本文選題：SPAG　切入點：免疫磁珠　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報》2014年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的利用精子特異性抗體SPAG8(Sperm associated antigen 8)結(jié)合免疫磁珠技術(shù)分離混合細(xì)胞系中的精子,建立混合斑中精子細(xì)胞分離的新方法。方法制備含有精子103、104、105/mL與陰道上皮細(xì)胞104/mL的3種混合懸液各10例,各樣本制作混懸液及模擬混合斑各2份,分別以生物素標(biāo)記的SPAG8單克隆抗體孵育特異結(jié)合混合懸液及混合斑中的精子,然后用親和素包被的免疫磁珠通過生物素-親和素復(fù)合體捕獲分離精子細(xì)胞,提取精子DNA進(jìn)行STR復(fù)合擴增和DNA分型檢測,同時以差異裂解法檢測混懸液及混合斑中的精子進(jìn)行方法比較。結(jié)果免疫磁珠-親和素-生物素-抗體復(fù)合物可分離混合細(xì)胞體系中的精子,當(dāng)混合懸液內(nèi)的精子數(shù)量達(dá)到103/mL時,90%的樣本可得到13個STR基因座的單一男性分型,精子數(shù)量達(dá)到104/mL時,90%的樣本均可得到16個STR基因座的單一男性分型;含有104/mL以上數(shù)量精子的混懸液制作的混合斑,單一男性13個STR基因座的正確分型率達(dá)80%以上,混懸液及混合斑的免疫磁珠法有效STR檢出率高于傳統(tǒng)的差異裂解法。結(jié)論本方法簡便快捷,可作為混合斑法醫(yī)學(xué)檢驗的有效補充手段。
[Abstract]:Objective to isolate spermatozoa from mixed cell lines by sperm specific antibody SPAG8(Sperm associated antigen 8 and immunomagnetic beads. A new method for the separation of sperm cells from mixed plaque was established. Methods three kinds of mixed suspensions containing 103X 104C / mL spermatozoa and 104 / mL vaginal epithelial cells were prepared. The spermatozoa were incubated with biotinylated SPAG8 monoclonal antibodies (McAbs), respectively, and spermatozoa in mixed suspension and mixed spot were incubated with avidin coated immunomagnetic beads, which were captured and separated by biotin-affinity complex. Sperm DNA was extracted for STR amplification and DNA typing. At the same time, the method of differential cleavage was used to detect the spermatozoa in suspension and mixed spot. Results the immunomagnetic bead avidin biotin antibody complex could separate the sperm from the mixed cell system. When the number of spermatozoa in mixed suspension was 103 / mL, the single male typing of 13 STR loci could be obtained in 90% of the samples, and the single male typing of 16 STR loci could be obtained in 90% samples with a sperm count of 104% / mL. The correct typing rate of 13 STR loci in a single male was more than 80% for the mixed spots made by suspension containing more than 104% mL of sperm. The detectable rate of STR by immunomagnetic bead method is higher than that by traditional differential cleavage method. Conclusion this method is simple and rapid and can be used as an effective supplementary method for medical examination of mixed plaque.
【作者單位】： 山東省高校證據(jù)鑒識重點實驗室(山東政法學(xué)院);重慶市公安局物證鑒定中心;重慶市公安局江北分局法醫(yī)科;
【基金】：山東省高校證據(jù)鑒識重點實驗室(山東政法學(xué)院)開放課題(2014-01) 重慶市公安局科技攻關(guān)項目(2012-05)~~
【分類號】：D919.4

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本文編號：1608655