目的:白益母草為唇形科膿瘡草屬植物膿瘡草的地上部分,為特色蒙藥,具有抗炎、活血調(diào)經(jīng)、清熱利水等功效。為揭示白益母草的藥理活性,拓展白益母草臨床使用,奠定白益母草制劑開發(fā)的藥理學(xué)研究基礎(chǔ)。本研究分別從細(xì)胞和動(dòng)物水平展開。首先建立穩(wěn)定的血管平滑肌細(xì)胞VSMCs（vascular smooth muscle cells,VSMCs）分離培養(yǎng)方法,比較組織塊貼壁法、混合酶消化法分離培養(yǎng)原代VSMCs在形態(tài)、生長、表型特征蛋白表達(dá)方面的差異,為在實(shí)驗(yàn)中VSMCs穩(wěn)定可控奠定基礎(chǔ)。以PDGF-BB、Angll、TNF-α和LPS作用于VSMCs,從誘導(dǎo)VSMCs增殖和表型轉(zhuǎn)化兩方面進(jìn)行評價(jià),篩選最佳的誘導(dǎo)因子和誘導(dǎo)條件,建立可靠的治療血管增生性疾病藥物的體外細(xì)胞篩選模型以及評價(jià)指標(biāo)。評價(jià)益母草堿、水蘇堿對PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs增殖和表型轉(zhuǎn)化的干預(yù)作用以及潛在的分子作用機(jī)制。建立機(jī)械剝脫小鼠股動(dòng)脈內(nèi)膜致增生模型,評價(jià)白益母草總生物堿、白益母草總黃酮、水蘇堿和益母草堿對血管內(nèi)膜增生的干預(yù)作用,明確可能存在的作用機(jī)制,以期為血管增生性疾病的治療提供新的研究方向和研究思路。方法:1.貼塊法和酶消化... 

【文章來源】：中央民族大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＶＳＭＣｓ原代培養(yǎng)??Ａ：組織塊貼壁法分離培養(yǎng)的ＶＳＭＣｓ；?Ｂ：酶消化法分離培養(yǎng)的ＶＳＭＣｓ??（Ａ１：培養(yǎng)第７?ｄ，少量細(xì)胞爬出；Ａ２：培養(yǎng)第１０?ｄ，細(xì)胞開始融合；Ａ３：傳至第３代，細(xì)胞呈？？峰谷”??Ａ４：７，Ａ５：?（２００ｘ）至７Ｂ１：５，??

ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅ?（ｍｅａｎ士ｓｅ，?ｎ＝３）??３．１．４?ＬＰＳ?誘導(dǎo)?ＶＳＭＣｓ?±曽殖??如圖２－４所示，不同濃度（０，?０．０１，０．１，５，?１０ｐｇ／ｍＬ）ＬＰＳ作用不同時(shí)間于ＶＳＭＣｓ，??并沒有明顯的促增殖作用，僅５?｜ａｇ／ｍＬ的ＬＰＳ在７２ｈ，相較于正常組有明顯的抑制作用（ｐ??＜?０．０５），因而在模型的篩選中，ＬＰＳ將不做考慮。??表２－４不同濃度和時(shí)間ＬＰＳ誘導(dǎo)ＶＳＭＣｓ增殖（（ｍｅａｎ±ｓｅ，?ｎ＝３）??Ｔａｂｌｅ?２－４?Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＶＳＭＣｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??ｏｆ?ＬＰＳ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅ?（ｍｅａｎ±ｓｅ，?ｎ＝３）??Ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?（％）??ＬＰＳ?（噸趾）?＾４ｈ——?ｉｈ?＿?￣?７２ｈ?—??０?１００．００?１００．００?１００．００??０．０１?１０１．７９?士０．１５?９９．７４±０．１８?９４．１２土?０．１１??０．１?１０２．２３?士?０．１１?１００．０５?土?０．１４?９７．１６土０．０４??５?丨?０〗．８１±０．１７?〗０Ｌ３１±０．１９?８７．１６土?０．０８＊???１０?１００．５５士?０．１１?９９．９５土?０．１４?９０．１５±０．０５??注：與對照組比較，＜?０．０５；?Ｎｏｔｅ：?＜?０．０５?ｖｓ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ??２２??

３．２．１?Ａｎｇ?ＩＩ對ＳＭ?ｃｃ－ａｃｔｉｎ的表達(dá)的影響??用?０．５?ｎｍｏｌ／Ｌ?和?３?ｎｍｏｌ／Ｌ?濃度的?Ａｎｇｌｌ?處理?ＶＳＭＣｓ?２４?ｈ，４８?ｈ，７２?ｈ，ＳＭ?ａ－ａｃｔｉｎ?焚??光標(biāo)記結(jié)果如圖２－６所示。正常組ＶＳＭＣｓ形態(tài)多呈長梭形，骨架清晰，結(jié)構(gòu)完整，而Ａｎｇ??ＩＩ處理組ａ－ａｃｔｍ的熒光強(qiáng)度和表達(dá)量并未顯示出明顯的減弱或降低，清晰可見微絲排列整??齊和細(xì)胞骨架完整，因而Ａｎｇｌ丨在ＶＳＭＣｓ表型轉(zhuǎn)化方面未有明顯的促進(jìn)作用。??２４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]膠原酶消化法、組織塊貼壁法培養(yǎng)的大鼠RASMCs生長、增殖及分化對比觀察[J]. 趙志敏,王國坤,王楊,楊帆,龔德軍,徐志云.  山東醫(yī)藥. 2017(28)
[2]益母草堿作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 梁博志,羅建華,楊冬花,盧麗娜,楊輝,袁露,李利.  貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2017(04)
[3]蒙藥白益母草的化學(xué)成分研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J]. 雷啟芬,趙湘培,朱丹.  中華中醫(yī)藥雜志. 2017(07)
[4]益母草水蘇堿藥理作用的研究進(jìn)展[J]. 毛益申,石家齊,朱明宇,呂嶸,孫寧.  微循環(huán)學(xué)雜志. 2017(01)
[5]血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化影響因素及中藥干預(yù)研究進(jìn)展[J]. 曾翠玲,鄭凌云,李香莉,王麗京.  廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2016(02)
[6]水蘇堿的藥理作用研究進(jìn)展[J]. 葉綠萍.  河北醫(yī)藥. 2016(01)
[7]蒙藥白益母草定性定量方法研究[J]. 王青虎,吳榮君,包寶樂爾,代那音臺,韓那仁朝克圖,吳杰斯.  藥物分析雜志. 2015(10)
[8]益母草堿藥理作用的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 賀春暉,趙懿清,李霞,周路遙.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2013(12)
[9]二步酶消化法分離大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞及活性鑒定[J]. 劉幸平,沈岱菲,鄭燕珊,方歡,高分飛.  汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2012(02)
[10]酶消化法分離培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞方法的改良[J]. 李憲偉,姜維良.  哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(01)

博士論文
[1]SM22α調(diào)節(jié)AngⅡ誘導(dǎo)的血管生理及病理學(xué)效應(yīng)的機(jī)制[D]. 謝肖立.河北醫(yī)科大學(xué) 2014

碩士論文
[1]姜黃素抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化的凋亡信號機(jī)制研究[D]. 侯夢琳.中山大學(xué) 2016
[2]Urocortin對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化及細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響[D]. 鐘偉.瀘州醫(yī)學(xué)院 2011
[3]PDGF-BB和PKGIα對血管平滑肌細(xì)胞形態(tài)和合成表型基因表達(dá)的影響[D]. 李璟妍.江蘇大學(xué) 2010



本文編號：3474832