本文關(guān)鍵詞：眶內(nèi)及眶外針刺對(duì)兔前部缺血性視神經(jīng)病變中Bax及Bcl-2表達(dá)影響的研究

  更多相關(guān)文章： 眶內(nèi)穴 前部缺血性視神經(jīng)病變 細(xì)胞凋亡 針刺

【摘要】：背景前部缺血性視神經(jīng)病變(Anterior Ischemic Optic Neuropathy, AION)是一種常見于中老年人的視神經(jīng)相關(guān)性視力損傷的疾病,主要見于50歲以上人群。本病長(zhǎng)期以來病理機(jī)制都未得于清晰闡釋,而有效治療方法的證據(jù)更是缺乏,使得臨床工作者對(duì)本病的處理一直止于非特異性應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等基礎(chǔ)措施。而中醫(yī)藥雖得到不少臨床研究的支持,但既缺乏樣本量足夠大、研究足夠嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难C醫(yī)學(xué)證據(jù),亦缺乏設(shè)計(jì)精密的基礎(chǔ)研究。但近年來,對(duì)本病的臨床和基礎(chǔ)研究均有增多的趨勢(shì)。一大原因也得益于與人類疾病自然病理生理特征擬合度高的動(dòng)物模型的建立,使得本病的病理機(jī)制得到一步步揭示,從而出現(xiàn)了有針對(duì)性的治療方法研究。而對(duì)于中醫(yī)藥從業(yè)人員,該模型的建立亦為中醫(yī)藥的基礎(chǔ)研究拓展了探索空間,同時(shí),也為一些對(duì)療效及不良反應(yīng)有爭(zhēng)議的治療方法爭(zhēng)取了嘗試的可能。而對(duì)于本病的病理基礎(chǔ),多家學(xué)者發(fā)現(xiàn),其主要的機(jī)制是視神經(jīng)受到缺血缺氧的刺激后,啟動(dòng)了細(xì)胞凋亡機(jī)制,造成視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡,數(shù)量減少,從而進(jìn)一步導(dǎo)致視功能的損傷。同時(shí),針刺治療本病的療效亦得到了許多中醫(yī)臨床工作者的認(rèn)可,尤其是眶內(nèi)針刺的運(yùn)用漸趨流行,不少學(xué)者認(rèn)為有很大的臨床推廣價(jià)值。但眶內(nèi)針刺的風(fēng)險(xiǎn)亦為業(yè)內(nèi)所共知,眶內(nèi)針刺對(duì)療效是否有影響,是否有臨床推廣價(jià)值,并未得到臨床或基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí),需謹(jǐn)慎對(duì)待。而針刺對(duì)于其他疾病的細(xì)胞凋亡干預(yù)作用已得到了廣泛研究。本課題在總結(jié)前人研究的基礎(chǔ)上,提出針刺治療前部缺血性視神經(jīng)病變的病理機(jī)制,有可能是對(duì)疾病發(fā)生過程中所激活的細(xì)胞凋亡的線粒體途徑有一定的干預(yù)作用。目的本課題旨在通過動(dòng)物模型,一方面驗(yàn)證針刺對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的線粒體途徑的干預(yù)作用,一方面評(píng)價(jià)眶內(nèi)針刺的安全性和對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用,權(quán)衡利蔽,為廣大臨床工作者提供參考。方法選取新西蘭白兔12只,將左眼采用光動(dòng)力方法制作成前部缺血性視神經(jīng)病變的兔眼模型。隨機(jī)分為四組(n=3)：模型組、眶內(nèi)針組、眶外針組、眶內(nèi)+眶外針組,再隨機(jī)選取3只左眼組成空白對(duì)照組,分別施以相應(yīng)的治療,眶內(nèi)針組選取睛明、承泣、球后,眶外針組選取攢竹、魚腰、竅明。眶內(nèi)+眶外針組為上兩組穴位的合并。攢竹、魚腰及竅明平刺0.3～0.5寸,睛明、承泣、球后均避開眼球,從眶緣向內(nèi)直刺0.3寸。每日1次,每次留針30min。治療3天后,所有動(dòng)物處死獲取眼后節(jié)標(biāo)本,制作石蠟病理切片,分別進(jìn)行HE染色、Bax和Bcl-2免疫組化染色,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步測(cè)量視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度,計(jì)數(shù)免疫組化陽性RGCs,計(jì)算Bax/Bcl-2比值。每個(gè)標(biāo)本選取3個(gè)切面進(jìn)行每個(gè)指標(biāo)的檢測(cè),即N=9。結(jié)果1、HE染色見視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)的改變,模型組明顯水腫,結(jié)構(gòu)疏松,眶內(nèi)針組及眶外針組的改善程度不明顯,而眶內(nèi)+眶外針組結(jié)構(gòu)較為緊密。但視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度的測(cè)量,各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2、Bax陽性RGC計(jì)數(shù)：(1)模型組與正常組相比P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,模型組Bax陽性RGC較正常組多：(2)與模型組相比,各治療組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(3)與正常組相比,眶外針組與眶內(nèi)+眶外針組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,正常組Bax陽性RGC計(jì)數(shù)較上兩組少,而眶內(nèi)針組與正常組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(4)各治療組相互比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但從趨勢(shì)上看,模型組眶內(nèi)+眶外針組眶外針組眶內(nèi)針組正常組。3、Bcl-2陽性RGC計(jì)數(shù)：(1)模型組與正常組相比,P0.01,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,模型組Bcl-2陽性RGC較正常組少；(2)與模型組相比,眶外針組與眶內(nèi)+眶外針組P值均0.01,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,模型組Bcl-2陽性RGC計(jì)數(shù)較上兩組少,而眶內(nèi)針組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(3)與正常組相比,眶內(nèi)針組與眶外針組P值均0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,正常組Bcl-2陽性RGC計(jì)數(shù)較上兩組多,而眶內(nèi)+眶外針組與正常組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(4)與眶內(nèi)針組相比,眶外針組與眶內(nèi)+眶外針組P值均0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,眶內(nèi)針組Bcl-2陽性RGC計(jì)數(shù)較上兩組少；(5)眶外針組與眶內(nèi)+眶外針組相比Bcl-2陽性RGC計(jì)數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(6)各組從趨勢(shì)上看,正常組眶內(nèi)+眶外針組眶外針組眶內(nèi)針組模型組。4、Bax/Bcl-2比值：(1)模型組與正常組相比,P0.01,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,模型組Bax/Bcl-2較正常組高；(2)與模型組相比,眶外針組與眶內(nèi)+眶外針組P值均0.01,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,模型組Bax/Bcl-2較上兩組高,而眶內(nèi)針組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(3)與正常組相比,眶內(nèi)針組與眶外針組P值均0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,正常組Bax/Bcl-2較上兩組低,而眶內(nèi)+眶外針組與正常組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(4)與眶內(nèi)針組相比,眶外針組與眶內(nèi)+眶外針組P值均0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,眶內(nèi)針組Bax/Bcl-2較上兩組高；(5)眶外針組與眶內(nèi)+眶外針組相比Bax/Bcl-2無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(6)各組從趨勢(shì)上看,模型組眶內(nèi)針組眶外針組眶內(nèi)+眶外針組正常組。結(jié)論1、在本實(shí)驗(yàn)條件下,眶內(nèi)+眶外針組與眶外針組均能下調(diào)Bax/Bcl-2比值,對(duì)細(xì)胞凋亡的線粒體途徑的上游反應(yīng)有一定抑制作用；2、單純眶內(nèi)針刺雖未表現(xiàn)出與模型組的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但在眶外針的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用,對(duì)下調(diào)Bax/Bcl-2有一定增益作用；3、三個(gè)治療組綜合來看,表現(xiàn)出了眶內(nèi)十眶外針組眶外針組眶內(nèi)針組的趨勢(shì),眶內(nèi)針與眶外針聯(lián)合治療對(duì)Bax/Bcl-2下調(diào)作用最強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：眶內(nèi)穴 前部缺血性視神經(jīng)病變 細(xì)胞凋亡 針刺
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R245
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 英文縮略詞13-14
• 文獻(xiàn)綜述14-38
• 1 前部缺血性視神經(jīng)病變14-17
• 1.1 概述14
• 1.2 病因及發(fā)病相關(guān)因素14-15
• 1.3 臨床表現(xiàn)與鑒別15-16
• 1.4 西醫(yī)治療16-17
• 2 AION的動(dòng)物模型17-20
• 2.1 傳統(tǒng)AION動(dòng)物模型17-18
• 2.2 光動(dòng)力方法制備AION模型18-20
• 3 神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡和Bax/Bcl-220-23
• 3.1 細(xì)胞凋亡及Bax/Bcl-220-21
• 3.2 AION與細(xì)胞凋亡21-23
• 4 中醫(yī)對(duì)AION的認(rèn)識(shí)23-29
• 4.1 病因病機(jī)23-25
• 4.2 針刺治療目疾25-27
• 4.3 針刺與細(xì)胞凋亡27-29
• 參考文獻(xiàn)29-38
• 前言38-39
• 實(shí)驗(yàn)研究39-45
• 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物39
• 1.1 動(dòng)物來源39
• 1.2 動(dòng)物分組39
• 2 主要儀器設(shè)備39-40
• 3 主要實(shí)驗(yàn)試劑40
• 4 方法40-45
• 4.1 AION兔眼模型的制備40-41
• 4.1.1 模型制備40-41
• 4.1.2 模型評(píng)價(jià)41
• 4.2 針刺治療41
• 4.3 標(biāo)本采集及處理41-42
• 4.4 HE染色42-43
• 4.4.1 步聚42-43
• 4.4.2 觀察方法43
• 4.5 免疫組化染色43-44
• 4.5.1 步驟43-44
• 4.5.2 觀察方法44
• 4.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法44-45
• 結(jié)果45-53
• 1 造模評(píng)價(jià)45
• 1.1 眼底檢查45
• 1.2 FFA檢查45
• 2 治療評(píng)價(jià)45-53
• 2.1 HE染色45-47
• 2.1.1 總體形態(tài)改變46
• 2.1.2 視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度46-47
• 2.2 Bax及Bcl-2免疫組化染色47-53
• 2.2.1 Bax免疫組化染色48-49
• 2.2.2 Bcl-2免疫組化染色49-50
• 2.2.3 陽性RGC計(jì)數(shù)Bax/Bcl-2值50-53
• 討論53-57
• 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/span>53-54
• 2 結(jié)果分析54-55
• 2.1 形態(tài)學(xué)改變54
• 2.2 細(xì)胞凋亡情況54-55
• 3 安全性分析55
• 4 針刺的臨床應(yīng)用55-56
• 5 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-60
• 致謝60-61
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷61

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本文編號(hào)：927721