發(fā)布時(shí)間：2017-11-15 14:04

  本文關(guān)鍵詞：乙醇對原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)及細(xì)胞活性的影響

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【摘要】：背景與目的:現(xiàn)如今,“酒”已經(jīng)成為人們?nèi)粘Ｉ钪斜夭豢缮俚囊环N“飲料”,甚至發(fā)展成為一種文化。酒其主要成分是乙醇,而乙醇是一種在體內(nèi)可自由擴(kuò)散且氧化、代謝緩慢的物質(zhì),對人體許多系統(tǒng)臟器均有損傷作用,且能輕易地通過血腦屏障,導(dǎo)致大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。在我國,由于人們生活水平的不斷提高,并受我國傳統(tǒng)飲酒文化的影響,以及“酒”在社會人際交流中的作用,乙醇濫用、乙醇中毒現(xiàn)象呈增長趨勢,并呈現(xiàn)年輕化趨勢。而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,海馬神經(jīng)元對乙醇損傷的敏感性比較高,可引起海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能的改變,造成學(xué)習(xí)記憶認(rèn)知功能的損害。本研究主要是通過體外培養(yǎng)原代大鼠海馬神經(jīng)元,觀察在不同濃度乙醇的作用下,其形態(tài)學(xué)和細(xì)胞活性發(fā)生的變化,為進(jìn)一步探究乙醇對神經(jīng)元損傷的作用機(jī)制提供一定的依據(jù)。方法:從實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的24h出生的SD大鼠乳鼠,分離出海馬神經(jīng)元,在體外無血清培養(yǎng)至第7天,經(jīng)NSE免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定海馬神經(jīng)元的純度。將培養(yǎng)好的海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為低劑量組、中劑量組、高劑量組和對照組,在培養(yǎng)液中加入無水乙醇,使培養(yǎng)液中乙醇的終濃度分別為11mM,33mM,66mM,對照組在培養(yǎng)液中加入等量生理鹽水,在二氧化碳培養(yǎng)箱共同培養(yǎng)1h、12h、24h。然后通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察不同濃度不同作用時(shí)間干預(yù)下海馬神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化,用CCK-8試劑盒檢測海馬神經(jīng)元活性的變化。結(jié)果:1.不同濃度不同作用時(shí)間乙醇干預(yù)下海馬神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化:低劑量組加入11mM乙醇,各時(shí)間段細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生明顯改變,胞漿和突起著色的深淺未發(fā)生明顯變化,神經(jīng)元的特征與正常對照組基本相同。中劑量組加入33mM乙醇,作用1h后極個別細(xì)胞的邊緣變得模糊不清,細(xì)胞未出現(xiàn)明顯的聚集現(xiàn)象,細(xì)胞突起數(shù)量減少不明顯。作用12h后細(xì)胞開始出現(xiàn)聚集現(xiàn)象,呈簇狀,可見神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞開始增殖。作用24h后可見細(xì)胞密度明顯降低,細(xì)胞之間的突觸連接減少,每個細(xì)胞的突起數(shù)量減少,但仍可見稀疏的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。高劑量組加入66mM乙醇,作用1h后細(xì)胞的突起長度變短,突起數(shù)量變少。作用12h后細(xì)胞簇狀聚集現(xiàn)象明顯,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增殖大量增殖。作用24h后細(xì)胞大量死亡,細(xì)胞密度極低,細(xì)胞的突起變短,細(xì)胞間的突觸連接極少,幾乎不能形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。2.不同濃度不同作用時(shí)間乙醇干預(yù)下海馬神經(jīng)元的活性變化:不同濃度乙醇對海馬神經(jīng)元細(xì)胞活性的影響與對照組相比有明顯的變化,細(xì)胞活性在不同作用時(shí)間均有下降,活性改變的程度與乙醇作用濃度呈劑量依賴關(guān)系,尤其是高濃度組對海馬神經(jīng)元活性的改變更為明顯。相同濃度乙醇在不同的作用時(shí)間對海馬神經(jīng)元的活性的影響與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.采用陰道涂片法和循環(huán)交配法相結(jié)合的方法,成功獲取精確妊娠孕鼠和P0期乳鼠,簡化動物繁殖過程,保證實(shí)驗(yàn)中乳鼠的供給。2.中、高劑量的乙醇會造成原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的胞體損傷,細(xì)胞間的突觸連接減少,突起長度變短,突起數(shù)量減少,且與作用時(shí)間相關(guān)聯(lián)。3.不同濃度的乙醇能夠引起原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元活性的降低,與乙醇濃度呈劑量依賴性關(guān)系,且與作用時(shí)間有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：D919

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本文編號：1190023