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萬方數(shù)據(jù) 萬方數(shù)據(jù) 高效液相色譜鑒別糖胺聚糖種類方法的建立及其應(yīng)用 摘要 本文利用反相高效液相色譜法建立了糖胺聚糖 glycosaminoglycans, GAGs 種類的鑒別方法。根據(jù)糖胺聚糖及其衍生物不同結(jié)構(gòu)類型的單糖組成不同，采用 柱前衍生反相高效液相色譜法 reversed phase-high performance liquid chromatography, RP-HPLC 實(shí)現(xiàn)了甘露糖 mannose, Man 、葡萄糖胺 glucosamine, GlcN 、甘露糖胺 mannosamine, ManN 、半乳糖胺 galactosamine, GalN 、葡萄糖醛酸 glucouronic acid, GlcA 、艾杜糖醛酸 iduronic acid, IdoA 、 半乳糖醛酸 galacturonic acid, GalA 、葡萄糖 glucose, Glc 、半乳糖 galactose, Gal 和木糖 xylose, Xyl 單糖標(biāo)準(zhǔn)品混合物在C18 柱上的有效分離；利用不同 類型糖胺聚糖不完全酸水解產(chǎn)物中耐酸水解二糖結(jié)構(gòu)不同，實(shí)現(xiàn)了對肝素/硫酸 乙酰肝素 heparin/heparan sulfate, Hp/HS 、硫酸軟骨素/硫酸皮膚素 chondroitin sulfate/dermatan sulfate, CS/DS 和透明質(zhì)酸 hyaluronic acid, HA 的鑒別。所建 立的方法成功用于依諾肝素鈉中GlcN 和ManN 摩爾比及海洋魚鰓組織中雜合硫 酸軟骨素的分析測定，為低分子肝素的質(zhì)量控制和海洋生物中復(fù)雜GAGs 的結(jié)構(gòu) 類型鑒別提供了新的途徑。 本文第一部分應(yīng)用RP-HPLC 建立了GAGs 種類鑒別方法。首先，在實(shí)驗(yàn)室 前期工作的基礎(chǔ)上，對柱前衍生RP-HPLC 方法的分離條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定了 適于Man 、GlcN、ManN 、GalN、GlcA、IdoA 、GalA、Glc、Gal 和Xyl 單糖標(biāo) 準(zhǔn)品同時(shí)分離的最佳條件，，即在柱溫30 ℃和流速1.0 mL/min 下，以流動(dòng)相0.1 mol/L 磷酸鹽緩沖液 pH 6.0 C 乙腈先在85 : 15 v : v 下洗脫25 min ，再在83 : 17 比例下洗脫25 min 。該方法從單糖組成的角度實(shí)現(xiàn)了對不同種類GAGs 的鑒 別。在此基礎(chǔ)之上，對GAGs 不完全酸水解產(chǎn)物進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了可以

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