研究背景“穴位敏化”是指腧穴從生理狀態(tài)下的“靜息態(tài)”轉(zhuǎn)換為病理狀態(tài)下的“激活態(tài)”,通過(guò)這種方式實(shí)現(xiàn)接收刺激、調(diào)整機(jī)體狀態(tài)的功能。而“敏化態(tài)腧穴”是疾病在體表的重要表現(xiàn)部位,因此其表現(xiàn)出不可忽視的臨床價(jià)值。當(dāng)前來(lái)說(shuō),針對(duì)穴位敏化的研究通常情況下集中在腧穴的光敏化、電敏化、熱敏化及微循環(huán)敏化等諸多層面。而微循環(huán)作為人體臟器的重要結(jié)構(gòu),在物質(zhì)供應(yīng)與代謝、維持血流灌注及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等各個(gè)層面都體現(xiàn)出十分重要的作用,與腧穴敏化存在緊密的聯(lián)系。對(duì)于腧穴微循環(huán)敏化而言,其一般情況下表現(xiàn)為疾病狀態(tài)下,特定腧穴的皮膚局部微循環(huán)流量及血管通透性發(fā)生明顯變化。當(dāng)前來(lái)說(shuō),腧穴敏化在組織微循環(huán)層次上的成像研究存在諸多尚待完善之處,不但成像技術(shù)方法比較單一,而且其特異性與精確度都相對(duì)較低,如此就阻礙了對(duì)腧穴敏化研究的進(jìn)一步發(fā)展。光聲成像技術(shù)(photoacoustic imaging,PAI)是一類(lèi)比較先進(jìn)的成像技術(shù),其光學(xué)成像對(duì)比度達(dá)到較高的水平,對(duì)組織功能特性敏感,并且具備聲學(xué)成像的高探測(cè)深度與非常理想的深層組織空間分辨率,能夠表現(xiàn)出無(wú)損、活體、實(shí)時(shí)、功能、跨尺度等多個(gè)方面的優(yōu)勢(shì)。該技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)在一定深度內(nèi)毛細(xì)血管水平的皮下微循環(huán)成像,可以針對(duì)其結(jié)構(gòu)形態(tài)展開(kāi)客觀的評(píng)析,因此在微循環(huán)成像領(lǐng)域表現(xiàn)出非常鮮明的優(yōu)勢(shì)。所以本文以PAI技術(shù)為核心方法完成穴位敏化研究,以期將穴位敏化過(guò)程的特征性改變——局部微循環(huán)血管形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能狀態(tài)進(jìn)行良好的呈現(xiàn),從而分析腧穴內(nèi)涵,探討腧穴敏化的規(guī)律,為針灸臨床提供有價(jià)值的參考。研究目的通過(guò)光聲成像技術(shù)闡明膝骨關(guān)節(jié)炎小鼠足三里、陽(yáng)陵泉、非穴由生理靜息狀態(tài)到病理敏化狀態(tài)局部微血管形態(tài)改變,初步闡釋穴位敏化現(xiàn)象在組織微循環(huán)結(jié)構(gòu)層面的具體內(nèi)涵。研究方法本研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn),選用8周齡SPF級(jí)BALB/c小鼠12只,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,將其不定向分為三組,分別是空白組(Control)、膝骨關(guān)節(jié)炎模型組(Knee Osteoarthritis Model,KOA)以及假模型組(False Model,FM),各組分配4只。然后應(yīng)用膝關(guān)節(jié)注射單碘乙酸鹽方法于實(shí)驗(yàn)第0天小鼠KOA模型制備。其詳細(xì)流程為:通過(guò)0.9%的無(wú)菌生理鹽水調(diào)配0.05mg/μL的單碘乙酸鹽(Mono-iodo-acetic acid,MIA)溶液,之后在腹腔當(dāng)中注射特定濃度的戊巴比妥鈉,使其成功麻醉,然后對(duì)右后肢膝關(guān)節(jié)周?chē)氖竺M(jìn)行清理,將關(guān)節(jié)屈曲到最大水平之后,通過(guò)27G無(wú)菌注射器將10μL準(zhǔn)備好的MIA溶液通過(guò)右后肢膝髕韌帶外側(cè)向膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射。FM組按照完全一致的方法在右后肢膝關(guān)節(jié)腔中注入10μL0.9%的生理鹽水,Control組不進(jìn)行任何操作。檢測(cè)方法和指標(biāo):在實(shí)驗(yàn)第0,7,21天,應(yīng)用PAI系統(tǒng)對(duì)各組小鼠右后肢足三里、陽(yáng)陵泉及非穴區(qū)微循環(huán)血管彎曲度、直徑百分比、密度展開(kāi)測(cè)定。應(yīng)用微血管定量分析算法在Matlab工具內(nèi)完成數(shù)據(jù)分析。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后的第21天,根據(jù)有關(guān)規(guī)范進(jìn)行PAI檢測(cè),之后將各組小鼠腹腔注射一定濃度的戊巴比妥致死。取右膝關(guān)節(jié)采用番紅固綠染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察膝關(guān)節(jié)組織形態(tài)學(xué)改變。研究結(jié)果1番紅固綠染色切片觀察結(jié)果實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后的第21天,Control組軟骨基質(zhì)很大程度上表現(xiàn)出均勻的紅色,潮線明晰;FM組軟骨表明光滑,軟胞緊密排列,軟骨層番紅染色均勻呈紅色。此外,Control組和FM組軟骨表明及軟骨形態(tài)完整沒(méi)有受到損傷。KOA組關(guān)節(jié)軟骨厚度變薄,細(xì)胞排列紊亂,軟骨侵蝕基質(zhì)流失,軟骨裂隙的數(shù)量增加,染色相對(duì)較淺且不均勻,軟骨表層剝蝕,而且發(fā)生了一定程度的變形,產(chǎn)生較多的中層囊腫。2足三里、陽(yáng)陵泉、非穴穴區(qū)的PIA圖及微循環(huán)結(jié)構(gòu)的定量分析結(jié)果2.1微循環(huán)血管彎曲度結(jié)果實(shí)驗(yàn)第0,7,21天,PAI系統(tǒng)顯示各組的足三里、陽(yáng)陵泉、非穴穴區(qū)之間,KOA組與Control組進(jìn)行對(duì)比之后P0.05,Control組與FM組比較P0.05,微血管彎曲度沒(méi)有顯著差異。2.2微血管直徑百分比結(jié)果微血管的直徑區(qū)間為5～100μm,在足三里、陽(yáng)陵泉及非穴局部直徑區(qū)間為20～60 μm。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的第0,7,21天,各組的足三里、陽(yáng)陵泉、非穴穴區(qū)之間,KOA組與Control組比較P0.05,KOA組與FM組比較P0.05,微血管直徑百分比沒(méi)有顯著差異。2.3微血管密度結(jié)果實(shí)驗(yàn)第0,7,21天,各組的足三里、陽(yáng)陵泉、非穴穴區(qū)之間,KOA組與Control組進(jìn)行對(duì)比,其P0.05,KOA組與FM組進(jìn)行對(duì)比,P0.05,微血管密度沒(méi)有顯著差異。研究結(jié)論(1)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Control組、KOA組和FM組小鼠足三里、陽(yáng)陵泉及非穴的微血管彎曲度、直徑百分比及密度都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著的變化(P0.05)。這說(shuō)明在穴位敏化狀態(tài)下,腧穴及非穴局部微循環(huán)結(jié)構(gòu)沒(méi)有出現(xiàn)變化。(2)在KOA疾病狀態(tài)下,治療常用穴位陽(yáng)陵泉、足三里的局部微循環(huán)結(jié)構(gòu)變化不明顯,穴位敏化的內(nèi)涵可能是微循環(huán)所對(duì)應(yīng)的功能狀態(tài)出現(xiàn)一定變化。(3)本文首次將PAI技術(shù)在穴位敏化狀態(tài)下腧穴局部微血管形態(tài)改變的研究中進(jìn)行應(yīng)用,其不但是穴位活體成像研究的創(chuàng)新,并且也為穴位敏化實(shí)時(shí)高分辨率成像研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R245;R-332
【部分圖文】：

逑２光聲成像逡逑第０、７和２１天ＧＢ３４、ＳＴ３６和非穴位部位光聲成像（ＰＡＩ圖）結(jié)果如圖３邋－邋７所示。逡逑小鼠右下肢外側(cè)４．５毫米＞＜６．５毫米區(qū)域微循環(huán)觀察清晰。微血管直徑在５邋－邋１００微米之間，逡逑主要在0８３４、５�。常逗头茄ㄎ徊课坏模玻埃叮拔⒚字g。0８３４、５�。常逗头茄ㄎ徊课坏奈㈠义涎h(huán)結(jié)構(gòu)可以在不同時(shí)期清晰區(qū)分。在第０、７和２１天，各組的ＧＢ３４、ＳＴ３６和非穴位逡逑部位的微血管變化無(wú)顯著性差異。在三組中沒(méi)有觀察到血管結(jié)構(gòu)的明顯變化。逡逑ａ逡逑－邐ＧＢ３４逡逑－－邐ｖ邋邋Ｔｈｅ邋ｎｏｎ－Ａｃｕｐｏｉｎｔ逡逑ｗｉ、＞邋ＳＴ３６逡逑ＩＨＨｉ逡逑圖３邋．小鼠ＳＴ３６、ＧＢ３４和非穴位示意圖。ＳＴ３６位于脛骨前肌，距脛骨前結(jié)節(jié)外側(cè)和遠(yuǎn)端５毫米。逡逑非穴（Ｔｈｅ邋ｎｏｎ－Ａｃｕｐｏｉｎｔ）穴位部位位于ＳＴ３６外側(cè)５毫米處。ＧＢ３４位于膝關(guān)節(jié)后外側(cè)腓骨頭逡逑下方的凹陷處＾右側(cè)下肢最大振幅投影圖像，其中ＳＴ３６、ＧＢ３４和非穴位（Ｔｈｅｎｏｎ－Ａｃ叩ｏｉｎｔ）逡逑顯示為亮點(diǎn)。比例尺為５００叫１邋（邋ｃ邋）右側(cè)下肢表面用黑色記號(hào)筆標(biāo)記ＳＴ３６、ＧＢ３４和非穴位。逡逑ＳＴ３６、ＧＢ３４和非穴位部位分別用橙色、藍(lán)色和綠色箭頭表示。逡逑４７逡逑

圖４．右側(cè)下肢的地圖圖像（４．５毫米＊６．５毫米區(qū)域）。黃色虛線方框（ａ）中直徑為５、１５、２５、逡逑４０、５０和６０微米的微血管分別標(biāo)有白色、橙色、綠色、藍(lán)色、紫色和灰色箭頭。比例尺逡逑為邋５００逡逑

圖５邋．分別示出了邋Ｃｏｎｔｒｏｌ組中ＳＴ３６、ＧＢ３４和非穴位位置的最大振幅投射圖和穴區(qū)局部分段體逡逑積ＯＲ－ＰＡＭ圖像及血管中心覆蓋線。比例尺為２００邋ｎｍ。逡逑４９逡逑

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本文編號(hào)：2816580