本文關(guān)鍵詞：高效液相色譜鑒別糖胺聚糖種類方法的建立及其應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國海洋大學(xué)》 2014年

高效液相色譜鑒別糖胺聚糖種類方法的建立及其應(yīng)用

祝賀  

【摘要】：本文利用反相高效液相色譜法建立了糖胺聚糖(glycosaminoglycans, GAGs)種類的鑒別方法。根據(jù)糖胺聚糖及其衍生物不同結(jié)構(gòu)類型的單糖組成不同，采用柱前衍生反相高效液相色譜法(reversed phase-high performance liquidchromatography, RP-HPLC)實(shí)現(xiàn)了甘露糖(mannose, Man)、葡萄糖胺(glucosamine, GlcN)、甘露糖胺(mannosamine, ManN)、半乳糖胺(galactosamine,GalN)、葡萄糖醛酸(glucouronic acid, GlcA)、艾杜糖醛酸(iduronic acid, IdoA)、半乳糖醛酸(galacturonic acid, GalA)、葡萄糖(glucose, Glc)、半乳糖(galactose,Gal)和木糖(xylose, Xyl)單糖標(biāo)準(zhǔn)品混合物在C18柱上的有效分離；利用不同類型糖胺聚糖不完全酸水解產(chǎn)物中耐酸水解二糖結(jié)構(gòu)不同，，實(shí)現(xiàn)了對(duì)肝素/硫酸乙酰肝素(heparin/heparan sulfate, Hp/HS)、硫酸軟骨素/硫酸皮膚素(chondroitinsulfate/dermatan sulfate, CS/DS)和透明質(zhì)酸(hyaluronic acid, HA)的鑒別。所建立的方法成功用于依諾肝素鈉中GlcN和ManN摩爾比及海洋魚鰓組織中雜合硫酸軟骨素的分析測(cè)定，為低分子肝素的質(zhì)量控制和海洋生物中復(fù)雜GAGs的結(jié)構(gòu)類型鑒別提供了新的途徑。 本文第一部分應(yīng)用RP-HPLC建立了GAGs種類鑒別方法。首先，在實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上，對(duì)柱前衍生RP-HPLC方法的分離條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定了適于Man、GlcN、ManN、GalN、GlcA、IdoA、GalA、Glc、Gal和Xyl單糖標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)分離的最佳條件，即在柱溫30℃和流速1.0mL/min下，以流動(dòng)相0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH6.0)–乙腈先在85:15(v: v)下洗脫25min，再在83:17比例下洗脫25min。該方法從單糖組成的角度實(shí)現(xiàn)了對(duì)不同種類GAGs的鑒別。在此基礎(chǔ)之上，對(duì)GAGs不完全酸水解產(chǎn)物進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了可以同時(shí)區(qū)分Hp/HS、CS/DS和HA的耐酸水解組分，經(jīng)質(zhì)譜和高效陰離子交換色譜分析，確定這三類耐酸水解組分的結(jié)構(gòu)分別為GlcNα1→4IdoA/GlcA、GlcAβ/IdoAα1→3GalN和GlcAβ1→3GlcN。這三類結(jié)構(gòu)不同的二糖可用于Hp、CS和HA的定量分析，其檢測(cè)限可達(dá)納克級(jí)。 本文第二部分應(yīng)用建立的RP-HPLC方法測(cè)定了依諾肝素中GlcN和ManN的摩爾比。首先，通過分子排阻-多角度激光散射聯(lián)用法、強(qiáng)陰離子交換-高效液相色譜法和核磁共振波譜法分別對(duì)8種不同依諾肝素進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果表明8種依諾肝素均符合USP35標(biāo)準(zhǔn)。在此基礎(chǔ)上，通過優(yōu)化GlcN和ManN降解時(shí)間準(zhǔn)確測(cè)定了二者的摩爾比，初步確定依諾肝素中GlcN和ManN摩爾比的合理范圍為16.4～19.1。 本文第三部分利用已建立的RP-HPLC方法鑒定了海洋魚鰓組織中的雜合硫酸軟骨素，并采用二糖組成分析法、聚丙烯凝膠電泳法和核磁共振波譜法對(duì)已鑒定的雜合硫酸軟骨素進(jìn)行了結(jié)構(gòu)驗(yàn)證。結(jié)果表明本文建立的RP-HPLC方法對(duì)魚鰓組織中的雜合硫酸軟骨素結(jié)構(gòu)的鑒定是正確可靠的，這些雜合硫酸軟骨素主要由→4GlcAβ1→3GlcNAc4Sβ1→(CSA)、4GlcAβ1→3GlcNAc6Sβ1→(CSC)和→4IdoAα1→3GlcNAc4Sβ1→(DS)重復(fù)結(jié)構(gòu)單元共價(jià)雜合組成，且DS重復(fù)單元的含量在3.9～24.6%之間。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R284;O657.72
【目錄】：

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