發(fā)布時間：2020-11-16 02:47

　　 目的:對藏藥短穗兔耳草30%乙醇部位進(jìn)行化學(xué)成分分離純化,鑒定單體化合物,研究化合物體外XOD抑制活性及抗氧化活性。方法:(1)采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20、HPLC等方法對30%乙醇部位進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分分離及純化,并根據(jù)其理化性質(zhì)以及現(xiàn)代波譜學(xué)技術(shù)(包括氫譜碳譜、紫外、紅外、質(zhì)譜等)鑒定這些化合物的結(jié)構(gòu)。(2)以XOD為靶標(biāo),以黃嘌呤為底物,在體外對各化合物與XOD結(jié)合的最佳反應(yīng)條件進(jìn)行篩選,并用陽性藥物別嘌呤醇驗(yàn)證最佳反應(yīng)條件。用篩選出來的最佳反應(yīng)條件對已經(jīng)鑒定的化合物進(jìn)行XOD抑制活性的實(shí)驗(yàn)。(3)采用DPPH法,ABTS法評價了短穗兔耳草中分離純化的化合物的抗氧化活性能力。結(jié)果:(1)從短穗兔耳草乙酸乙酯萃取部位的30%乙醇部位中共鑒定出17個化合物,分別為6個苯乙醇苷類化合物:lagotisideB(2),hemiphroside B(3),車前草苷D(4),Plantamajoside(5),2′-O-acetylplantamajoside(6),acteoside(7);5個環(huán)烯醚萜苷類化合物:Scutellariosid II(8),Globularimin(9)Baldaccioside(10),10-O-反式-異阿魏�；鞔�(11),8-epi-loganic acid(12);3個黃酮類化合物:木犀草素(13),木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(14),小麥黃素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(15),4個其他類化合物:lagotisideC(1),苯甲醇-O-(2′-O-β-D-吡喃木糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(16),肉桂酸(17)。其中1,2為新化合物;3,4,6,10,11,16為兔耳草屬首次分離得到;5,7,8,9,12為短穗兔耳草首次分離得到。(2)化合物4,13,14對XOD活性有較好的抑制作用,其中化合物13對XOD活性抑制能力和陽性藥無顯著差別;化合物14在化合物13基礎(chǔ)上接連個葡萄糖,雖然也有顯著抑制活性能力但與化合物13相比抑制性較弱;化合物4與化合物14相比抑制XOD活性的能力較強(qiáng)�；衔�1,2,3,5,6,7,10,12,16,17抑制XOD活性能力弱于上面三個化合物。(3)化合物3,4,11,13有較強(qiáng)的清除DPPH的能力,1、2、5、6、7、8、9、10、12、15、16、17清除DPPH的能力較弱。化合物3,4,11,13,14有較強(qiáng)的清除ABTS的能力,化合物9,10有稍強(qiáng)的清除ABTS的能力,化合物1、2、5、6、7、8、12,15、16、17清除ABTS的能力較弱。結(jié)論:本課題研究了短穗兔耳草30%乙醇部位的化學(xué)成分,并對其進(jìn)行XOD抑制活性的研究以及化合物的抗氧化活性能力。對短穗兔耳草30%乙醇進(jìn)行化學(xué)成分分離,得到17個化合物,其中3個化合物對XOD有較強(qiáng)的抑制作用;4個化合物抗氧化活性IC_(50)值小于陽性藥VC,可知其抗氧化活性強(qiáng)于陽性藥VC。這項(xiàng)研究為抗痛風(fēng)藥的研究提供依據(jù),同時篩選出的化合物可以作為天然抗氧化劑,減少合成氧化劑的毒副作用,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R29
【部分圖文】：

圖 1 尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白分布與功能示意圖[33]Figure 1 Distribution and function of uric acid transporter[33胞因子影響證據(jù)表明體內(nèi)炎癥因子的改變會導(dǎo)致尿酸的變化，但研究導(dǎo)致多種炎癥因子的變化，且在給予藥物治療后，隨著尿子也趨于正常[35]。尿酸濃度過高可以引起人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 κB（NF-κB）的表達(dá)量大幅度增加[36]。與此同時，NF-κB子腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素 6（IL-6）、單核細(xì)細(xì)胞間黏附分子 1（ICAM-1）等在尿酸的作用下表達(dá)量也明使白介素 1β（IL-1β）升高，而同時核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)平下降[35]。NOD 樣受體蛋白 3(NLRP3) 是胞質(zhì)內(nèi)的危險-1β 和 IL-18 的成熟與釋放，具有調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥反應(yīng)的作用。 升高，而當(dāng) IL-1β 被 NLRP3 炎性體激活后能進(jìn)一步擴(kuò)大炎

實(shí)驗(yàn)所用藥材購自成都荷花池中藥材市場，由江西中醫(yī)藥大學(xué)張亞梅副教授鑒定為玄參科兔耳草屬植物短穗兔耳草 L.brachystachys Maxim. 的干燥全草。樣品保存在江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心。2 提取與分離2.1 粗提與萃取10 kg 干燥短穗兔耳草粉碎，室溫下 75%乙醇溶液冷浸 3 次，每次 7 天，合并提取液，減壓濃縮，得總浸膏（1605.0g），乙酸乙酯萃取 3 次，合并萃取液減壓濃縮得乙酸乙酯部位（1139.5g），得率為 71.0%。乙酸乙酯部位（1139.5g）經(jīng)D101 大孔樹脂柱色譜梯度洗脫（水：乙醇=100:0, 70:30, 50:50, 90:10）,得水部位（560.0g），30%乙醇部位（160.5g），50%乙醇部位（110.0 g）和 90%乙醇部位（107.6 g）。

圖 3 短穗兔耳草分離純化圖Figure 3 Isolation and purification of Lagotis brachystachy Maxim.3 化學(xué)成分結(jié)構(gòu)解析與鑒定3.1 新化合物的結(jié)構(gòu)鑒定新化合物 1白色結(jié)晶（甲醇），HR-ESI-MS 給出的準(zhǔn)分子離子峰 m/z 293.1108[M-H]-；C15H17O6，計(jì)算值 293.1101，確定其分子式為 C15H18O6。Molish 反應(yīng)呈陽性，顯示結(jié)構(gòu)中存在糖。1H-NMR 譜中 7.76 (1H, d, J=16.0Hz, H-β)和 6.59 (1H, d,J=16.0Hz, H-α)為 2 個反式雙鍵質(zhì)子信號。13C-NMR 譜中 129.2 (C-2,6), 130.0(C-3,5) 為苯環(huán)上兩個對稱結(jié)構(gòu)，HMQC 譜可知與 δ:65.2 相連的兩個氫信號 3.66，3.87 ；與 δ:68.0 相連的兩個氫信號 4.51，4.32。HMBC 譜可知 4.52，4.32 相關(guān)的信號是 167，與羰基相連。1′位上有 CH2信號，所以 1′位去氧。HMBC 譜可知
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本文編號：2885528