目的:活化已分離保存的苗藥小花清風藤葉內生真菌L-43,對其進行形態(tài)學及分子鑒定。方法:對內生真菌L-43活化后,觀察其在PDA固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài),采用顯微鑒定法觀察內生真菌L-43的孢子及菌絲形態(tài),參照《中國真菌志》對其形態(tài)進行描述;結合PCR及NCBI數(shù)據(jù)庫對比分析方法構建系統(tǒng)進化樹,最終確定內生真菌L-43的種屬。結果:菌種L-43與鏈格孢屬Alternaria tenuissima聚為一類,相似度為100%,表明L-43為鏈格孢屬Alternaria tenuissima。結論:苗藥小花清風藤葉中存在鏈格孢屬種類的內生真菌,為后續(xù)研究提供寶貴微生物資源。 

【文章來源】：科學技術創(chuàng)新. 2020,(23)

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菌L-43的ITS系統(tǒng)進化樹

列擴增，擴增后將PCR擴增片段進行測序。結果在NCBI數(shù)據(jù)庫BIAST對比已知種屬的ITS序列進行相似性分析，再運用MEGA5.0分析其系統(tǒng)發(fā)育，構建進化樹，而后進行數(shù)據(jù)處理和生物多樣性分析[9]。3結果與分析3.1小花清風藤葉內生真菌L-43的形態(tài)學菌株L-43在PDA平板生長7d時，單菌落表面不平，表面蓬松，菌絲絲絨狀，菌落中間灰色，外圍白色，無滲出液。主要顯微形態(tài)特征菌絲較細，鏈狀，直或彎曲，有分支，分生孢子單生、呈梨形，分隔明顯且無規(guī)律。根據(jù)菌株L-43的形態(tài)學特征將其鑒定為Alternariatenuissima（鏈格孢屬）（圖1）。A.菌落形態(tài)B.菌絲及孢子形態(tài)C.液體發(fā)酵圖1內生真菌L-43的形態(tài)特征3.2小花清風藤葉內生真菌L-43分子鑒定內生真菌L-43經ITS區(qū)經引物V9D和LS266擴增、PCR產物測序得到934bp的rDNA序列。將所測內生真菌L-43的擴增產物序列輸入NCBI中進行Blast序列比對分析，篩選出與內生真菌L-43種屬最相似的序列，并用MEGA5.05軟件構建系統(tǒng)進化樹，結果顯示，在進化樹中，內生真菌L-43與AlternariatenuissimaKJ082100聚類在同一分支（圖2），親緣關系最為接近，結合在GenBank中登錄結果顯示二者相似度為100%，同時，結合L-43的形態(tài)學特征，最終將菌株L-43鑒定為Alternariatenuissima（鏈格孢屬）。圖2菌L-43的ITS系統(tǒng)進化樹4討論實驗結果發(fā)現(xiàn)分子生物學鑒定后為一個種屬的的幾種菌出現(xiàn)了生長形態(tài)和顯微形態(tài)不同的情況，此種情況該以形態(tài)學鑒定為主還是以分子生物學為主。有學者認為，此種情況該一分子生物學鑒定結果來判斷其種屬。內生真菌的形態(tài)易受溫度、時間、培養(yǎng)基等培養(yǎng)條件的影響，從而導致其鑒定結果的影響；分子生物學鑒定及反映了內生真菌的分類地位，又反映了其進化水平和與其他生物的親緣關系[10]�？傊�

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2979772