發(fā)布時間：2017-09-22 09:10

  本文關鍵詞：從Akt-mTOR信號通路研究黃芪菟箭合劑對糖尿病大鼠的腎臟保護機制

  更多相關文章： 糖尿病腎病 腎小球足細胞 雷帕霉素靶蛋白 中藥

【摘要】：研究背景：糖尿病腎病(Diabetes nephropathy, DN)是糖尿病嚴重的微血管并發(fā)癥之一,也是糖尿病的主要致死原因。在發(fā)達國家糖尿病腎病是終末期腎臟疾病(End-stage renal failure,ESRD)的主要原因。目前我國DN患者在我國透析人數(shù)中已占據(jù)第二位,僅次于腎小球腎炎。糖尿病腎病極大的影響了患者的生存質量,并帶來了沉重的經濟負擔。因而如何防止糖尿病的發(fā)生發(fā)展已成為當前急迫而重要的課題。腎小球足細胞哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian Target of Rapamycin, mTOR)活性的異常升高是糖尿病腎病發(fā)生蛋白尿的關鍵機制之一。在哺乳動物中,mTOR以雷帕霉素靶蛋白復合物1(mTORC1)和雷帕霉素靶蛋白復合物2(mTORC2)兩種形式存在。mTORC1功能是主要促進合成代謝、調控細胞生長和增殖。雷帕霉素特異性抑制mTORC1可以防止糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展,但過度抑制足細胞mTOR反而會造成足細胞的損傷,因而雷帕霉素可能會因為其毒副作用難以應用于臨床治療糖尿病腎病。我們既往的研究發(fā)現(xiàn)中藥菟箭合劑具有減少糖尿病大鼠蛋白尿,減輕糖尿病腎病病理改變的作用,并有抑制腎小球系膜細胞蛋白激酶B(protein kinase B, PKB,也稱為Akt)磷酸化的作用。本研究就是基于以往的科研工作,開展中醫(yī)藥對糖尿病大鼠腎臟保護作用的深層次研究。目的：觀察中藥黃芪菟箭合劑對STZ誘導的糖尿病大鼠腎臟PI3K-Akt-mTOR信號通路的影響,從而探討黃芪菟箭合劑對糖尿病大鼠腎臟保護作用是否與調節(jié)這一信號通路有關,同時觀察中藥是否可以減輕雷帕霉素的毒副作用。方法：60只清潔級SD大鼠,隨機分為正常對照組10只(CON組)與糖尿病組50只。糖尿病組大鼠禁食12小時候后予2%鏈脲佐菌素(STZ 65mg/Kg,臨用前溶于PH4.2枸櫞酸鹽緩沖液)一次性腹腔注射,CON組大鼠予等體積枸櫞酸緩沖液腹腔注射。72小時后,尾靜脈取血測血糖,以血糖至16.7mmol/L,為造模成功。將穩(wěn)定成模的42只糖尿病大鼠按體重隨機分為四組：糖尿病對照組(DM組,n=10),雷帕霉素干預組(RAPA組,n=11)、黃芪菟箭合劑干預組(CM組,n=10)、雷帕霉素聯(lián)合黃芪菟箭合劑干預組(RAPA+CM組,n=11)。糖尿病模型成功4周后開始干預治療,RAPA組：按0.5mg/kg/qod腹膜內注射雷帕霉素；CM組：按lOg/kg/d灌胃黃芪菟箭合劑；RAPA+CM組：lOg/kg/d灌胃黃芪菟箭合劑并按0.5mg/kg/qod腹膜內注射雷帕霉素。干預治療12周后,置代謝籠留12小時留取尿標本,取血,檢測不同處理因素對大鼠血清肌酐、尿素氮及尿白蛋白排泄率(微量白蛋白肌酐比值,ACR)的影響,取大鼠腎皮質做常規(guī)病理切片,觀察各組大鼠的腎臟病理變化；應用免疫組化方法檢測ZO-1、nephrin、fibronectin等相關蛋白的表達；應用Westrn-blot檢測磷酸化Akt(Thr308)、磷酸化Pten、磷酸化$6K1的蛋白表達；應用RT-PCR檢測Akt、Pten、S6K1的mRNA表達。結果：1黃芪菟箭合劑與雷帕霉素對糖尿病大鼠一般狀況的影響：治療12周后DM組大鼠血糖顯著高于CON組,CM組血糖較DM組明顯降低,RAPA組、RAPA+CM組血糖水平較DM組大鼠無明顯差異,RAPA、RAPA+CM組大鼠體重顯著低于DM組,而CM組大鼠體重與DM組無明顯差異；RAPA組大鼠死亡率顯著高于DM組、CM組和RAPA+CM組,CM組、RAPA+CM組死亡率與DM組無明顯差異。以上結果說明黃芪菟箭合劑與雷帕霉素都可以有效的降低糖尿病大鼠的尿微量白蛋白排泄率,說明黃芪菟箭合劑與雷帕霉素對糖尿病大鼠微量白蛋白尿的治療有效；雷帕霉素治療組大鼠體重明顯降低,死亡率明顯升高,提示雷帕霉素有明顯的毒副作用；中藥與雷帕霉素聯(lián)合應用可以減少大鼠死亡率。2黃芪菟箭合劑與雷帕霉素對糖尿病大鼠腎臟病理、細胞外基質、足細胞結構的影響：DM組大鼠較CON組大鼠腎小球體積增大,RAPA組、CM組、RAPA+CM組腎小球肥大情況較DM組明顯減輕；CON組僅個別腎小球內有少量FN陽性染色,DM組大鼠腎小球內可見顯著的FN陽性染色,其他三組治療組FN陽性表達均顯著低于DM組；DM組大鼠Z0-1、nephrin腎小球陽性染顯著低于CON組,其他三組治療組ZO-1、nephrin日性表達顯著高于DM組；說明黃芪菟箭合劑與雷帕霉素均有減輕DN大鼠腎臟病理改變、腎小球細胞外基質沉積,維持足細胞結構完整性的作用。3本研究涉及的相關蛋白及相關蛋白mRNA的表達情況。DM組Pten蛋白表達較CON組顯著降低,CM組、RAPA+CM組能顯著提高腎組織Pten的表達,但RAPA組腎組織Pten表達與DM組無統(tǒng)計學差異；DM組磷酸化$6K1蛋白表達、S6K1mRNA表達顯著高于CON組,RAPA組、CM組.RAPA+CM組中磷酸化$6K1蛋白表達、S6K1mRNA表達較DM組顯著降低；DM組磷酸化Akt (Thr308)蛋白含量、AktmRNA表達較CON組顯著增加,CM組、APA+CM組能顯著降低磷酸化Akt(Thr308)蛋白含量和AktmRNA表達,但RAPA組磷酸化Akt (Thr308)蛋白含量和AktmRNA表達較DM組無明顯差異。結論：雷帕霉素和黃芪菟箭合劑都可以有效地保護STZ誘導的糖尿病大鼠足細胞的完整性、保護腎臟結構、減少尿微量白蛋白排泄率。雷帕霉素單一的抑制mTORC1的激活造成嚴重的毒副作用。黃芪菟箭合劑在降低血糖的同時,顯示出全面調控PI3K/Akt/mTOR信號通路的效應,同時能夠減少雷帕霉素的毒性,顯示出其臨床潛在的運用價值。
【關鍵詞】：糖尿病腎病 腎小球足細胞 雷帕霉素靶蛋白 中藥
【學位授予單位】：中國中醫(yī)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R259
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文縮略詞表(Abbreviationand acronyms)11-12
• 綜述12-17
• 前言17-19
• 材料和方法19-29
• 1 實驗材料19-21
• 2 實驗方法21-29
• 實驗結果29-40
• 1 一般情況29-30
• 2 生化指標比較30-31
• 3 腎臟普通病理觀察結果31-33
• 4 腎皮質FN、ZO-1、nephrin免疫組化染色情況33-35
• 5 Westernblot檢測各組大鼠腎磷酸化Akt(Thr308)、磷酸化Pten、磷酸化S6K1蛋白表達35-36
• 6 RT-PCR檢測各組大鼠腎Akt(308)、Pten、S6K1mRNA表達36-40
• 討論40-46
• 1 關于糖尿病大鼠模型的建立40
• 2 足細胞損傷與PI3K/Akt/mTOR信號通路40-42
• 3 關于雷帕霉素的作用42-43
• 4 關于黃芪菟箭合劑的作用43-45
• 5 本研究的不足和展望45-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-53
• 致謝53-54
• 個人簡歷54

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;1998年10期

2 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;1998年01期

3 仝小林;;糖尿病9問(上)[J];藥物與人;2007年03期

4 王秋月,劉國良;生活習慣與糖尿病[J];醫(yī)師進修雜志;2000年09期

5 陳廣耀;抗糖尿病中藥開發(fā)前景展望[J];中國新藥雜志;2000年07期

6 太田康晴,莊祥云;糖尿病[J];日本醫(yī)學介紹;2000年08期

7 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年06期

8 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年08期

9 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年11期

10 林蘭;倪青;董彥敏;;糖尿病中西醫(yī)結合研究的思路與方法[J];醫(yī)學研究通訊;2001年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳東方;莊躍宏;陳秀芳;趙麗娜;楊曉東;唐茂林;;胰島素依賴型糖尿病對大鼠隨意皮瓣存活能力的影響[A];中國解剖學會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

2 崔瑾;韓姣姣;李鳳翱;李鳳翱;湯紹芳;劉萍;邱明才;張鵬;;1,25-二羥維生素D3對糖尿病大鼠肺臟病變的保護作用[A];中華醫(yī)學會第十二次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2013年

3 鄭濱珠;袁鳳山;楊潤橋;;自體干細胞激活療法治療糖尿病大鼠過程中血細胞及生化改變[A];中華醫(yī)學會第十二次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2013年

4 劉銅華;呂仁和;高彥彬;;中醫(yī)藥防治糖尿病及并發(fā)癥的作用途徑[A];糖尿�。ㄏ什。┲嗅t(yī)診治薈萃——全國第五次中醫(yī)糖尿病學術大會論文集[C];1999年

5 石鳳英;王堯;;靈芝對糖尿病大鼠腎臟形態(tài)學及微量白蛋白尿的作用[A];中國康復醫(yī)學會第三次康復治療學術大會論文匯編[C];2002年

6 陳名道;李榮英;邵莉;;糖尿病飲食治療的若干進展[A];中國營養(yǎng)學會第九次全國營養(yǎng)學術會議論文摘要匯編[C];2004年

7 仝小林;李洪皎;;糖絡并重治療2型糖尿病[A];第九次全國中醫(yī)糖尿病學術大會論文匯編[C];2006年

8 李筱榮;李艷;劉巨平;袁佳琴;;糖尿病大鼠血—視網膜屏障損傷的實驗研究[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

9 楊毅;陳江華;王晶晶;秦嶺;;雷帕霉素對糖尿病大鼠腎臟組織增殖和肥大的抑制作用[A];2007年浙滬兩地腎臟病學術年會資料匯編[C];2007年

10 祁少海;劉坡;舒斌;謝舉臨;徐盈斌;黃勇;毛任翔;劉旭盛;;不同深度糖尿病大鼠燙傷模型的制備[A];第八屆全國燒傷外科學年會論文匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭賽珊　梁曉春 潘明政;中西醫(yī)結合治療糖尿病慢性并發(fā)癥可顯著改善癥狀[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

2 本報記者 王樂羊;中西醫(yī)結合防治糖尿病大有可為[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

3 北京協(xié)和醫(yī)院 梁曉春;對中醫(yī)治糖尿病并發(fā)癥研究的思考[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

4 劉燕玲;肥胖是糖尿病的源頭[N];健康報;2006年

5 仝小林;糖尿病慢性并發(fā)癥論治[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

6 汪敏;糖尿病皮膚易損元兇找到[N];衛(wèi)生與生活報;2003年

7 林蘭;中西醫(yī)結合治療糖尿病的前景[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

8 北京協(xié)和醫(yī)院中醫(yī)科主任 梁曉春;糖尿病周圍神經病變的中西醫(yī)治療進展[N];中國醫(yī)藥報;2009年

9 本報記者 劉艷芳;糖尿病干預不能忽視抗氧化[N];中國食品報;2012年

10 譚小月;糖尿病與腎病關系研究的新進展[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馮偉偉;蘋果酸鉻對2型糖尿病大鼠的降血糖活性、作用機制及安全性初探[D];江蘇大學;2015年

2 劉宇;糖尿病來源的骨髓間充質干細胞治療心肌梗死的相關研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

3 李維辛;GLP-1受體激動劑治療糖尿病的循證評價和對糖尿病大鼠胃動力影響的機制研究[D];蘭州大學;2012年

4 田麗;糖尿病周圍神經病運動纖維的早期評價[D];天津醫(yī)科大學;2014年

5 柳忠豪;糖尿病對口腔種植體骨整合影響的作用機制研究[D];山東大學;2015年

6 李波;飽和富氫液對糖尿病神經病變的保護作用及機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

7 米佳;Vaspin調控糖尿病炎癥通路及苦酸通調法的干預機制研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2015年

8 林宣佑;從SCAP/SREBP脂代謝信號轉導途徑探討苦酸通調方調控2型糖尿病胰島素抵抗的作用機制[D];長春中醫(yī)藥大學;2015年

9 齊月;木丹顆粒治療痛性糖尿病周圍神經病變的實驗研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2015年

10 王云;糖基化終末產物介導的平滑肌病變在糖尿病結腸動力障礙中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田寶明;低血糖指數(shù)掛面的研制及其對糖尿病大鼠糖脂代謝影響的研究[D];西南大學;2015年

2 黃瓊;姜黃素對糖尿病大鼠肺組織損傷的保護作用及其可能機制[D];湖北科技學院;2015年

3 褚淑蕾;PI3k-Akt信號通路在2型糖尿病大鼠易發(fā)心房顫動中的介導作用[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 石鷹;二膦酸鹽對糖尿病大鼠下頜骨骨折愈合影響的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

5 鄭嫦;CNP對Ach引起的糖尿病大鼠胃平滑肌收縮增強的影響及IGF-1的干預效應[D];延邊大學;2015年

6 李寧;益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病大鼠大血管NF-κB表達的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 王婉秋;辛伐他汀對2型糖尿病動脈硬化大鼠血漿VEGF、TGF-β1及CTRP3水平的影響研究[D];石河子大學;2015年

8 宋倩;2型糖尿病患者血清TLR-4水平與骨密度及影響因素關系研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 王麗霞;TLR4及相關炎癥因子在糖尿病大鼠心臟、肝臟和腎臟中的表達[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 孫雪培;極長鏈脂肪酸與2型糖尿病大鼠腦Aβ生成的關系研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

，

本文編號：899961