【摘要】：目前,結(jié)核病仍是全世界最為致命的傳染病,尤其耐多藥肺結(jié)核病(Multidrug-resi stant tuberculosis,MDR-TB)是全球結(jié)核病控制的關(guān)鍵性難題。缺乏有效的早期診斷方法,以及治療周期長(zhǎng)、副作用大,病人不易耐受等不足,使MDR-TB疫情得不到有效控制。中醫(yī)治療MDR-TB具有較好的減毒增效作用。然而,對(duì)MDR-TB中醫(yī)證候的分型和診斷缺乏客觀生物學(xué)依據(jù),導(dǎo)致中醫(yī)治療MDR-TB療效的優(yōu)勢(shì)不能穩(wěn)定發(fā)揮。在本論文的第一部分研究中,我們使用微陣列、生物信息學(xué)分析和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)的方法,研究 MDR-TB患者、藥物敏感性肺結(jié)核病(drug-sensitive tuberculosis,DS-TB)患者和健康對(duì)照(healt h control,HC)者血漿中差異表達(dá)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA),以及l(fā)ncRNA對(duì)MDR-TB的潛在診斷價(jià)值。在第二部分中,采用iTRAQ-2DLC-MS/MS(isobaric tags for relative and absolute quantification-coupled twodimensional liquids chromatography-tandem mass spectrometry)結(jié)合生物信息學(xué)分析方法,對(duì) MDR-TB 不同中醫(yī)證候患者血清進(jìn)行蛋白質(zhì)篩選、鑒定,生物學(xué)功能分析,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(en zyme-linked immune sorbent assay,ELISA)驗(yàn)證分析,并運(yùn)用受試者工作特征(receiv er operating characteristic,ROC)曲線評(píng)估差異蛋白的診斷效果。第一部分研究發(fā)現(xiàn),相比DS-TB組,有543個(gè)lncRNA(195個(gè)mRNA)在MDR-TB組中差異表達(dá),其中181個(gè)(63個(gè)mRNA)上調(diào),362個(gè)下調(diào)(132個(gè)mRNA);相比HC組,有699個(gè)lnc RNA(231個(gè)mRNA)在MDR-TB組中差異表達(dá),包括345個(gè)(123個(gè)mRNA)上調(diào),354個(gè)下調(diào)(108個(gè)mRNA)�；虮倔w論(Gene ontology,GO),京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG),以及編碼-非編碼共表達(dá)(coding-noncoding co-expression,CNC)分析表明,MDR-TB 組中差異 lncRNA的功能主要富集在物質(zhì)代謝、炎癥免疫和蛋白修飾等方面,例如脂肪酸降解通路、賴氨酸降解通路。RT-qPCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)3條lncRNA在MDR-TB組中上調(diào),包括NR_110750(P=0.036)、uc.212-(P=0.011)和 NR_131237(P=0.008)。第二部分研究發(fā)現(xiàn),71個(gè)蛋白質(zhì)在MDR-TB三證中差異性表達(dá)。β轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)蛋白(Transforming gr owth factor-beta-induced protein ig-h3,TGFBI)在肺陰虛(pulmonary Yin deficiency,PYD)證組中低表達(dá)(P=0.002);枯草桿菌前蛋白轉(zhuǎn)化酶(Pro-protein convertase subtil isin/kexin type 9,PCSK9)在陰虛火旺(Hyperactivity of Fire due to Yin deficiency,HFYD)證組中高表達(dá)(P0.0001);趨化因子 14(C-C motif chemokine 14,CCL14)在氣陰兩虛(deficiency of Qi and Yin,DQY)證組中低表達(dá)(P=0.004)。因此,血清蛋白質(zhì)TGFBI、PCSK9和CCL14分別是MDR-TB肺陰虛證、陰虛火旺證和氣陰兩虛證新的潛在蛋白標(biāo)志物。第一部分研究揭示了血漿lncRNAs作為MDR-TB生物標(biāo)志物的潛在診斷價(jià)值,以及這些差異表達(dá)的lncRNA在MDR-TB發(fā)病機(jī)制中的潛在機(jī)制。第二部分的研究為MDR-TB中醫(yī)證候分型提供了生物學(xué)依據(jù),對(duì)根據(jù)不同中醫(yī)證候選取不同治療方案具有重要意義。
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R259
【圖文】：

蛋白的生物學(xué)功能多樣，但集中在代謝過(guò)程和免疫系統(tǒng)過(guò)程的蛋白數(shù)也相對(duì)較多（圖逡逑２－３ａ）。此外，差異蛋白參與的細(xì)胞成分主要是細(xì)胞外區(qū)域（６７個(gè)蛋白，占２３％）（圖逡逑２－３ｂ），而其分子功能主要是捆綁（６３個(gè)蛋白，占４８％）（圖２－３ｃ）。ＫＥＧＧ分析顯示，逡逑差異蛋白主要富集在系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)緩剑ǎ祩�(gè)蛋白，占１９％），補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)（４逡逑個(gè)蛋白，占１５％）等途徑（圖２－３ｄ）。進(jìn)一步，通過(guò)功能網(wǎng)絡(luò)圖分析（ＳＴＲＩＮＧ），構(gòu)建逡逑這些差異蛋白的蛋白－蛋白相互作用（ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｉｎｔｅｒａｎｃｔｉｏｎ，邋Ｉ＊ＰＩ）網(wǎng)絡(luò)（圖２－４），發(fā)現(xiàn)大逡逑部分差異蛋白相互存在功能聯(lián)系，如代謝過(guò)程、免疫系統(tǒng)過(guò)程、補(bǔ)體和凝血途徑等。逡逑９ｎｕｎｅ邋ｓｙｓｔｅｍ逡逑ｒｏｃｅｓｓ，邋６％邐Ｂ逡逑Ｉ邋ｍｕｌｔｉｃｅｌｌｕｌａｒ逡逑工邐ｊ邋藏－逡逑ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ邐２５％邐ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ逡逑５＃／？邐ａｃｔｉｖｉｔｙ，邋４％逡逑，邋ｐｒｏｃｅｓｓ

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2805963