本文關(guān)鍵詞：2個(gè)miniSTR基因座等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物的制備及其遺傳多態(tài)性研究

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【摘要】：目的 在常規(guī)法醫(yī)學(xué)DNA檢驗(yàn)中，STR遺傳標(biāo)記具有遺傳多態(tài)性高、檢測(cè)方法簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，因此在法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和親權(quán)鑒定中被廣泛使用。然而，在實(shí)際檢案時(shí)常會(huì)面臨各種由于物理、化學(xué)、生物等因素所導(dǎo)致的微量物證或腐敗檢材，應(yīng)用STR試劑盒進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，常不能得出結(jié)論，這就給案件的及時(shí)偵破帶來(lái)困難。miniSTR技術(shù)是通過(guò)重新設(shè)計(jì)出靠近核心重復(fù)序列的引物，使整個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物縮短到150bp左右，極大地提高了對(duì)降解檢材的檢出率。在將miniSTR技術(shù)應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)分析時(shí)，需要一套精確的、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化命名的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物。本研究擬采用分子克隆技術(shù)制備miniSTR D3S4529和D12ATA632個(gè)基因座的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物，同時(shí)將自制的標(biāo)準(zhǔn)物應(yīng)用到中國(guó)漢族人群中，研究其群體遺傳學(xué)參數(shù)，并對(duì)此方法制備的標(biāo)準(zhǔn)物應(yīng)用于法庭科學(xué)實(shí)踐中的價(jià)值和意義進(jìn)行評(píng)價(jià)。 方法 篩選、分離目的基因座的所有等位基因片段，將其插入到pMD18-T Vector中，，導(dǎo)入大腸桿菌，1.1%的瓊脂糖凝膠電泳篩選陽(yáng)性克隆，將陽(yáng)性克隆進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后，獲得每個(gè)等位基因片段的重組質(zhì)粒。用熒光標(biāo)記引物PCR擴(kuò)增，ABI3130XL遺傳分析儀分型驗(yàn)證后，再經(jīng)測(cè)序證實(shí)插入片段的結(jié)構(gòu)及大小，對(duì)插入的等位基因片段按照國(guó)際法庭血液遺傳學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)（International Society ofForensic Haemogenetics，ISFH）進(jìn)行命名。以含有正確插入片段的質(zhì)粒為模板，混合各基因座等位基因重組質(zhì)粒，制備出等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物，并用自制的miniSTR D3S4529和D12ATA63等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)中國(guó)漢族人群樣本進(jìn)行群體遺傳學(xué)分析。 結(jié)果 用此方法成功制備了目的基因座的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物，測(cè)序證實(shí)其核心重復(fù)序列分別為(ATCT)m+(ATTT)n、(TAA)m+(CAA)n。對(duì)835名中國(guó)漢族人群的遺傳多態(tài)性研究中，miniSTR D3S4529基因座檢出7個(gè)等位基因，分別為12、13、14、15、16、17和18；miniSTR D12ATA63基因座檢出11個(gè)等位基因，分別為11、12、13、14、15、16、17、18、19、20和21，經(jīng)χ2值檢驗(yàn)，其等位基因頻率分布與Hardy-Weinberg平衡（P0.05）相吻合，2個(gè)miniSTR基因座的雜合度分別為0.752、0.723，多態(tài)信息含量分別為0.71、0.71。 結(jié)論 應(yīng)用分子克隆技術(shù)制備等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物，是一種實(shí)現(xiàn)等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)化的可行方法。將自制的標(biāo)準(zhǔn)物應(yīng)用到中國(guó)漢族人群中，研究表明，miniSTRD3S4529和D12ATA63基因座在中國(guó)漢族人群中具有高度遺傳多態(tài)性，因此可考慮在個(gè)人識(shí)別和親權(quán)鑒定等案件中應(yīng)用，miniSTR D3S4529和D12ATA63是2個(gè)適合法庭科學(xué)研究的遺傳標(biāo)記。
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)物證學(xué) 等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物 分子克隆 miniSTR 遺傳多態(tài)性
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：D919
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-24
• 1.實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑12-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料12
• 1.2 主要儀器12-13
• 1.3 主要試劑13-14
• 1.4 主要試劑的配制14
• 2. 方法14-24
• 2.1 分子克隆引物設(shè)計(jì)思路14-15
• 2.2 目的等位基因的篩選15-17
• 2.3 目的等位基因的分離17-18
• 2.4 目的等位基因的回收18
• 2.5 目的等位基因的克隆18-21
• 2.6 重組質(zhì)粒的驗(yàn)證21-22
• 2.7 等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物的制備22-23
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23
• 2.9 將自制的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物應(yīng)用于親子鑒定案例23-24
• 結(jié)果24-33
• 1. 目的等位基因的瓊脂糖凝膠電泳24-25
• 2. 目的等位基因與質(zhì)粒載體的連接.轉(zhuǎn)化25-26
• 3. 菌落 PCR 驗(yàn)證26
• 4. 目的等位基因的測(cè)序結(jié)果與命名26-27
• 5. 2 個(gè) miniSTR 基因座等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物的毛細(xì)管電泳27-28
• 6. 2 個(gè) miniSTR 基因座的群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)28-31
• 7. 2 個(gè) miniSTR 基因座在親子鑒定案件中的應(yīng)用結(jié)果31-33
• 討論33-37
• 1. miniSTR 技術(shù)的原理及對(duì)于微量降解檢材的優(yōu)勢(shì)33
• 2. miniSTR 基因座的選擇33-34
• 3. 等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物的概念34
• 4. 分子克隆法制備等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物34-35
• 5. 2 個(gè) miniSTR 基因座在中國(guó)漢族人群中的遺傳多態(tài)性35-36
• 6. 2 個(gè) miniSTR 基因座在親子鑒定案件中的應(yīng)用36-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 綜述42-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 附錄51-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況54-55
• 致謝55-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

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2 劉麗紅,孫晶,施秀琴,曹峰林;HLA與結(jié)核病相關(guān)性研究[J];哈爾濱醫(yī)藥;2001年01期

3 袁曉軍,顧龍君,趙金彩,陳文高,梁愛(ài)斌,葉輝;上海地區(qū)漢族人谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性分析(英文)[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2003年04期

4 陳輝,李曉雯,連建華,宋國(guó)英,程曉麗,賀穎,齊華,劉華,張欽憲;河南漢族人群六個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列基因座遺傳多態(tài)性分析[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2004年06期

5 張洪勤;吳淑珍;畢云天;包其郁;;浙南漢族人群18號(hào)染色體上三個(gè)STR位點(diǎn)的遺傳多態(tài)性研究[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2005年11期

6 鄒佳寧;宋聚先;常楚瑞;王曉麗;;貴州天麻種質(zhì)資源的RAPD分析[J];中藥材;2006年09期

7 喬可;沈靚;賴江華;;DXS6804基因座等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物的克隆制備及其群體遺傳學(xué)研究[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年05期

8 李松峰;徐林;龔繼春;周麗寧;鄧瓊英;羅國(guó)容;;廣西金秀瑤族12個(gè)STR基因座遺傳多態(tài)性[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年05期

9 張躍兵;羅學(xué)榮;劉霞;;兒童注意缺陷多動(dòng)障礙遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J];國(guó)際精神病學(xué)雜志;2008年02期

10 陸保;趙明倫;;廣東湛江和廣西貴縣兩個(gè)漢族群體腺苷脫氨酶的遺傳多態(tài)現(xiàn)象[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;1989年01期

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1 張霽;侯一平;吳謹(jǐn);李英碧;王玉芳;魏玉峰;;中國(guó)人群9號(hào)染色體10個(gè)STR基因座的遺傳多態(tài)性及其在法庭醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[A];全國(guó)第六次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要集[C];2000年

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1 張荔子;血樣有助于破解遺傳之謎[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2003年

2 廣州醫(yī)學(xué)院附屬二院 陸志城;遺傳因素與藥物作用息息相關(guān)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

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5 永紅;HIV：令人吃驚的突變高手[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

6 薛開(kāi)先;基因組學(xué)研究對(duì)中醫(yī)現(xiàn)代化的啟示[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2001年

7 陸志誠(chéng);藥物基因組學(xué)常見(jiàn)問(wèn)題解答（未完待續(xù)）[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

8 中國(guó)科學(xué)院遺傳及發(fā)育生物學(xué)研究所人類學(xué)博士 金峰（蒙古族）;從分子遺傳學(xué)看人類的起源[N];中國(guó)民族報(bào);2002年

9 記者 胡航宇;西南大學(xué)完成家蠶全基因組圖譜[N];中國(guó)教育報(bào);2008年

10 記者 易運(yùn)文;“千人計(jì)劃”解密人類生老病死[N];光明日?qǐng)?bào);2010年

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1 趙春霞;基因序列變異分析的方法研究及其臨床應(yīng)用[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（大連化學(xué)物理研究所）;2004年

2 劉穎;CYPIIE1與GSTP1多態(tài)性及mRNA水平在酒精性肝病中的研究[D];吉林大學(xué);2009年

3 張逸凡;氯諾昔康臨床藥物動(dòng)力學(xué)及代謝的遺傳多態(tài)性研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2005年

4 裴黎;毒品原植物大麻DNA檢測(cè)技術(shù)的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

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7 道毅俊;腎移植患者麥考酚酸的藥動(dòng)學(xué)和遺傳多態(tài)性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

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