【摘要】：第一部分電針刺激曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位能夠抑制缺血性腦卒中后神經(jīng)細(xì)胞凋亡目的:探究在曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位的電針治療是否減少缺血性腦卒中后的神經(jīng)細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。方法:72只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(sham)、大腦中動脈梗阻再灌注組(MCAO)、電針組(EA)。電針治療部位是大鼠右側(cè)患肢的曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位,在大腦中動脈梗阻24h后開始,每日1次,連續(xù)3天。缺血再灌注72h后進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評估,隨后每組各取6只大鼠進(jìn)行TTC染色評估腦梗死體積,每組各取6只大鼠進(jìn)行TUNEL染色來比較每組TUNEL陽性細(xì)胞百分比,每組各取6只大鼠用于western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3,Cleaved caspase-3,Bim,Bcl-2的表達(dá),其余大鼠用于免疫組化檢測分析Caspase-3,Bim,Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果:缺血再灌注72h后,MCAO組神經(jīng)功能缺損評分明顯高于sham組(P0.01),而EA組神經(jīng)功能缺損程度低于MCAO組(P0.05)。假手術(shù)組大鼠無腦梗死體積。而MCAO組大鼠腦梗死體積明顯高于EA組(P0.05)。MCAO組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)量百分比明顯高于sham組(P0.01)。EA組較MCAO組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)量百分比明顯減少(P0.01)。western blot檢測結(jié)果表明,MCAO組的caspase-3(P0.05)、cleaved-caspase-3(P0.01)、Bim(P0.01)表達(dá)量高于sham組,Bcl-2(P0.01)表達(dá)量低于sham組;而EA組caspase-3(P0.05)、cleaved-caspase-3(P0.01)、Bim(P0.01)表達(dá)水平低于MCAO組,Bcl-2表達(dá)高于MCAO組(P0.05)。免疫組化檢測結(jié)果表明,電針治療顯著抑制了缺血性腦損傷導(dǎo)致的大腦皮層caspase-3、cleaved-caspase-3、Bim的陽性細(xì)胞數(shù)量的升高,逆轉(zhuǎn)了缺血性腦損傷所致Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)量的下調(diào)(P0.01)。結(jié)論:電針刺激曲池(LI11)和足三里(ST36)這兩個(gè)穴位能夠降低I/R大鼠的神經(jīng)功能缺損評分,減少腦梗阻面積和大腦皮層細(xì)胞的凋亡。說明電針能夠抑制缺血性腦卒中后的神經(jīng)細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。第二部分電針刺激曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位能夠調(diào)節(jié)PTEN,ERK信號通路目的:探究以曲池(LI11)和足三里(ST36)為刺激穴位的電針治療是否能通過PTEN,ERK信號通路和Midkine(MK)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。方法:36只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(sham)、大腦中動脈梗阻再灌注組(MCAO)、電針組(EA)。電針治療部位是右側(cè)患肢的曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位,在大腦中動脈梗阻24h后開始,每日1次,連續(xù)3天。局部腦缺血再灌注72h后每組各取6只大鼠用于western blot檢測p-PTEN,p-PDK1,p-GSK-3β,Thr308,Ser473,tAkt,MK,p-ERK1/2,p-JNK,p-P38,ERK1/2,JNK,P38蛋白的表達(dá);每組各選6只大鼠用于免疫組化檢測MK的表達(dá)。結(jié)果:MCAO組p-PTEN、Ser473表達(dá)水平較sham組顯著增加,而Thr308、p-PDK1和p-GSK-3β水平較sham組顯著降低(P0.01)。然而,在EA組與MCAO組相比,p-PTEN、Ser473的表達(dá)水平明顯降低(P0.01),p-PDK1、p-GSK-3β、Thr308的表達(dá)水平明顯增高(P0.01)。t-Akt蛋白水平在三組之間無明顯差異(P0.05)。MCAO組p-ERK1/2、p-P38、p-JNK的蛋白表達(dá)量較Sham組明顯升高(P0.01)。而EA組的p-ERK1/2(P0.01)、p-JNK(P0.05)、p-P38(P0.05)的表達(dá)高于MCAO組。三組間ERK1/2、JNK、P38表達(dá)無差異(p0.5)。western blot和免疫組化分析顯示,三組間MK表達(dá)水平存在顯著差異。MCAO組(P0.01)和EA組(P0.01)MK的表達(dá)均較sham組明顯升高。EA組大鼠MK水平明顯高于MCAO組(P0.01)。結(jié)論:大鼠腦缺血再灌注損傷后,電針刺激曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位可通過影響PTEN和ERK信號通路及MK的表達(dá),從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245.97
【圖文】：

Fig .1 EA decreases neurological behavioral scores. A: Neurological deficassessment at 2 h after I/R injury；B: Neurological deficits assessment at 72after I/R injury (n = 6 rats/group).There was no significant difference neurological scores between the MCAO group and EA group at 2 h followinI/R surgery (P>0.05), as shown in Fig 1A. However, the neurological deficiof the rats in the EA group were significantly decreased at 72 h after I/R inju(P<0.05) as shown in Fig 1B. ** P< 0.01 vs the sham group; #P<0.05 vs thMCAO group.2. 電針治療減少局部腦缺血的梗阻體積:在 I/R 損傷 72 小時(shí)后進(jìn)行梗死體積評估。如圖 2 所示，Sham 組大鼠腦組織無缺血區(qū)域，但 EA 組與 MCAO 組之間腦梗死體積有顯著差異。MCAO 組大鼠梗死體積明顯高于 EA 組(P<0.05)。說明電針可以減少腦梗死體積，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。Sham MCAO EA

3. 電針治療可減輕腦缺血大鼠的神經(jīng)細(xì)胞凋亡為了研究電針干預(yù)對細(xì)胞凋亡的影響，我們采用 TUNEL 染色來評估凋亡細(xì)胞的數(shù)量。如圖 3 所示,與 Sham 組相比，MCAO 組 72h 后凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯升高(P<0.01)。與 MCAO 組相比，電針干預(yù)降低了凋亡細(xì)胞數(shù)量(P<0.01)。說明電針治療可以抑制細(xì)胞凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。MCAOSham

為進(jìn)一步探討電針的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制，采用免疫組織化學(xué)染色檢測亡相關(guān)蛋白 caspase-3，Bim，Bcl-2 的表達(dá)，采用 western blot 技術(shù)檢測aspase-3、cleaved-caspase-3、Bim、Bcl-2 的蛋白表達(dá)。如圖 4 所示，足里和曲池穴的電針治療明顯減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡。電針治療顯著降低了缺性卒中引起的 caspase-3（P<0.05）、cleaved-caspase-3（P<0.01）和 BimP<0.01）的上調(diào)，逆轉(zhuǎn)了 Bcl-2（P<0.05）的下調(diào)。如圖 5 所示，與 Sham相比，MCAO 組缺血的大腦皮層 caspase-3、Bim 陽性細(xì)胞比例增加，cl-2 陽性細(xì)胞比例減少（P<0.01）；而 EA 組大腦皮層 caspase-3 和 Bim性細(xì)胞數(shù)量減少，Bcl-2 陽性細(xì)胞數(shù)量增加（P<0.01），上述結(jié)果表明針治療能夠通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)來抑制缺血性腦卒中后神經(jīng)胞凋亡。Sham MCAO EA

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本文編號：2776054