目的:探討頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境對孤獨(dú)癥大鼠炎癥損傷及細(xì)胞凋亡的影響。方法:參照Roullet的方法建立孤獨(dú)癥大鼠模型。設(shè)立假手術(shù)組、模型組、頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組。假手術(shù)組與模型組不予治療,頭穴叢刺組給予頭穴叢刺治療,豐富環(huán)境組給予豐富環(huán)境治療,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組給予頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境治療,采用曠場實(shí)驗(yàn)評估焦慮情緒,埋珠實(shí)驗(yàn)評估重復(fù)刻板行為,三箱實(shí)驗(yàn)評估社交能力和社交偏好,Morris水迷宮評估空間學(xué)習(xí)記憶能力。HE及Nissl染色檢測額葉炎性損傷、神經(jīng)元形態(tài)及數(shù)量;ELISA法檢測血清促炎性因子IL-1β、TNF-a,抑炎性因子IL-1Ra、TGF-β1;免疫組化法檢測額葉促炎性因子IL-1β、TNF-a,抑炎癥性因子IL-1Ra、TGF-β1蛋白表達(dá);TUNEL法檢測額葉細(xì)胞凋亡情況;Western Blot法檢測額葉Ras、Mek1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.行為學(xué)評估:(1)曠場實(shí)驗(yàn)與假手術(shù)組相比,模型組自發(fā)活動(dòng)距離和時(shí)間延長(P0.05);與模型組相比,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組自發(fā)活動(dòng)距離和時(shí)間減少(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組自發(fā)活動(dòng)距離和時(shí)間最短(P0.05)。(2)埋珠實(shí)驗(yàn)與假手術(shù)組相比,模型組埋珠個(gè)數(shù)多(P0.05);與模型組相比,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組埋珠個(gè)數(shù)少(P0.05);與豐富環(huán)境組、頭穴叢刺組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組埋珠個(gè)數(shù)少(P0.05)。(3)三箱實(shí)驗(yàn)3.1與假手術(shù)組相比,模型組的社交指數(shù)和社交偏好指數(shù)均小(P0.05);與模型組相比,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組社交指數(shù)和社交偏好指數(shù)增大(P0.05),與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組的社交指數(shù)和社交偏好指數(shù)最大(P0.05)。3.2與假手術(shù)組相比,模型組的社交Sniff和社交偏好Sniff均少(P0.05);與模型組相比,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組社交Sniff和社交偏好Sniff均增大(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組的社交Sniff和社交偏好Sniff最大(P0.05)。(4)Morris水迷宮4.1定位巡航實(shí)驗(yàn):與假手術(shù)組比較,模型組探索平臺次數(shù)少(P0.05);與模型組相比,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組探索平臺的次數(shù)多(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組探索平臺的次數(shù)多(P0.05)。4.2空間探索實(shí)驗(yàn):與假手術(shù)組比較,模型組穿越平臺次數(shù)少(P0.05);與模型組相比,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組穿越平臺次數(shù)增多(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組穿越平臺次數(shù)多(P0.05)。2.HE染色假手術(shù)組大鼠額葉細(xì)胞未見炎癥細(xì)胞的浸潤及水腫。細(xì)胞排列均勻、緊密,輪廓清楚,胞核染色為藍(lán)色,呈橢圓形,可見核仁,未見神經(jīng)細(xì)胞變性壞死。模型組可見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤,細(xì)胞水腫,膠質(zhì)細(xì)胞增生。細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞間隙變大,細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊或消失,存在神經(jīng)元細(xì)胞變性、壞死、崩解,核固縮,甚至有軟化灶。3組干預(yù)組治療后炎性病理損傷均有所減輕,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組減輕最為明顯。3.Nissl染色與假手術(shù)組相比,模型組額葉神經(jīng)元存活數(shù)量減少(P0.05);與模型組比較,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組額葉神經(jīng)元數(shù)量增加(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組額葉神經(jīng)元數(shù)量最多(P0.05)。假手術(shù)組神經(jīng)元數(shù)目最多,額葉細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,胞體無萎縮、尼氏體數(shù)量多,無溶解現(xiàn)象,胞漿深染;模型組神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量最少,細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞明顯,正常神經(jīng)元細(xì)胞少見,胞體萎縮,尼氏體數(shù)量明顯減少;經(jīng)過3種干預(yù)治療后,神經(jīng)元損傷均有所減輕,其中以頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組最為明顯。4.ELISA檢測促炎性因子IL-1β和TNF-a:與假手術(shù)組比較,模型組血清IL-1β和TNF-a表達(dá)升高(P0.05);與模型組比較,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)降低(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組相比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)最低(P0.05)抑炎性因子IL-1Ra和TGF-β1:與假手術(shù)組比較,模型組血清IL-1Ra和TGF-β1明顯降低(P0.05);與模型組比較,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)升高(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組相比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)最高(P0.05)。5.免疫組化法促炎性因子IL-1β和TNF-a:與假手術(shù)組比較,模型組額葉IL-1β和TNF-a表達(dá)增加(P0.05);與模型組比較,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)降低(P0.05),與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組相比,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境表達(dá)最低(P0.05)。抑炎性因子IL-1Ra和TGF-β1:與假手術(shù)組比較,模型組額葉IL-1Ra和TGF-β1表達(dá)降低(P0.05);與模型組比較,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)增多(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組相比,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)最多(P0.05)。6.TUNEL法檢測與假手術(shù)組相比,模型組額葉TUNEL陽性數(shù)量增多(P0.05);與模型組相比,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)減少(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境大鼠額葉TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)最少(P0.05)。7.Western Blot法檢測促凋亡Bax:與假手術(shù)組比較,模型組額葉Bax蛋白表達(dá)增加(P0.05);與模型組比較,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組額葉Bax蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05),與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組Bax蛋白表達(dá)最少(P0.05)。抑凋亡Bcl-2:與假手術(shù)組比較,模型組額葉Bcl-2蛋白表達(dá)明顯減低(P0.05);與模型組比較,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組額葉Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯升高(P0.05);與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組Bcl-2表達(dá)最多(P0.05)。Bcl-2/Bax:五組比值中,假手術(shù)組最大,模型組減低;與模型組比較,頭穴叢刺、豐富環(huán)境、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境治療后Bcl-2/Bax比值明顯升高;接近于1,其中頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組Bcl-2/Bax比值最高。Ras/ERK1/2通路:與假手術(shù)組比較,模型組額葉Ras、Mek1/2及p-ERK1/2蛋白表達(dá)增加(P0.05);與模型組比較,頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)減少(P0.05),與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較,頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組表達(dá)最少(P0.05)。結(jié)論:1.頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境可改善丙戊酸鈉誘導(dǎo)的孤獨(dú)癥大鼠焦慮情緒、刻板行為、社會交往、認(rèn)知學(xué)習(xí)記憶能力,優(yōu)于單一的頭穴叢刺組和豐富環(huán)境組。2.頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境可降低丙戊酸鈉誘導(dǎo)的孤獨(dú)癥大鼠炎癥反應(yīng),抑制血清和額葉腦組織的促炎性因子TNF-a、IL-1β、增強(qiáng)抑炎性因子TGF-β1、IL-1Ra表達(dá),降低額葉區(qū)細(xì)胞炎性損傷,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。3.頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境可減少丙戊酸鈉誘導(dǎo)的孤獨(dú)癥大鼠額葉細(xì)胞凋亡數(shù)目,促進(jìn)額葉Bcl-2表達(dá),抑制Bax、Ras、MEK1/2、p-ERK1/2表達(dá),降低細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R245
【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)中的表現(xiàn)。結(jié)果表明，模型鼠的自發(fā)活動(dòng)增加，對新奇物體的探力以及社交行為均有所下降，這進(jìn)一步驗(yàn)證了該方法的可靠性。.5 豐富環(huán)境建立依 據(jù) 前期 研 究 和 參 照 Nithianantharajah 的[118]描 述 自制 有 機(jī) 玻 璃 豐境（enrichedenvironment，EE）籠, 規(guī)格：長 70cmｘ寬 60cmｘ高 50c富環(huán)境體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：觸覺、視覺、嗅覺、前庭覺、本體覺等感官刺激的綜合輸入、空間增大、飾物定期更換、社交伙伴增多。籠置各種顏色、氣味、形狀、質(zhì)地的物件，例如軟硬不同的毛刷、有刺氣味的檸檬、薄荷棉球等、不同質(zhì)感的砂紙、靜音跑輪、透明發(fā)光彈、秋千、蹺蹺板、平臺隧道、斜坡等“玩具”。豐富環(huán)境中除放入孤獨(dú)，也以 1：1 的方式放入正常同齡雌性大鼠，每次豐富環(huán)境中有 12-14。豐富環(huán)境中的食和水一直在固定的位置，偶給與花生、葵花籽。每新布置一次環(huán)境。豐富環(huán)境訓(xùn)練結(jié)束后，所有鼠將放置在小籠子（長 20寬 15cmｘ高 10cm）里。

2.實(shí)驗(yàn)方法2.1 實(shí)驗(yàn)分組本研究選擇雄性大鼠 30 只，根據(jù)行為學(xué)檢測結(jié)果，依據(jù)匹配原則將大鼠分為假手術(shù)組(CON）、模型組(VPA)、頭穴叢刺組(COSA)、豐富環(huán)境組（EE）、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組（COSA＋EE），每組 6 只。生長發(fā)育和行為學(xué)檢測結(jié)果的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行比較，組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.2 干預(yù)方法假手術(shù)組及丙戊酸鈉模型組： 術(shù)后回籠觀察，不予任何治療；只給予同等條件活動(dòng)。頭 穴 叢 刺 組 ： 生 后 21 天 頭 穴 叢 刺 法 治 療 。 采 用 1.0 寸 針 灸 針（0.25×0.13mm），參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》定位百會穴及旁開 5mm 處針刺，刺入 10-20mm，快速捻轉(zhuǎn) 20 秒后，留針 2h。1 次/天，6 次/周，干預(yù) 3 周[119](圖 2AB)。

圖 3 曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果A 假手術(shù)組；B 模型組；C 頭穴叢刺組；D 豐富環(huán)境組；E 頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組；F 自發(fā)活動(dòng)距離；G 自發(fā)活動(dòng)時(shí)間3.2 埋珠實(shí)驗(yàn)埋珠實(shí)驗(yàn)主要用來評估孤獨(dú)癥大鼠的評估重復(fù)刻板行為。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的重復(fù)刻板行為明顯增加，有顯著差異（P＜0.05），說明丙戊酸鈉造成了大鼠重復(fù)刻板行為的增多；與模型組相比，經(jīng)頭穴叢刺、豐富環(huán)境、頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境治療后，三個(gè)干預(yù)組大鼠重復(fù)刻板行為都明顯減少，差異顯著（P＜0.05），其中以頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境組重復(fù)刻板行為減少最明顯，與頭穴叢刺組、豐富環(huán)境組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說明這三種療法均可改善因丙戊酸鈉造成的重復(fù)刻板行為增多，且以二者聯(lián)合治療效果最好（圖 4）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王凡;張晨;方貽儒;;Ras信號通路與抑郁癥神經(jīng)可塑性機(jī)制[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年10期

2 張夢遙;劉正霞;魯翔;;白細(xì)胞介素-1家族與冠心病[J];實(shí)用老年醫(yī)學(xué);2015年08期

3 李洪華;杜琳;單玲;馮俊燕;賈飛勇;;孤獨(dú)癥譜系障礙流行病學(xué)研究現(xiàn)狀[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2014年24期

4 王田甜;杜琳;單玲;賈飛勇;;孤獨(dú)癥譜系障礙中免疫異常的研究進(jìn)展[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2014年12期

5 鄭菁婧;李舒婧;于翔;;自然感覺刺激對腦發(fā)育的影響[J];生命科學(xué);2014年11期

6 盧金清;許俊潔;萬麗娟;蔡君龍;;中醫(yī)治療兒童自閉癥的研究[J];中醫(yī)兒科雜志;2014年05期

7 張維;;田從豁教授開竅清心安神治療兒童自閉癥1例[J];針灸臨床雜志;2014年08期

8 蘇琴基;姚大澎;江家靖;郭文斌;;孤獨(dú)癥腦功能核磁共振成像研究進(jìn)展[J];國際精神病學(xué)雜志;2014年02期

9 曾海輝;陳爽;楊小琴;黃秀容;曾俠一;羅秋燕;;靳三針療法輔助治療兒童孤獨(dú)癥30例臨床觀察[J];中醫(yī)兒科雜志;2014年02期

10 劉波;馬曉東;趙宇;鄒偉;;頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境刺激對缺氧缺血性腦損傷新生大鼠突觸超微結(jié)構(gòu)和EGFmRNA表達(dá)的影響[J];針灸臨床雜志;2013年12期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 楊艷春;頭穴叢刺結(jié)合豐富環(huán)境對HIBD大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡及BDNF/TrkB通路相關(guān)蛋白的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 尹愛蘭;Ras/Raf/Erk1/2信號通路過度表達(dá)與自閉癥的相關(guān)性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 鄒華;Ras/Raf/ERK1/2信號通路在自閉癥發(fā)病機(jī)制中的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

4 劉剛;針刺配合音樂療法治療自閉癥的臨床觀察和實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 金辰;白介素-1受體拮抗劑對大鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制探討[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

2 楊倩;白細(xì)胞介素1受體拮抗劑對慢性腦低灌注大鼠的認(rèn)知保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

3 朱紅果;室旁核AT1R/Ras/ERK1/2/caspase-3通路對腎性高血壓調(diào)節(jié)的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

4 張麗萍;細(xì)胞因子與孤獨(dú)癥相關(guān)性研究[D];吉林大學(xué);2013年

本文編號：2808927