【摘要】：背景/目的近幾十年來,大量臨床調(diào)查和實驗研究都論證了電針和中藥廣泛地應用于各種損傷和疾病引起的疼痛的治療。有大量的研究結果顯示,電針可以產(chǎn)生內(nèi)源性的阿片肽,某些炎癥雖然參與了電針鎮(zhèn)痛,但是認為外周和中樞阿片受體是其發(fā)揮作用的主要靶點,并且以嗎啡為代表的μ阿片類藥物可引起大腦不同區(qū)域μ阿片類受體及其剪切異構體的改變。本實驗采用了野生型C57BL/6小鼠(WT)及同品系μ阿片類受體基因敲除小鼠(mE7b),專注于研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)特定區(qū)域的μ阿片類受體及其剪切異構體,嘗試尋找電針及中藥與OPRM1的聯(lián)系,旨在探索電針和中藥鎮(zhèn)痛的效力和機制。方法電針治療疼痛的方案很多,通過對此類文獻的統(tǒng)計分析,確定選穴以及具體的實驗操作細節(jié),比如不銹鋼針的規(guī)格、電針儀的頻率、針刺的深度、電流的強度及刺激的時間等等;同時,傳統(tǒng)中藥材中具有鎮(zhèn)痛效應的很多,包括元胡(延胡索)、白芷、蟾酥等等,根據(jù)作用機制的不同,本研究選取了主要作用于μ阿片類受體的多甲氧基黃酮類(提取于柑橘屬的藥材)藥物來進行實驗。首先,我們建立了小鼠的疼痛模型,在模型建立成功后,予以電針刺激及藥物治療,檢測其疼痛行為學的改變,記錄并分析數(shù)據(jù),觀察同樣條件下WT和mE7b小鼠之間的差異;其次,通過qPCR觀察電針及藥物對于小鼠不同腦部區(qū)域μ阿片類受體基因的mRNA表達的影響;在確定了電針及藥物是通過阿片類受體發(fā)揮作用后,對WT小鼠進行局部(外周)或腦室(中樞)注射β-FNA,一種μ阿片類受體拮抗劑,隨后再予以電針刺激和藥物治療,比較外周和中樞使用β-FNA的行為學差異,探索電針和中藥鎮(zhèn)痛的主要靶點;最后再通過Western Blot和免疫組化技術分析應用電針和中藥治療后疼痛的下游分子指標ERK1/2和c-Fos的變化。結果1.電針和多甲氧基黃酮可以改善福爾馬林誘導的急性疼痛,尤其是第二相痛,同時也可改善CFA誘導的疼痛模型鼠在24h內(nèi)對熱刺激和機械刺激的反應;2.在腦室注射了β-FNA后,電針的鎮(zhèn)痛效果顯著降低,而局部注射β-FNA則影響不大,僅在4h這個時間點鎮(zhèn)痛效果出現(xiàn)降低;與此不同的是,腦室注射β-FNA可顯著降低多甲氧基黃酮的鎮(zhèn)痛效果,而局部注射β-FNA則對多甲氧基黃酮的鎮(zhèn)痛效果完全無影響;3.電針和多甲氧基黃酮可調(diào)控疼痛相關腦區(qū)OPRM1的表達,尤其是電針更顯著;4.CFA誘導的疼痛模型鼠腦部區(qū)域p-ERK的表達顯著上調(diào),電針治療可以使WT小鼠ERK的磷酸化水平降低,接近正常水平;對于mE7b小鼠,電針降低了THA區(qū)域的磷酸化水平而對RVM區(qū)域無影響;與此同時,CFA誘導的疼痛模型鼠腦部區(qū)域c-Fos的表達也顯著上升,在WT小鼠,電針治療可降低這一效果,除了THA區(qū)域,而對于mE7b小鼠,電針僅可降低RVM區(qū)域c-Fos的表達;5.與電針不同,多甲氧基黃酮雖能降低WT小鼠ERK的磷酸化水平,但是并不能降低mE7b小鼠ERK的磷酸化水平;與此同時,多甲氧基黃酮也不能降低mE7b小鼠腦部區(qū)域c-Fos的表達。結論1.電針和多甲氧基黃酮均可降低福爾馬林誘導的二相痛和CFA誘導的持續(xù)性疼痛,而在μ-opioid受體基因敲除后,鎮(zhèn)痛作用都有所下降,在多甲氧基黃酮治療組這一效應更明顯;2.電針主要通過中樞μ阿片類受體發(fā)揮作用而多甲氧基黃酮則完全通過中樞μ阿片類受體發(fā)揮作用;3.已知電針可以通過產(chǎn)生內(nèi)源性阿片肽發(fā)揮作用,我們的結果表明,電針對于OPRM1基因及其剪切異構體mRNA表達水平的調(diào)節(jié)也參與了電針的鎮(zhèn)痛過程,而多甲氧基黃酮則是作為一種阿片類藥物發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用,對OPRM1并無影響;4.ERK的磷酸化水平和c-Fos的表達水平在CFA誘導的疼痛模型鼠的腦部區(qū)域中顯著上調(diào),說明這兩個指標的上調(diào)能代表小鼠處于疼痛狀態(tài),而電針和多甲氧基黃酮對于p-ERK和c-Fos的下調(diào)可出現(xiàn)在大多數(shù)WT小鼠的腦部區(qū)域,而對于mE7b小鼠則無此效果,說明電針和多甲氧基黃酮可通過降低ERK的磷酸化水平和c-Fos的表達水平來發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用,這一過程需要μ-opioid的參與。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R245
【圖文】：

逑使用的還是Ｍ阿片類受體。逡逑圖１－３顯示了阿片受體家族的分類。逡逑Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｉｈｃ邋ｏｐｉｏｉｄ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ邋ｆａｍｉｌｉｅｓ逡逑Ｒｅｃｅｐｔｏｒ邐Ｄｒｕｇｓ邐Ａｎａｌｇｅｓｉａ邋Ｐｈｙｓｉｃａｌ邋ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ邋Ｄｙｓｐｈｏｒｉａ邋Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒ）邋Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ邐Ｃｉｅｎｃ逡逑Ｍｕ邐Ｍｏｒｐｈｉｎｅ邐Ｙｅｓ邐Ｙｅｓ邐Ｎｏ邐Ｙｅｓ邐ＭＯＲ－１逡逑Ｋａｐｐａ邋Ｋａｐｐａ邋｜邋Ｄｖｎｏｒｐｈｉｎ邋Ａ邐Ｙｅｓ邐Ｎｏ邐Ｙｅｓ邐Ｎｏ邐ＫＯＲ－ｌ逡逑Ｕ５０．４８８Ｈ逡逑Ｋａｐｐａ＾邐Ｅｔｈｙｌｋｅｔｏｃｙｃｌａ／ｉＫｉｎｃ邐Ｙｅｓ邐Ｎｏ邐Ｙｅｓ邐Ｎｏ邐ＫＯＲ－ｌ邋ＤＯＲ－１逡逑Ｋａｐｐａ；邐Ｎａｌｏｘｏｎｅ邐Ｙｅｓ邐Ｎｏ邐Ｎｏ邐Ｎｏ邐Ｓｅｅ邋ｂｅｌｏｗ逡逑Ｂｅｎｚｏｙｌｈｙｄｒａ／ｏｎｅ逡逑Ｉ．ｃｖｏｒｐｈａｎｏｌ逡逑Ｄｅｌｔａ邐ｔｎｋｅｐｈａｌｉｎ邐Ｙｅｓ邐Ｎｏ邐？邐Ｎｏ邐ＩＫ）Ｒ－Ｉ逡逑ＤＰＤＰＥ逡逑圖１－３阿片受休家族的分類逡逑第一個猜想大約在二十世紀七十年代（１９７５年）被提出來，即卩阿片類受體不止一逡逑個家族，這大約是ｐｉ、｜ｎ２被提及后最有說服力的？個分類（提出者為Ｇａｖｒｉｌ邋Ｗ．邋Ｐａｓｔｅｒｎａｋ，逡逑為美國紀念斯隆凱特林癌癥中心阿片受休領域最具影響力的人物，于２０１９年年初在美國逡逑逝世，謹以詞句紀念ＧＷ在阿片領域做出的巨大貢獻和表達本實驗室能夠與斯隆進行課逡逑題合作的幸運之意）１｜５４１。該觀點指出盡管阿片類藥物譬如嗎啡與其有高度的親和力，確逡逑定其為阿片類受體

邐ｊｆｉ；逡逑ｈＭＯＲ邋ＩＫ逡逑圖１－５和圖１－６顯示了對于不同品系和性別小鼠腦部岡域ＭＯＲｓ表達量的研究。逡逑■邋ＳＷＲ．Ｗ８逡逑１Ｗ逡逑ＳＷ？邋ＰＡＧ逡逑Ｂ？邋Ｈｙｐ逡逑６６邋ＢＳ逡逑ＳＷＲ邋Ｔｈ？逡逑ＳＷＲ邋Ｓｋ逡逑ＳＡ逡逑ＳＡ邋Ｔｈ？逡逑１２９邋ＢＳ逡逑ＳＯＬ邋ＰＡＧ逡逑１２９邋Ｐ４０逡逑Ｂ６邋Ｓｐｃ逡逑１２？邋Ｓ0ｔ逡逑１２９邋ＷＢ逡逑８６邋Ｓｉｒ逡逑ｆ？邋ｈ＊逡逑１？邋？ｃ逡逑ＳＪＬ邋ＷＢ逡逑ｓｗ？＿ｃｔ＞逡逑ＳＷＲ邋Ｐｆｃ逡逑ＳＪＬＳｈ逡逑ａｅ邋ｔｖｓ逡逑ＳＷＲ邋Ｈ？）逡逑ＳＪｌ邋ＢＳ逡逑認？逡逑ＳＪｌ邋Ｓｅｃ逡逑ＳＷ？邋ＢＳ逡逑Ｂ６邋Ｔｈａ逡逑ｉｎ邋Ｔｈ？逡逑１２９邋Ｓｆｔ逡逑ＳＷＨ邋Ｍｙｐ逡逑５ＷＨ邋８ｐｃ逡逑Ｍ邋Ｍ0逡逑＆Ａ邋Ｃｂ逡逑ＳＪｌ邋Ｐｆｃ逡逑ｌ？邋Ｃｂ逡逑Ｂ０邋Ｃ？逡逑Ｂ６邋Ｐｆｃ逡逑￣５５５２？Ｓ＾２Ｓ＾ｉｆ＾＾＜？？ｔ：ｌ５＾Ｓ？ａ＾ｅ２５？＾逡逑￥＂邋＂邋＂邋＂邋＂邋ｉ邋ｈ邋ｉ＂邋＂邋ｉ邋ｎ邋ｍ邋ｍ！逡逑Ｚ－Ｓｃ0ｒｅ逡逑圖１邋－５四種品系鼠ＭＯＲｓ的表達逡逑２３逡逑

圖２－１電針對于福爾馬林誘導的ＷＴ和ｍＥ７ｂ小鼠二相痛的影響逡逑３．２電針對？熱盤實驗中完全弗氏佐劑（ＣＦＡ）誘導的疼痛模型的影響逡逑ＣＦＡ足底注射誘導的疼痛穩(wěn)定持續(xù)約？周至兩周左右，起效時間在注射后４小時，福爾馬林誘導的二相痛和間歇期不同，造模之后產(chǎn)生疼痛且對熱刺激產(chǎn)生較穩(wěn)定的痛敏，因此我們利用熱盤實驗觀察了電針刺激后２４小時內(nèi)的治療效果。由于預實驗表ＷＴ和ｍＥ７ｂ小鼠在足底注射ＣＦＡ后對熱刺激的反應沒有差異，我們用ｂａｓｅｌｉｎｅ代表和ｍＥ７ｂ小鼠在造模之后對熱刺激的閾值（約為１５．７ｓ左右出現(xiàn)抬腿或者舔足等疼痛反應）。統(tǒng)計結果如下：逡逑電針治療后２小時，在ＷＴ和ｍＥ７ｂ小鼠均能產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果，且兩者的治療效果在統(tǒng)計學差異，平均ＭＰＥ值分別為２４．８２３％邋（ｍＥ７ｂ＋ＥＡ）和２６．２１５％邋（ＷＴ＋ＥＡ）；逡逑電針治療后４小時，ＷＴ＋ＥＡ組表現(xiàn)出更為明顯的鎮(zhèn)痛效果，ＭＰＥ＝４２．７０８±８．３９８為所有數(shù)據(jù)中治療效果最佳的ｔｉｍｉｎｇ點，與ｂａｓｅｌｉｎｅ相比，Ｐ＜０．０１，＊＊，ｆｆｔｉ在ｍＥ７ｂ＋組，ＭＰＥ＝１８．０８５±４．７８％，雖然與ｂａｓｅｌｉｎｅ相比仍然具有鎮(zhèn)痛效果，侃是４ＷＴ＋ＥＡ組，Ｐ＜0．0５，邋＃

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本文編號：2757129