【摘要】：目的:(1)觀察艾灸對胃癌大鼠腫瘤生長的抑制作用;(2)探討艾灸對胃癌組織中HSP70合成、釋放的影響;(3)從HSP70對免疫功能的影響出發(fā),觀察艾灸對胃癌大鼠免疫功能的影響。方法:60只健康SPF級SD大鼠(200~240g)編號后,按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)選出10只作為空白組(A組)。隨機(jī)選擇12只通過手術(shù)模擬瘤體移植過程,成功后,隨機(jī)選取10只分入假手術(shù)組(B組)。剩余38只采用Walker256癌細(xì)胞誘發(fā)的皮下癌組織移植胃部制備胃癌模型。7日后隨機(jī)選取8只驗證造模成功,剩余30只隨機(jī)分入模型組(C組),艾灸組(D組)、紅外組(E組),每組10只。艾灸組采用直徑7mm艾條隔日交替懸灸中脘、關(guān)元、足三里(雙)及脾俞(雙)、胃俞(雙)。紅外組采用波長0.4~3μm的紅外線隔日交替照射胃脘部及背部T11-T13區(qū)域。艾灸組、紅外組每次治療20分鐘,1天1次,連續(xù)21天�？瞻捉M、假手術(shù)組、模型組在同一時間陪同抓取、捆綁固定。治療期間觀察動物一般狀況,進(jìn)行生存狀態(tài)積分。治療結(jié)束,禁食不禁水12小時后,摘眼球采血,流式細(xì)胞計量術(shù)測定外周血中淋巴細(xì)胞凋亡、T細(xì)胞活化、CD3~+CD4~+、CD~+3CD8~+、CD4~+CD25~+、CD8~+CD28~+、CD8~+CD28~-T細(xì)胞比例。處死動物,無菌條件下剖開胸腔、腹腔,稱取、計算胸腺及脾臟指數(shù),觀測腫瘤生長及轉(zhuǎn)移,PCNA及TUNEL法測定胃部瘤體內(nèi)癌細(xì)胞的增殖與凋亡,ELISA法測定血清中HSP70的表達(dá),免疫組化、ELISA及RT-PCR法測定胃癌組織中HSP70、HSP70 mRNA表達(dá)。細(xì)胞因子微陣列芯片篩選胃癌組織中組間表達(dá)差異較大的細(xì)胞因子,進(jìn)一步用ELISA法測定其含量。結(jié)果:(1)與模型組比較,艾灸組大鼠生存狀態(tài)改善,治療15日后生存狀態(tài)積分明顯增高(P0.01);胃部瘤體體積增長被抑制(抑制率為41.89%),癌細(xì)胞向胃粘膜及腹腔臟器侵襲較少;胃癌組織內(nèi)增生的血管較少,壞死灶較多,癌細(xì)胞增殖少、凋亡多(均P0.01)。與模型組比較,紅外組大鼠生存狀態(tài)稍改善,治療15日后生存狀態(tài)積分稍高于模型組(P0.05),胃部瘤體體積增長稍受抑制(抑制率為28.09%),癌細(xì)胞向多個腹腔臟器轉(zhuǎn)移,胃癌組織內(nèi)大量血管,癌細(xì)胞增殖較少,凋亡較多(均P0.01)。與紅外組比較,艾灸治療15日后,艾灸組大鼠生存狀態(tài)積分增加更明顯(P0.05),胃部瘤體內(nèi)癌細(xì)胞增殖更少,凋亡更多(均P0.05)(2)與模型組比較,艾灸組大鼠血清中HSP70的含量增加(P0.01),胃癌組織內(nèi)HSP70及HSP70 mRNA表達(dá)水平增加(均P0.01),HSP70多表達(dá)于細(xì)胞外的組織間隙中。與模型組比較,紅外組大鼠血清中HSP70的含量顯著增加(P0.01),胃癌組織內(nèi)HSP70含量、HSP70 mRNA的表達(dá)增加(均P0.05)。與紅外組比較,艾灸組大鼠胃癌組織內(nèi)HSP70含量、HSP70 mRNA的表達(dá)更高(均P0.05),HSP70更多表達(dá)于細(xì)胞外(P0.05)。(3)與空白組比較,模型組大鼠胸腺、脾臟指數(shù)明顯增加(均P0.01);外周血中活化淋巴細(xì)胞比例增加,凋亡淋巴細(xì)胞比例減少(均P0.05);外周血中CD3~+、CD3~+CD8~+、CD8~+CD28~+、CD8~+CD28~-T細(xì)胞比例明顯增加(均P0.01),CD4~+CD25~+T細(xì)胞稍增加(P0.05),CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值明顯降低(P0.01)。與模型組比較,艾灸組大鼠胸腺、脾臟指數(shù)明顯增加(均P0.01);外周血中活化淋巴細(xì)胞比例增加,凋亡淋巴細(xì)胞比例減少(均P0.05);外周血中CD3~+、CD3~+CD4~+、CD8~+CD28~+T細(xì)胞比例明顯增加(均P0.01),CD3~+CD8~+T細(xì)胞、CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值增加(均P0.05),CD4~+CD25~+、CD8~+CD28~-T細(xì)胞比例下降(均P0.05);胃癌組織內(nèi)Th1型細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ含量增加(P0.01,P0.05),Th2型細(xì)胞因子IL-6、IL-22含量減少(均P0.05)。與模型組比較,紅外組大鼠脾臟指數(shù)增加(P0.05);外周血中CD8~+CD28~+T細(xì)胞比例增加(P0.05),CD4~+CD25~+T淋巴細(xì)胞比例減少(P0.01);胃癌組織內(nèi)Th1型細(xì)胞因子TNF-α含量增加(P0.05),Th2型細(xì)胞因子IL-6含量減少(P0.05)。與紅外組比較,艾灸組大鼠胸腺指數(shù)增加(P0.05),外周血中活化淋巴細(xì)胞比例增加,凋亡淋巴細(xì)胞比例減少(均P0.05),CD3~+、CD3~+CD4~+T細(xì)胞比例明顯增加(均P0.01),CD3~+CD8~+、CD8~+CD28~+T細(xì)胞比例稍增加(均P0.05);胃癌組織內(nèi)Th1型細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ含量增加(均P0.05)。結(jié)論:(1)艾灸能一定程度抑制胃癌大鼠腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移,減少癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)其凋亡。(2)艾灸能誘導(dǎo)胃癌大鼠腫瘤細(xì)胞內(nèi)HSP70的合成及細(xì)胞外釋放。(3)艾灸能提高胃癌大鼠免疫器官指數(shù)、活化淋巴細(xì)胞,激活并調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群,糾正Th1/Th2細(xì)胞因子失衡,促進(jìn)了胃癌大鼠的免疫功能。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245.81
【圖文】：

皮下實體瘤（左）、胃部瘤體（右）HE染色觀察（×400倍）

圖 1-3 癌細(xì)胞腹水、肝臟、小腸、脾臟轉(zhuǎn)移體體積增長抑制率間內(nèi)無動物死亡。干預(yù)結(jié)束處死動物，開腹探查后發(fā)現(xiàn)模型組均有瘤體破潰消失，其中模型組 1 例、艾灸組 6 例、紅外組 3灸組、紅外組分別仍有 9 只、4 只、7 只胃上仍長有瘤體。各

D 艾灸組 E 紅外組圖 1-5 各組大鼠胃黏膜形態(tài)（HE，如圖 1-6 所示，模型組胃癌組織內(nèi)血管較多，壞死內(nèi)血管少，壞死灶較多；紅外組胃癌組織內(nèi)內(nèi)有一定壞

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