【摘要】：目的本研究是在前期開展的不同配穴對心肌缺血影響的工作基礎上,以運動性疲勞模型大鼠為研究對像,采用“針刺預處理”的方式,選用“關元”和“足三里”進行配穴的“保健穴”組與“關元”、“足三里”、“內關”三穴相配伍的“標本配穴”組與空白組、運動組進行比較,觀察其對運動性疲勞大鼠的抗疲勞能力、心肌組織抗氧化能力及對心臟內分泌功能的調節(jié)和對降鈣素基因相關肽(CGRP)和端粒酶逆轉錄酶(TERT)表達的影響,并采用1H-NMR核磁共振代謝組學檢測技術尋找其潛在的生物學標志物。為針灸“治未病”在消除運動性疲勞及對心臟的保護作用方面的運用提供有效的實驗基礎及探究思路。方法八周齡雄性SD大鼠60只,體重180-220g,隨機分為四組:空白組,運動組,保健穴組,標本配穴組,每組15只�？瞻捉M:正常飼養(yǎng),不運動,不針刺;運動組:只運動,不針刺;保健穴組:每天運動前一小時進行針刺預處理治療,取雙側的足三里穴和關元穴;標本配穴組:每天運動前一小時進行針刺預處理治療,取雙側的內關穴、足三里穴及關元穴。針刺操作方法:雙側“內關”穴:大鼠前肢內側,離腕關節(jié)約3mm左右的尺橈骨縫間,直刺2mm;雙側“足三里”穴:大鼠膝關節(jié)后外側,腓骨小頭下約5mm處,直刺3-5 mm;“關元”穴:大鼠腹白線上,臍下正中約2mm,向劍突方向呈45°角斜刺3mm;皮膚常規(guī)消毒后,采用華佗牌不銹鋼毫針0.30mm x 15mm,每穴直刺5mm,平補平瀉針刺手法,每針捻轉1min,留針15mim,共治療6周。除空白組外,每組進行6周的遞增負荷訓練,最后一天進行力竭訓練,訓練后即刻,大鼠腹腔麻醉,心尖部取血提取血清,取心肌組織,全自動生化儀檢測乳酸(LD)、肌酸激酶(CK)、尿素氮(BLU)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物岐化酶(T-SOD)、熒光定量PCR檢測心肌線粒體的氧化損傷,ELISA法檢測心鈉素(ANP),Western Blot檢測降鈣素基因相關肽(CGRP)和端粒酶逆轉錄酶(TERT);1H-NMR核磁共振技術對各組大鼠的血清樣本進行代謝組學檢測,并對數據結果進行統計分析。結果(1)對運動性疲勞大鼠抗疲勞能力的影響與空白組相比,運動組血清LD、CK、BUN含量均明顯增加(P0.05);與運動組相比,保健穴組和標本配穴組血清LD、CK、BUN含量均明顯降低(P0.05);而標本配穴組較保健穴組降低更明顯(P0.05)。(2)對心肌組織氧化應激作用的影響與空白組相比,運動組大鼠心肌組織MDA含量明顯增加(P0.05),T-SOD、GSH-PX含量明顯降低(P0.05);與運動組相比,保健穴組和標本配穴組心肌組織MDA含量明顯降低(P0.05),T-SOD、GSH-PX含量明顯增加(P0.05);而標本配穴組與保健穴組比較,MDA含量明顯降低(P0.05),T-SOD、GSH-PX含量明顯增加(P0.05)。(3)心肌細胞線粒體ND1基因表達的變化與空白組相比,運動組心肌細胞的線粒體ND1基因表達明顯升高(P0.01);與運動組相比,保健穴組、標本配穴組線粒體ND1基因表達下降(P0.05或P0.01);與保健穴組相比,標本配穴組線粒體ND1基因表達下降(P0.05)。(4)對心臟內分泌功能的調節(jié)作用與空白組相比,運動組大鼠心肌組織ANP含量明顯增加(P0.05);與運動組相比,保健穴組和標本配穴組心肌組織ANP含量明顯降低(P0.05);而標本配穴組心肌組織ANP含量較保健穴組明顯降低(P0.05)。(5)心肌細胞TERT與CGRP的表達變化與空白組相比,運動組心肌的TERT蛋白表達升高(P0.05),而CGRP蛋白表達減少(P0.05);與運動組相比,保健穴組和標本配穴組心肌的CGRP表達均升高(P0.05),而TERT蛋白的表達保健穴組與標本配穴組均降低(P0.05),與保健穴組相比,標本配穴組TERT蛋白表達降低(P0.05),而CG RP蛋白表達升高(P0.05)。(6)血清代謝組學檢測及潛在生物學標志物從血清PLS-DA得分圖顯示,空白組和標本配穴組輪廓相近,而運動組輪廓與其他組相異。根據VIP得分大于1的代謝物譜可以推測乳酸、葡萄糖、尿素、丙氨酸、乙酸可能是其潛在的代謝差異生物學標志物。結論(1)針刺預處理對運動性疲勞標志物有顯著改善,證明針刺預處理對抗運動性疲勞具有明顯作用,且標本配穴優(yōu)于保健穴配伍。(2)針刺預處理對運動性疲勞的心肌組織具有明顯的抗氧化作用,并且能夠減少力竭運動所對心肌細胞產生的損傷,且標本配穴優(yōu)于保健穴配伍。(3)針刺預處理可以通過調節(jié)心臟的內分泌功能以及心肌組織中的CGRP和TERT的表達與活性,起到對運動性疲勞狀態(tài)下心臟的保護作用,且標本配穴優(yōu)于保健穴配伍。(4)血清代謝組學檢測及潛在生物學標志物從血清PLS-DA得分圖顯示,空白組與標本配穴組輪廓接近,而運動組與其他組輪廓相異。根據VIP得分大于1的代謝物譜可以推測乳酸、葡萄糖、尿素、丙氨酸、乙酸可能是其潛在生物學標志物,說明標本配穴消除運動性疲勞及對心臟的保護作用可能是通過糖、脂代謝、能量代謝實現的。
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R245
【圖文】：

圖 1.血清 LD、CK、BUN 的含量A 圖表示 LD 的含量；B 圖為 BUN 的含量；C 圖為 CK 的含量；與空白組比較，*P<0.05；與運動組對比，#P<0.05；與保健組比較，+P<0.05。4 討論大負荷或劇烈運動后引起身體機能下降，產生運動性疲勞，其機制主要有衰竭學說、堵塞學說、內環(huán)境穩(wěn)定性失調、保護性抑制、自由基損傷學說、突變學說等[26]。中醫(yī)學中無“運動性疲勞”的概念，根據其臨床表現，歸屬于“勞倦”的范疇，主要由氣血虧損引起相應臟腑的生理功能失調或降低，導致運動性疲勞的發(fā)生[27]，所以采用補益和調理相結合的治則，可以從調節(jié)能源物質代謝、調節(jié)代謝產物、抗氧化、消除自由基、調節(jié)神經內分泌和免疫系統等方面多靶點、多途徑抗運動性疲勞[28,29]。腧穴是臟

本配穴組心肌組織MDA 含量明顯降低（P<0.05），T-SOD、GSH-PX含量明顯增加（P<0.05）；而標本配穴組與保健穴組比較，MDA含量明顯降低（P<0.05），T-SOD、GSH-PX 含量明顯增加（P<0.05）。見表7、8、9，圖2、3。表7 大鼠心肌組織MDA的含量（ x±s，nmol/mgprot）組別 n MDA空白組 15 2.22±0.28

圖 3.A 圖表示心肌組織 T-SOD 的含量，B 圖表示心肌組織 GSH 的含量。與空白組比較，*P<0.05；與運動組對比，#P<0.05；與保健組比較，+P<0.05。4 討論線粒體作為細胞代謝的中樞，許多重要生命代謝路徑都需要有賴于它的運轉來完成。而線粒體是唯一具有自己基因組(mtDNA)的細胞器。除了能量轉換的功能之外，線粒體還能生成活性氧自由基、并且參與調節(jié)細胞的氧化還原反應和信號轉導。運動性疲勞引發(fā)的氧化應激作用可導致線粒體功能降低、線粒體DNA氧化損傷增加，最終導致細胞調亡或衰老[40,41]。有學者[42]提出進行過度訓練時機體抗氧化能力下降，導致氧自由基生成增

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本文編號：2802324