目的:觀察針刺對(duì)去卵巢大鼠骨密度及鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)受體的影響,探討針灸防治骨質(zhì)疏松癥的機(jī)制。方法:3月齡雌性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、假手術(shù)組、模型組和電針組,每組8只。模型組和電針組大鼠行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)。電針組交替給予"關(guān)元"+"三陰交"(雙)和"腎俞"+"后三里"(雙)電針干預(yù),每次電針20 min,每日1次,每周連續(xù)干預(yù)5 d,共12周。12周后用骨密度儀統(tǒng)一測(cè)定右側(cè)脛骨、股骨骨密度;采用熒光定量PCR及Western blot法檢測(cè)腸黏膜內(nèi)瞬時(shí)感受器電位香草酸受體5(TRPV5)、瞬時(shí)感受器電位香草酸受體6(TRPV6)、鈉鈣交換體1(NCX1)和細(xì)胞膜鈣離子三磷酸腺苷水解酶(PMCA1b)及與鈣離子細(xì)胞旁轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的緊密連接蛋白-1(ZO-1)、封閉蛋白o(hù)ccludin和claudin mRNA和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:與空白組、假手術(shù)組比較,模型組大鼠骨密度明顯降低(P0.05);與模型組比較,電針組骨密度明顯提高(P0.05)。與空白組、假手術(shù)組比較,模型組腸黏膜內(nèi)TRPV6、NCX1 mRNA表達(dá)上調(diào)(P0.01),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin的mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01);與模型組比較,電針組腸黏膜TRPV6、 NCX1 mRNA的表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01,P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1和occludin的mRNA表達(dá)水平均上調(diào)(P0.01,P0.05)。與空白組、假手術(shù)組比較,模型組TRPV6、NCX1蛋白表達(dá)量升高(P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.05);與模型組比較,電針組TRPV6和NCX1的表達(dá)量降低(P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.05)。結(jié)論:電針能提高去卵巢大鼠的骨密度,增強(qiáng)參與鈣離子吸收跨細(xì)胞途徑的TRPV5、 PMCA1b的mRNA和蛋白表達(dá)以及細(xì)胞旁途徑ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表達(dá),這可能是針灸防治骨質(zhì)疏松癥的機(jī)制之一。
【部分圖文】：

與空白組、假手術(shù)組比較,模型組腸黏膜TRPV6、 NCX1 mRNA的表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin mRNA明顯下調(diào)(P<0.01)。與模型組比較,電針組TRPV6、NCX1 mRNA的表達(dá)明顯下調(diào)(P<0.01,P<0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1和occludin mRNA的表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01,P<0.05)。見(jiàn)圖2。圖2 各組大鼠腸黏膜TRPV5 、TRPV6、NCX1、PMCA1b、ZO-1、occludin、claudin mRNA表達(dá)比較 ( x - ±s,8 只鼠/組)

圖1 各組大鼠脛骨、股骨的骨密度比較 ( x - ±s,8 只鼠/組)2.3 各組大鼠腸黏膜中TRPV5、TRPV6、NCX1、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin蛋白表達(dá)的比較

PMOP主要是由于絕經(jīng)后雌激素(E2)水平降低,E2對(duì)破骨細(xì)胞的抑制作用減弱,破骨細(xì)胞形成增多,活性增加,骨形成受到抑制,導(dǎo)致骨吸收功能增強(qiáng)[14]。研究[15-16]表明,TRPV5在E2介導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成、骨吸收活性和破骨細(xì)胞凋亡中起主導(dǎo)作用,TRPV6-/-小鼠可出現(xiàn)腸道鈣離子吸收障礙、體質(zhì)量下降和骨密度下降等問(wèn)題。TRPV5參與腎小管Ca離子的再吸收,而TRPV6參與腸道Ca離子的攝取,這些通道是促鈣激素調(diào)節(jié)的主要目標(biāo)[17]。腸腔內(nèi)鈣離子經(jīng)上皮細(xì)胞頂端膜中特異的TRPV5、TRPV6通道轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi),進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的鈣離子與calbindin結(jié)合并彌散到細(xì)胞基底膜,最后,通過(guò)膜上的NCX1和鈣離子ATP泵通道,把鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外[18-19]。這是鈣離子吸收的主要形式,它和細(xì)胞旁途徑共為鈣離子的吸收形式。細(xì)胞旁途徑過(guò)程是鈣離子通過(guò)腸上皮細(xì)胞之間的主要由ZO-1、occludin和claudin等蛋白構(gòu)成的緊密連接而進(jìn)入細(xì)胞外間隙[20-21]。該結(jié)構(gòu)允許小的分子或離子自由通透,因而鈣離子通過(guò)緊密連接是一個(gè)被動(dòng)的、非飽和的、不需要消耗能量的擴(kuò)散過(guò)程[22]。從以上鈣離子的整個(gè)吸收過(guò)程可以看出,TRPV5、TRPV6、calbindin-D等共同介導(dǎo)了鈣離子的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn),ZO-1、occludin和claudin等則共同介導(dǎo)了鈣離子的細(xì)胞旁途徑轉(zhuǎn)運(yùn),這些蛋白在腸鈣的吸收過(guò)程中各自發(fā)揮著非常重要的作用[21]。任何因素干擾或影響了這些基因或蛋白,均會(huì)影響鈣的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn),從而影響骨代謝而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。
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