目的:(1)觀察艾灸對胃癌大鼠惡病質(zhì)進(jìn)程的影響。(2)從腓腸肌肌重及肌細(xì)胞形態(tài)變化、肌細(xì)胞凋亡探討艾灸對胃癌惡病質(zhì)大鼠骨骼肌消耗的治療作用。(3)從艾灸對腓腸肌內(nèi)促炎因子TNF-α與IL-6、泛素蛋白連接酶MAFbx與MuRF-1的影響,闡明艾灸治療胃癌惡病質(zhì)骨骼肌消耗可能的機(jī)制。方法:健康SPF級SD大鼠50只,按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)選出10只分入空白組(A組)。隨機(jī)選擇12只通過手術(shù)模擬瘤體移植過程,成功后,隨機(jī)將10只作為假手術(shù)組(B組)。剩余28只采用Walker256瘤組織胃部黏貼制備胃癌模型,造模第7天后隨機(jī)選取3只驗證胃癌造模成功,剩余25只繼續(xù)觀察體質(zhì)量變化7天,參考人體惡病質(zhì)狀態(tài)的分級,當(dāng)胃癌大鼠體質(zhì)量減少至空白組的95%時,隨機(jī)分入模型組(C組),艾灸組(D組),每組10只。從造模第15天起,艾灸組予以隔日交替溫和灸①中脘、關(guān)元、足三里②脾俞、胃俞兩組穴位。同期空白組、假手術(shù)組和模型組進(jìn)行陪同抓取、捆綁固定。各組每次干預(yù)20min,每天1次,連續(xù)干預(yù)14天。期間觀測各組大鼠體質(zhì)量、攝食量。治療結(jié)束后,處死動物,測量其去臟器體質(zhì)量、剖取左側(cè)腓腸肌組織測量肌重、HE染色觀測腓腸肌形態(tài)變化(測算肌細(xì)胞橫徑)、原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)觀測腓腸肌細(xì)胞凋亡,剖取右側(cè)腓腸肌組織酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測腓腸肌組織中TNF-α及IL-6含量,蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測腓腸肌組織中MAFbx與MuRF-1的表達(dá)量。結(jié)果:(1)造模前,各組大鼠攝食量、體質(zhì)量無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。與空白組大鼠比較,胃癌造模12天起,造模大鼠攝食量減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);體質(zhì)量逐步下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在艾灸組大鼠治療期間,與空白組比較,模型組大鼠的攝食量持續(xù)減少(P0.01);至艾灸6日時,與模型組大鼠比較,艾灸組大鼠攝食量較模型組增加明顯(p0.05),艾灸14日后,艾灸組大鼠攝食量顯著高于模型組大鼠(P0.01)。同時,艾灸期間,艾灸6日起,艾灸組大鼠體質(zhì)量開始回升,艾灸組大鼠的體質(zhì)量開始高于模型組(P0.05)。艾灸治療14日后,與模型組比較,艾灸組大鼠體質(zhì)量顯著增加(P0.01)。(2)與空白組大鼠比較,模型組大鼠去臟器體質(zhì)量顯著下降(P0.01),腓腸肌質(zhì)量明顯降低(P0.01);艾灸組大鼠腓腸肌肌重稍降低(P0.05);模型組大鼠肌細(xì)胞間有大量炎性細(xì)胞浸潤,肌纖維橫徑明顯縮小(P0.01),腓腸肌肌纖維細(xì)胞凋亡比率增加(P0.01);經(jīng)艾灸治療14日后,艾灸組大鼠去臟器體質(zhì)量顯著升高(P0.01),腓腸肌組織結(jié)構(gòu)較完整,肌細(xì)胞排列較密,炎性細(xì)胞浸潤較少,肌纖維橫徑明顯大于模型組(p0.05),腓腸肌肌纖維細(xì)胞凋亡比率減少(P0.05)。(3)與空白組大鼠比較,假手術(shù)組腓腸肌組織中TNF-α、IL-6細(xì)胞因子含量無差異(P0.05);模型組大鼠腓腸肌組織中TNF-α、IL-6細(xì)胞因子含量升高(P0.01),MAFbx蛋白表達(dá)水平升高(P0.01),MuRF-1蛋白表達(dá)水平也有升高(P0.05),提示進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)。經(jīng)艾灸治療14日后,與模型組比較,艾灸組大鼠腓腸肌組織中TNF-α、IL-6細(xì)胞因子含量降低(P0.05),MAFbx與MuRF-1的蛋白表達(dá)水平均有降低(P0.05)。結(jié)論:(1)艾灸對胃癌惡病質(zhì)大鼠骨骼肌消耗具有治療作用,表現(xiàn)為增加骨骼肌肌重,改善病理變化、減少肌細(xì)胞凋亡。(2)艾灸對胃癌惡病質(zhì)大鼠骨骼肌消耗的治療作用與減少肌組織中促炎因子TNF-α、IL-6及泛素蛋白連接酶MAFbx與MuRF-1的表達(dá)以抑制肌炎性反應(yīng)、減少蛋白降解有關(guān)。
【學(xué)位單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R245.81
【部分圖文】：

ｘｍ，？１ｇ逡逑ＳＤ大鼠的左前肢的腋下及右后肢的腹股溝處，每只０．５ｍｌ。７天后，肉眼可見注射逡逑處已形成約２ｃｍ３大小的皮下瘤，高凸隆起、質(zhì)地堅硬。逡逑③瘤組織胃部黏貼移植：脫頸椎法處死皮下荷瘤大鼠，無菌條件下剝離皮逡逑下腫瘤，剔除壞死瘤塊組織，選擇生長良好的魚肉樣瘤組織，切成２ｘ２ｘ２ｍｍ３大逡逑小的瘤組織塊。１０％水合氯醛（３ｍｌ／ｌｋｇ）腹腔麻醉待移植的體質(zhì)量１８０？２２０ｇ的逡逑ＳＤ大鼠，仰臥位固定于鼠板，無菌條件下開腹找到胃組織，夾取一塊２ｍｍ３的瘤逡逑組織置于胃大彎皮區(qū)與腺區(qū)交界的胃壁上，無菌紗布吸干胃壁上體液后用５ｕｌ血逡逑紅蛋白吸管吸�。卞澹椋欤灬t(yī)用組織粘合膠滴在瘤組織附著處，將瘤組織與胃壁固定。逡逑完成后，將黏貼有瘤組織的胃回置于腹腔內(nèi)，逐層縫合關(guān)腹。逡逑胃癌造模成功評價：瘤組織胃部黏貼移植７天后，處死動物，無菌條件下剖逡逑開腹腔，觀察原瘤體黏貼處形成直徑ｌｃｍ以上的瘤體，表面光滑，邊界清晰，粘連及臟器侵犯，表明胃癌造模成功。ＨＥ染色結(jié)果也表明，胃部瘤體與皮下實逡逑體瘤同源。逡逑

３．結(jié)果逡逑３．１大鼠攝食量逡逑如圖２所示，造模前，各組大鼠攝食量無統(tǒng)計差異（Ｐ＞0．0５）。與空白組動逡逑物比較，造模大鼠攝食量的減少于造模１２ｄ起，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（尸＜0．0５）。逡逑在艾灸組動物治療期間，與空白組比較，模型組大鼠的攝食量持續(xù)減少，差異顯逡逑著（ＰＣ０．０１）。與模型組比較，艾灸組動物的攝食量在艾灸后緩慢增加，艾灸６逡逑曰后（造模２０ｄ），攝食量較模型組增加明顯（ＰＣ０．０５），艾灸１４日后（造模２８ｄ），逡逑攝食量顯著高于模型組動物（Ｐ＜０．０１）。逡逑４０ｔ逡逑＋空白組逡逑３０－邐＋假手術(shù)組逡逑Ｓ邐＾邋ｍ邋ｎ邐＋壚組逡逑Ｉ２０＇邐＋邋艾灸組逡逑塑邋１０－逡逑＊邋＊逡逑圖２各組大鼠攝食量變化情況（ｎ＝１０）逡逑注：與空白組比較，＞＜０．０５，邋＞＜０．０１；與模型組比較，Ｖ＜０．邋０５，，＜０．邋０１逡逑３．２大鼠體質(zhì)量逡逑如圖３所示，造模前，各組大鼠體質(zhì)量無統(tǒng)計差異（Ｐ＞0．0５）。造模１２天起，逡逑與空白組比較，造模動物體質(zhì)量開始下降，差異明顯（Ｐ＜０．0５），體質(zhì)量下降逡逑至空白組的９５％

注：與空白對照組比較，ＡＡ／°＜0．邋０１，與模型組比較，４Ａ／°＜0．0１。逡逑３．４大鼠腓腸肌肌重比較逡逑如圖４及表３所示，與空白組比較，模型組大鼠腓腸肌重量顯著降低（Ｐ＜０．０１），逡逑艾灸組大鼠腓腸肌肌重稍降低（尸＜０．０５）；與模型組比較，艾灸組大鼠腓腸肌逡逑重量明顯增加０．０５）。逡逑１３逡逑

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本文編號：2822302