本文關(guān)鍵詞：三個藏藥經(jīng)典方的腦缺血藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究

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【摘要】：腦血管疾病屬臨床常見病,發(fā)病幾率高,作為影響人類生活質(zhì)量的重大疾病之一,長期嚴(yán)重威脅著人類的生命健康�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)將腦部局灶性缺血引起的神經(jīng)功能缺損癥認(rèn)定為腦缺血癥。藏醫(yī)藥中將人體的脈絡(luò)分為白脈和黑脈,白脈即神經(jīng)。白脈病屬藏藥雜病范疇,瘟疫病、病毒等或刀劍、石棍等造成的物理損傷侵害白脈,或劇烈活動導(dǎo)致的精氣分散均可引起白脈病,實質(zhì)上相當(dāng)于神經(jīng)損害所致的有關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)疾病。腦缺血的發(fā)生是一個復(fù)雜的病理生理過程,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明缺血的發(fā)生包含了能量障礙、興奮性氨基酸毒性、梗死周圍去極化、炎癥反應(yīng)、程序性細(xì)胞凋亡等一系列級聯(lián)反應(yīng)的具體機(jī)制。超早期溶栓和神經(jīng)保護(hù)是目前治療腦血管病的兩大主要方法,而如何重建與恢復(fù)神經(jīng)功能至今仍是治療腦血管病的難題。使用神經(jīng)保護(hù)劑的重要性顯得尤為突出,開發(fā)有益于受損神經(jīng)功能修復(fù)的藥物來促進(jìn)腦病患者神經(jīng)功能的恢復(fù)具有重要的臨床意義。二十五味珊瑚丸、如意珍寶丸、二十味沉香丸皆是藏醫(yī)經(jīng)典方,先后被《中國藥典》所收錄。在臨床有組合三方給藥的使用習(xí)慣。其中,二十味沉香丸以治療心肺系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病為主。二十五味珊瑚丸和如意珍寶丸因其具有開竅醒神、舒筋通絡(luò)之功效,臨床用于多發(fā)性神經(jīng)炎,神志不清頭暈?zāi)垦?腦部疼痛,頭痛,癲癇及各種神經(jīng)性疼痛等,療效顯著。本課題擬從上述三個臨床經(jīng)典方中篩選具有神經(jīng)保護(hù)作用的活性成分。本研究在國家自然科學(xué)基金委面上項目“三個藏藥經(jīng)典方早中晚組合給藥協(xié)同治療腦缺血機(jī)制探討(項目號：81274184)”和“藏醫(yī)抗腦缺血名方藥效物質(zhì)的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制(項目號：81473337)”支持下,構(gòu)建了腦缺血相關(guān)因素細(xì)胞篩選系統(tǒng)模型,并采用該系統(tǒng)模型,針對課題組從三個藏藥經(jīng)典方中提取分離的17個化學(xué)單體成分,進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)了15個單體分別針對不同靶點的抗缺血和神經(jīng)修復(fù)作用。對具有神經(jīng)保護(hù)作用藥效的單體進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化實驗驗證,進(jìn)一步確認(rèn)其具有神經(jīng)保護(hù)作用活性。
【關(guān)鍵詞】：如意珍寶丸 質(zhì)粒 細(xì)胞模型 定量PCR 免疫熒光 腦缺血
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R29
【目錄】：

• 摘要6-7
• abstract7-12
• 第1章 緒論12-18
• 1.1 藏醫(yī)藥的特色和優(yōu)勢12-13
• 1.2 腦缺血的研究概況13-15
• 1.2.1 腦缺血現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究近況13-14
• 1.2.2 腦缺血藏醫(yī)藥史上研究概況和特色14-15
• 1.3 三個藏藥經(jīng)典方的研究進(jìn)展15-18
• 第2章 腦缺血相關(guān)因素細(xì)胞篩選模型的構(gòu)建18-24
• 2.1 實驗材料18
• 2.2 實驗方法18-21
• 2.2.1 HEK293細(xì)胞的培養(yǎng)18
• 2.2.2 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染18-19
• 2.2.3 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇19-21
• 2.2.4 BCA蛋白含量測定21
• 2.3 實驗結(jié)果21-23
• 2.3.1 穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建21-22
• 2.3.2 熒光素酶活性的測定22-23
• 2.4 討論23-24
• 第3章 三個藏藥經(jīng)典方中抗腦缺血藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的探討24-34
• 3.1 三個藏藥經(jīng)典方中主要化學(xué)成分24
• 3.2 三個藏藥經(jīng)典方特征圖譜中主要成分的確認(rèn)24-27
• 3.3 實驗內(nèi)容27-30
• 3.3.1 實驗材料27-28
• 3.3.2 貯存液的配制28
• 3.3.3 17個單體成分的cck-8細(xì)胞毒性測定28
• 3.3.4 17個單體成分的活性篩選28-29
• 3.3.5 Luciferase(熒光素酶)活性測定29
• 3.3.6 BCA蛋白含量測定29-30
• 3.4 實驗結(jié)果30-33
• 3.4.1 貯存液的配制30
• 3.4.2 HEK293-A細(xì)胞模型的篩選30-31
• 3.4.3 HEK293-B細(xì)胞模型的篩選31-32
• 3.4.4 HEK293-C細(xì)胞模型的篩選32-33
• 3.5 討論33-34
• 第4章 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞藥效驗證34-65
• 4.1 實驗材料34
• 4.2 實驗方法34-38
• 4.2.1 rMSC的分離培養(yǎng)34-35
• 4.2.2 rMSC的加藥誘導(dǎo)35
• 4.2.3 總RNA的提取35-36
• 4.2.4 cDNA反轉(zhuǎn)錄36-37
• 4.2.5 Real-Time定量PCR37
• 4.2.6 免疫熒光37-38
• 4.3 實驗結(jié)果38-63
• 4.3.1 rMSC的分離培養(yǎng)38-39
• 4.3.2 rMSC的加藥誘導(dǎo)39-45
• 4.3.3 總RNA的提取45-46
• 4.3.4 cDNA反轉(zhuǎn)錄46-49
• 4.3.5 Real-Time定量PCR49-51
• 4.3.6 免疫熒光51-63
• 4.4 討論63-65
• 結(jié)論65-67
• 致謝67-68
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及科研成果71

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