目的:在課題組前期研究的基礎(chǔ)上,對蒙藥森登-4中化學(xué)成分進(jìn)行分離純化及富集。對蒙藥復(fù)方森登-4的體內(nèi)藥效成分進(jìn)行研究。采用小鼠肉芽腫實驗、耳腫脹實驗以及扭體反應(yīng)實驗研究蒙藥森登-4對小鼠的抗炎鎮(zhèn)痛作用。采用氧嗪酸鉀制作大鼠高尿酸血癥模型,研究森登-4的降尿酸作用。采用紫外可見分光光度法對森登-4正常大鼠和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的血清中總黃酮和總萜的含量進(jìn)行研究,并探索其在血清中的移行情況;對森登-4正常大鼠和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的尿液中總黃酮和總萜的含量進(jìn)行研究,確定總黃酮和總萜對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的治療作用。采用UPLC-Q-TOF-MS法分析正常大鼠、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠關(guān)節(jié)中的京尼平-1-O-β-D-龍膽二糖苷和梔子苷的含量,并研究藥-時曲線,為蒙藥復(fù)方森登-4的藥理藥效研究提供依據(jù)。方法:將蒙藥森登-4制成有效部位,采用大孔樹脂柱,硅膠柱,MCI柱,凝膠柱洗脫,得不同流分,對其中的楊梅素、(2R,3R)-雙氫楊梅素、槲皮素、梔子苷、京尼平-1-O-β-D-龍膽二糖苷、沒食子酸進(jìn)行有目標(biāo)的追蹤。取180只小鼠,分別進(jìn)行棉球致小鼠肉芽腫實驗,二甲苯致小鼠耳腫脹實驗,醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實驗。觀察蒙藥森登-4各給藥組與模型空白組及陽性對照組的肉芽腫增值重量差異,耳片炎癥腫脹度抑制差異和小鼠的扭體抑制差異。將大鼠隨機分為正常組和高尿酸血癥模型組,采用ELISA法測定各組大鼠血清和尿液中的尿酸(UA)水平。將大鼠分為正常組和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型組,灌胃給予蒙藥森登-4有效部位,給藥后取大鼠尿液及不同時間點血清,經(jīng)除蛋白處理及顯色反應(yīng)后,采用紫外分光光度法對大鼠血清及尿液中的總黃酮及總萜成分進(jìn)行測定,計算含量,并進(jìn)行血清藥代動力學(xué)研究。將大鼠分為正常組、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型組,灌胃給予蒙藥森登-4有效部位后,取大鼠關(guān)節(jié)的乙腈提取液,采用UPLC-Q-TOF-MS法對提取液中的京尼平-1-O-β-D-龍膽二糖苷和梔子苷進(jìn)行測定。結(jié)果:從蒙藥森登-4中分離富集得到足量的6個化合物,經(jīng)薄層色譜、液相色譜指認(rèn)和~1H-NMR和~(13)C-NMR波譜數(shù)據(jù)對比,確認(rèn)為楊梅素,(2R,3R)-雙氫楊梅素,梔子苷,京尼平-1-O-β-D-龍膽二糖苷,槲皮素,沒食子酸。蒙藥復(fù)方森登-4中劑量組能抑制棉球致小鼠肉芽腫的生長,可以抑制二甲苯致小鼠耳腫脹,可以抑制冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng),表明蒙藥復(fù)方森登-4有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用。對大鼠血清及尿液進(jìn)行UA檢測,并比較模型對照組和給藥組的UA水平,結(jié)果表明,蒙藥森登-4有降尿酸作用。建立了紫外可見分光光度法測定大鼠血清中總黃酮和總萜含量的方法,并對總黃酮和總萜的藥代動力學(xué)進(jìn)行了初步研究。采用UPLC-Q-TOF-MS法,測定了大鼠關(guān)節(jié)中京尼平-1-O-β-D-龍膽二糖苷和梔子苷的含量。結(jié)論:蒙藥復(fù)方森登-4具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛和降尿酸作用,與其在臨床上治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)的用途相對應(yīng)。對蒙藥森登-4體內(nèi)藥效成分的研究表明,復(fù)方所含有的總黃酮和總萜在治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的過程中存在重要意義,并通過UPLC-Q-TOF-MS法對其進(jìn)行萜類質(zhì)量標(biāo)志物:京尼平-1-O-β-D-龍膽二糖苷和梔子苷的驗證,為蒙藥森登-4的藥理藥效研究提供了有力依據(jù)。
【學(xué)位單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R29
【部分圖文】：

槲皮素 楊梅素 (2R,3R)-雙氫楊梅素 梔子苷 京尼平-1-O-β-D 沒食子酸-龍膽二糖苷圖 2-1 各化合物與對照品共薄層圖如圖采用 HPLC 法對純化得到的化合物進(jìn)行指認(rèn)，結(jié)果如圖 2-2 所示。0 5 10 15 20 25 30 35 40minmAU-50050100150200250300350MWD D, Sig=254,16 Ref=關(guān)閉 (趙\三種姜找峰000079.D)0 5 10 15 20 25 30 35 40minmAU-50050100150200250300350MWD D, Sig=254,16 Ref=關(guān)閉 (趙\三種姜找峰000082.D)0.2480 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20minmAU-30-20-100102030MWD D, Sig=254,16 Ref=關(guān)閉 (趙\三種姜找峰000072.D)0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20minmAU-50050100150200250300MWD D, Sig=254,16 Ref=關(guān)閉 (趙\三種姜找峰000073.D)槲皮素對照品和化合物 1 楊梅素對照品和化合物 20 5 10 15 20minmAU-18-16-14-12-10-8-6-4MWD D, Sig=254,16 Ref=關(guān)閉 (趙\三種姜找峰000099.D)MWD D, Sig=254,16 Ref=關(guān)閉 (趙\三種姜找峰000076.D)0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5minmAU-50-40-30-20-100102030MWD D, Sig=254,16 Ref=關(guān)閉 (趙\三種姜找峰000109.D)MWD D, Sig=254,16 Ref=關(guān)閉 (趙\三種姜找峰000110.D)

-1正常組和模型組大鼠藥-時曲線

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本文編號：2818987