and the surrounding area. The number of cells, the number of positive cells and the positive cells were counted. The average optical density of each time period was detected by FluochemV2.0 software, and the measured data were measured with mean mean deviation ((?) + s). The single factor variance analysis was carried out with SPSS13.0 for Windows, and the difference was statistically significant with the difference of P < 0.05.
Result
C-Jun was mainly expressed in the skin, hair follicle and sebaceous gland in the skin of normal control mice. A few multinucleated granulocytes were expressed as c-Jun after injury. After injury, 6 to 24h, a large number of infiltrating multinucleated granulocytes and some mononuclear cells were c-Jun positive. 1 to 3D after injury, and the main c-Jun positive cells were mainly mononuclear cells and fibroblasts. 5 ~ 14d after injury, c-jun was mainly expressed in fibroblasts. The rate of c-jun positive cells was lower at 0h after injury. With the prolongation of the injury time, the rate of c-jun positive cells increased gradually and the 12h reached the peak. The rate of 1 to 5D after injury was highly expressed. The rate of c-Jun positive cells reached second peaks at 7d after injury, and then gradually decreased. 1D and 3D positive after injury. The difference of cell rate was not statistically significant (P > 0.05). The difference of cell number and positive cell rate between the other groups and adjacent groups were statistically significant (P < 0.05).Western blot results showed that there were c-Jun positive bands in the normal control skin, and the expression intensity of c-jun in each time group after the skin incisal trauma had a certain regularity. 0 to 12h after injury, expression by 0 to 12h after injury. Gradually, the peak of 12h reached a slight decrease in.1 to 5D, and the expression of 7D, c-jun increased slightly after the injury, and then the expression gradually decreased. But the expression of c-jun in 12h group was relatively more, and at 1 4D, the expression of c-jun was basically the same as that of the control group. The mean light density difference between 0h and control group was not statistically significant (P > 0.05), and the mean light density difference between the other groups was poor. The difference was statistically significant (P < 0.05).
conclusion
1, the epidermis, hair follicle and sebaceous glands of normal control mice were expressed in c-Jun..
2, multinucleated granulocytes, mononuclear cells and fibroblasts were expressed in c-Jun. during wound healing in mice.
3, c-jun may play an important role in inducing apoptosis of multinucleated granulocytes, mononuclear cells and fibroblasts during wound healing in mice.
4, the regular change of c-jun expression during wound healing in mice can be used to deduce the time of wound healing.

【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：D919

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