【摘要】：研究目的以腦缺血再灌注損傷模型大鼠為研究對象,通過電針預(yù)處理大鼠的“百會”、“腎俞”及“三陰交”穴,觀察電針預(yù)處理對腦缺血再灌注損傷模型大鼠的腦保護(hù)效應(yīng)。應(yīng)用TRPV1的抑制劑AMG-517及TRPV1的激動劑Capsicine,進(jìn)一步探討電針預(yù)處理發(fā)揮的腦保護(hù)效應(yīng)與TRPV1的關(guān)系。研究方法1.將30只SD雄性大鼠按隨機數(shù)字表分成正常組(Control)、假手術(shù)組(Sham)、模型組(MCAO),各組10只。運用改良的神經(jīng)功能缺損評分評估大鼠的神經(jīng)功能,判斷腦缺血再灌注大鼠模型的效果及穩(wěn)定性;采用TTC染色法觀察大鼠腦梗死的體積,并鑒定該模型成功與否。2.將60只SD雄性大鼠按隨機數(shù)字表分成正常組(Control)、假手術(shù)組(Sham)、模型組(MCAO)、電針預(yù)處理組(EA+MCAO),每組15只。神經(jīng)功能缺損評分評估大鼠神經(jīng)功能;TTC染色觀察大鼠腦梗死體積并計算其百分比;HE染色觀察海馬神經(jīng)元數(shù)目和形態(tài);蛋白免疫印跡(Western Blot)檢測大鼠海馬組織TRPV1蛋白表達(dá)。3.將80只SD雄性大鼠按隨機數(shù)字表分成模型組(MCAO)、電針預(yù)處理組(EA+MCAO)、電針預(yù)處理+抑制劑組(AMG-517+EA+MCAO)、電針預(yù)處理+激動劑組(Capsicine+EA+MCAO)。神經(jīng)功能缺損評分評估大鼠神經(jīng)功能;TTC染色觀察大鼠腦梗死體積并計算其百分比;HE染色觀察海馬神經(jīng)元數(shù)目和形態(tài);ELISA法檢測大鼠海馬組織炎癥因子IL-1β、TNF-a和氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)SOD、MDA、GSH的含量。Western Blot檢測大鼠海馬TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白的表達(dá)情況。研究結(jié)果1.模型評價(1)神經(jīng)功能缺損評分顯示:Control組和Sham組大鼠神經(jīng)功能缺損評分均為0,未觀察到神經(jīng)行為學(xué)異常;MCAO組大鼠出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能損傷。(2)TTC染色發(fā)現(xiàn)MCAO組大鼠右側(cè)缺血腦組織出現(xiàn)典型白色梗死灶,與大腦中動脈支配區(qū)域相符,視交叉前后梗死灶比較穩(wěn)定。Control組及Sham組大鼠腦組織TTC染色未見明顯異常。2.電針預(yù)處理“百會”、“腎俞”及“三陰交”穴對腦缺血再灌注損傷大鼠的腦保護(hù)作用(1)神經(jīng)功能缺損評分顯示:Control組及Sham組大鼠的神經(jīng)功能缺損評分為0,未觀察到神經(jīng)行為學(xué)異常;MCAO組大鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損;與MCAO組相比,EA+MCAO組大鼠神經(jīng)功能缺損明顯減輕。(2)TTC染色結(jié)果顯示:Control組及Sham組大鼠雙側(cè)腦組織呈鮮紅色,結(jié)構(gòu)完整,層次分明,未見缺血灶;MCAO組和EA+MCAO組大鼠右側(cè)大腦中動脈供血區(qū)域,可見到邊緣呈淡紅色的白色梗死灶;與MCAO組比較,EA+MCAO組大鼠腦梗死體積明顯減小。(3)HE染色結(jié)果顯示:Control組及Sham組大鼠右側(cè)海馬CA3區(qū)神經(jīng)元排列緊密,神經(jīng)元形態(tài)完整,結(jié)構(gòu)清晰,核膜完整,核仁清晰,著色淺。MCAO組大鼠腦組織梗死中心區(qū)染色變淺,海馬神經(jīng)元細(xì)胞間隙增寬,排列紊亂,數(shù)目減少,核固縮,核膜與周圍分界不清,核仁變小,形態(tài)不規(guī)則,核染色明顯加深。與MCAO組相比,EA+MCAO組大鼠右側(cè)海馬神經(jīng)元排列較規(guī)整,結(jié)構(gòu)較完整,胞體輕中度腫脹,存活的神經(jīng)元較多。(4)Western Blot結(jié)果顯示:與Sham組相比,MCAO組大鼠右側(cè)海馬組織TRPV1蛋白表達(dá)明顯增高;與MCAO組相比,EA+MCAO組大鼠右側(cè)海馬組織TRPV1蛋白表達(dá)明顯減少。3.電針預(yù)處理抗腦缺血再灌注損傷效應(yīng)與TRPV1的關(guān)系(1)神經(jīng)功能缺損評分顯示:與MCAO組相比,EA+MCAO組大鼠神經(jīng)功能缺損評分明顯降低(P0.05);與EA+MCAO組相比,AMG-517+EA+MCAO組大鼠的神經(jīng)功能評分稍低,差異無統(tǒng)計學(xué)意義;與EA+MCAO組相比,Capsicine+EA+MCAO組大鼠的神經(jīng)功能評分明顯升高(P0.05)。(2)TTC染色結(jié)果顯示:經(jīng)MCAO造模的四組大鼠腦組織均出現(xiàn)不同程度的腦梗死(染色呈白色區(qū)域),其中MCAO組大鼠腦梗死體積最大。與MCAO組比較,EA+MCAO組大鼠的腦梗死體積明顯減少(P0.05);與EA+MCAO組比較,AMG-517+EA+MCAO組大鼠的腦梗死體積明顯減少(P0.05),而Capsicine+EA+MCAO組大鼠腦梗死體積明顯增加(P0.05)。(3)HE染色結(jié)果顯示:經(jīng)MCAO造模的四組大鼠右側(cè)海馬神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不同程度的損傷以及神經(jīng)元數(shù)目出現(xiàn)不同程度的變化。其中MCAO組腦組織大鼠海馬神經(jīng)元損傷最嚴(yán)重;與MCAO組相比,EA+MCAO組大鼠海馬神經(jīng)元的損傷減輕;與EA+MCAO組相比,AMG-517+EA+MCAO組大鼠海馬神經(jīng)元損傷明顯減輕,而Capsicine+EA+MCAO組大鼠海馬神經(jīng)元損傷明顯加重。(4)炎癥因子相關(guān)指標(biāo):與MCAO組比較,EA+MCAO組大鼠右側(cè)海馬組織TNF-a、IL-1β含量明顯減少(P0.05);與EA+MCAO組比較,AMG-517+EA+MCAO組大鼠右側(cè)海馬組織TNF-a含量減少(P0.05);與EA+MCAO組比較,Capsicine+EA+MCAO組大鼠TNF-a、IL-1β含量明顯增加(P0.05,P0.05)。(5)氧化應(yīng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo):與MCAO組比較,EA+MCAO組大鼠右側(cè)海馬組織MDA含量明顯減少(P0.05),GSH、SOD含量明顯增多(P0.01,P0.01);與EA+MCAO組比較,AMG-517+EA+MCAO組大鼠右側(cè)海馬組織MAD含量減少(P0.05),GSH、SOD含量增多(P0.05,P0.05);與EA+MCAO組比較,Capsicine+EA+MCAO組大鼠MDA含量明顯增加(P0.05),GSH、SOD含量明顯減少(P0.05,P0.05)。(6)Western blot結(jié)果顯示:與MCAO組相比,EA+MCAO組大鼠右側(cè)海馬組織TRPV1蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)、p-p38 MAPK/p38MAPK比值明顯降低(P0.05);與EA+MCAO組相比,AMG-517+EA+MCAO組大鼠右側(cè)海馬組織TRPV1蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01)、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值明顯降低(P0.05)。p-ERK/ERK及p-JNK/JNK在四組間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)論1.改良的Longa線栓法在血管內(nèi)能有效阻塞大鼠大腦中動脈,造成大腦中動脈供血區(qū)域的梗塞并能引起神經(jīng)功能障礙。模型制作可以復(fù)制且具有一定的穩(wěn)定性。2.電針預(yù)處理“百會”、“腎俞”及“三陰交”穴,可明顯降低大鼠神經(jīng)功能缺損評分,減小腦缺血再灌注大鼠腦梗死體積,減輕神經(jīng)元的損傷,發(fā)揮抗腦缺血再灌注損傷效應(yīng);同時,電針預(yù)處理可以抑制腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織TRPV1蛋白的表達(dá)。3.TRPV1參與了電針預(yù)處理抗腦缺血再灌注損傷效應(yīng)。下調(diào)TRPV1的表達(dá),抑制p38 MAPK的磷酸化,減輕氧化應(yīng)激損傷,降低炎癥反應(yīng),可能是電針預(yù)處理抗腦缺血再灌注損傷的作用機制之一。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245
【圖文】：

大鼠行為學(xué)展示圖

大鼠腦組織TTC染色大體形態(tài)圖

大鼠電針展示圖

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