【摘要】：目的:利用網(wǎng)絡藥理學分析預測千金文武湯(QWD)治療糖尿病腎病(DN)的靶點和主要成分,初步揭示QWD干預DN的作用機制;建立QWD體內(nèi)外化學成分的HPLC-ESI/MS方法,對QWD體外供試品溶液和給藥后大鼠血漿中的化學成分進行鑒定分析。方法:1.通過中藥綜合數(shù)據(jù)庫和文獻獲取QWD的全部化學成分;使用中藥分子機制生物信息學分析工具、STITCH數(shù)據(jù)庫和SwissTargetPrediction網(wǎng)站服務器根據(jù)三維化學空間結(jié)構(gòu)相似性預測潛在作用靶點。2.通過DrugBank、人類在線孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫、TCMGeneDIT數(shù)據(jù)庫等9個資源平臺收集DN相關靶點;將疾病靶點與藥物靶點進行映射,得出QWD干預DN的潛在作用靶點。3.采用Cytoscape軟件回溯靶向藥效靶點的化學成分和組方藥味。4.利用Cytoscape對QWD治療DN的全部藥效作用靶蛋白進行功能注釋、富集分析,初步揭示QWD干預DN的作用機制。5.制備同一制備工藝、統(tǒng)一質(zhì)量標準的10批次QWD樣品,作為標準樣品。甲醇超聲萃取標準樣品,得供試品溶液。6.在網(wǎng)絡藥理學分析的基礎上,選擇43個標準品作為QWD化學成分定性的比對化合物。利用LC-MS技術對QWD供試品溶液進行成分指認。選擇C18反相色譜柱,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液作流動相,梯度洗脫進行組分分離;聯(lián)用電噴霧離子化質(zhì)譜(ESI-MS)在正離子模式下進行全掃描。圖譜分析采用提取離子色譜法,首先指認混合標準品溶液中的比對化合物,再以此為參照對QWD供試品溶液中的部分化合物進行初步定性。7.大鼠灌胃QWD標準樣品后取血漿,采用相同的液質(zhì)儀器在相同的分析條件下分別檢測空白血漿和含藥血漿,并與QWD體外供試品溶液液質(zhì)圖譜比較,初步鑒定QWD在大鼠血漿中移行的原型成分。結(jié)果:1.收集出QWD的化學成分533個,聚類后歸為5類:黃酮類、苯丙素類、三萜類、甾體及其苷類和有機酸類;533個化學成分靶向2279個潛在靶點。2.QWD的全部潛在靶點中有64個靶點參與治療DN。3.組方藥味葛根中的21個成分為藥效成分,這21個藥效成分靶向23個藥效靶點,黃芩57個藥效成分靶向41個藥效靶點,藁本10個藥效成分靶向11個治療靶點,山藥16個藥效成分靶向21個治療靶點,五味子82個藥效成分靶向45個治療靶點,桔梗29個藥效成分靶向11個治療靶點,升麻12個藥效成分靶向17個治療靶點,白芷48個藥效成分靶向42個治療靶點,麥冬28個藥效成分靶向20個治療靶點。4.功能分析結(jié)果顯示,分子功能層面顯示QWD可通過轉(zhuǎn)運蛋白、激素、蛋白激酶、蛋白激酶激活劑、磷脂酶C、細胞因子、銅離子、受體等分子發(fā)揮治療DN作用;細胞組件層面顯示藥效靶點主要定位于血小板α顆粒和小窩;生物學過程層面揭示QWD主要通過糾正糖脂代謝紊亂、介導免疫炎癥反應、改善血液循環(huán)系統(tǒng)、腎形態(tài)修復及再發(fā)育、調(diào)節(jié)水鹽、血鈣水平穩(wěn)態(tài)、細胞凋亡、逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗、調(diào)節(jié)活性氧代謝等多個過程發(fā)揮藥效的;信號通路層面表明QWD通過復雜的多條通路,從合成、增殖、分化、轉(zhuǎn)運、代謝、應答、免疫、分泌、凋亡、活化、遷移等多個方面對上皮細胞、間充質(zhì)細胞、白細胞、細胞因子、胰島細胞、平滑肌細胞、成纖維細胞等產(chǎn)生調(diào)控作用。介導的通路主要包括糖尿病并發(fā)癥AGE-RAGE信號通路、Ⅱ型糖尿病、HIF-1信號通路、胰島素抵抗、FoxO信號通路、流體剪切應力和動脈粥樣硬化、MAPK信號通路等。5.制備的10批次QWD標準樣品,在HPLC圖譜中具有相似的特征峰,表明其主要化學成分穩(wěn)定、一致。6.QWD體外供試品溶液中指認出了 13個化學成分,分別為葛根素、阿魏酸、異阿魏酸、黃芩苷、桔梗皂苷D、大豆苷元、漢黃芩苷、佛手柑內(nèi)酯、漢黃芩素、五味子醇甲、千層紙素A、歐前胡素和五味子乙素。7.QWD體內(nèi)供試品溶液中指認出了 9個原型成分,包括葛根素、異阿魏酸、黃芩苷、大豆苷元、漢黃芩苷、漢黃芩素、千層紙素A、歐前胡素和五味子乙素。結(jié)論:1.通過網(wǎng)絡分析發(fā)現(xiàn)白芷、五味子、黃芩在QWD的藥味中治療靶點明確,發(fā)揮抗DN作用途徑廣泛,可以視為方劑的主要藥物;山藥、葛根、麥冬、升麻的藥效作用涵蓋范圍也較廣泛,可以視為復方中的輔助藥物;桔梗和藁本靶向的靶點和涉及的生物過程最少,主要起協(xié)同促進作用,可以視為復方中的協(xié)同藥物。2.研究表明,運用網(wǎng)絡藥理學方法能初步闡明QWD治療DN的作用機制;網(wǎng)絡分析結(jié)果中的化學成分、抗DN的藥效成分為QWD物質(zhì)基礎研究提供了一定指導;64個抗DN的潛在藥效靶點為進一步開展機理研究提供了理論和實驗依據(jù)。3.化學物質(zhì)組研究建立了 QWD體內(nèi)外成分鑒定的HPLC-ESI-MS分析方法。血中移行成分為QWD在體內(nèi)直接發(fā)揮作用的藥效成分,該結(jié)果為QWD的藥效物質(zhì)基礎和作用機理研究奠定了理論和實驗基礎。
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R29
【圖文】：

就目前來說“消渴腎病”是最為合理的糖尿病腎病的中醫(yī)病名，也可逡逑視“消渴腎病”為中醫(yī)、西醫(yī)病名相通過程的產(chǎn)物。逡逑綜上，筆者歸納總結(jié)如下圖１所示。簡而言之，消渴腎病是消渴逡逑發(fā)展到中后期的并發(fā)癥，糖尿病腎病是糖尿病后期發(fā)展的嚴重結(jié)果，逡逑消渴腎病等同于糖尿病腎病。逡逑中醫(yī)古籍病名邐現(xiàn)代醫(yī)學病名逡逑１．邋—ｉ邐—邐＂邋邋邋邋邋——逡逑—邐消渴邐Ｊ４邐糖尿病邐�。义喜∏榘l(fā)展ｊ邐：逡逑■￣一邐腎消邐１，一逡逑ｉ邐１邋ｚＺ逡逑Ｖ－邐內(nèi)消邐＜逡逑；Ｌ：：．．：：：：：：：：：：：．＝＝：：：：：．．．逡逑ｒｐ＝＝＝＝＝＝＝ｎ邐，邐Ｚ逡逑ｍｉ逡逑１邋ｆｉ邐—．邐Ｈ邋，，逡逑ｓ—｜邐下消邐卜逡逑圖１關系圖逡逑２．研究背景逡逑糖尿病腎�。ǎ模椋幔猓澹簦椋沐澹危澹穑瑁颍铮穑幔簦瑁澹模危┦翘悄虿』颊咧凶畛Ｒ婂义锨覈乐氐倪h期合并癥之一，１型和２型糖尿病均有一定概率并發(fā)ＤＮ，逡逑最終發(fā)展為彌散性或結(jié)節(jié)性腎小球硬化和腎功能衰竭。ＤＮ在我國的發(fā)逡逑病率呈快速增長趨勢，己成為慢性腎功能衰竭的主要原因之一。由于逡逑２逡逑

含的全部化合物主要分為５類：黃酮類、苯丙素類、三萜類、留體及逡逑其苷類和有機酸類，盡管復方中的成分數(shù)量龐雜，但大部分具有相似逡逑的化學母核結(jié)構(gòu)，可歸屬于特定的化合物家族，見圖１．２。逡逑９逡逑

數(shù)據(jù)庫的預測靶點信息，共獲得２２７９個靶點，詳細信息見附錄Ｂ。利逡逑用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ構(gòu)建藥材－化合物－祀點作用網(wǎng)絡如附錄Ｃ－Ｅ所示。通過逡逑ＴＢｔｏｏｌｓ構(gòu)建的ＵｐＳｅｔ邋Ｐｌｏｔ結(jié)果顯示（圖１．３）在全部預測靶點中，有逡逑４６個靶點是９味藥材共有的靶點（圖中縱向柱狀圖的綠色柱），值得逡逑注意的是，五味子、白芷兩藥材共同擁有的靶點數(shù)目最多，１７０個（縱逡逑向柱狀圖第一條黑柱，最高，其下方黃色點－線連接顯示為五味子－白逡逑芷），預示著兩藥材可能具有某些相同的藥理作用，若兩藥材被應用于逡逑同一復方中，如本研宄中的朝醫(yī)方ＱＷＤ，提示兩藥材在藥理功效上的逡逑協(xié)同促進作用之大。根據(jù)圖１．３發(fā)現(xiàn)，每種藥材均與其他藥材共享了逡逑數(shù)目較多的靶點（點線連接部分中的單獨黑色圓點均出現(xiàn)在較前方），逡逑藁本除外（見圖中紅色圓點

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 皮子鳳;門麗慧;張靜;周園;宋鳳瑞;劉志強;;五味子治療大鼠糖尿病腎病作用機制的血清代謝組學研究[J];分析化學;2015年02期

2 譚春瓊;;山藥多糖對大鼠糖尿病腎病的治療作用[J];中國應用生理學雜志;2014年05期

3 盧煥俊;金元哲;許青松;;千金文武湯對糖尿病腎病大鼠血糖和腎功能的影響[J];山東醫(yī)藥;2014年33期

4 李惠秀;曹文富;;糖尿病腎病發(fā)病機制及治療進展[J];重慶醫(yī)學;2013年21期

5 吳偉;朱章志;李紅;耿華;;葛根素治療早期2型糖尿病腎病的Meta分析[J];中成藥;2013年07期

6 陳美娟;金嘉寧;蔣層層;趙玉榮;席蓓麗;張春舉;吳慧平;王明艷;詹tg;張旭;;桔梗有效部位對糖尿病大鼠微血管病變干預作用研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學學報;2013年02期

7 陸小元;;麥冬多糖對2型糖尿病大鼠腎臟的保護作用[J];實用臨床醫(yī)藥雜志;2012年24期

8 李敏州;高彥彬;馬鳴飛;朱智耀;鄒大威;李勤;;糖尿病腎病發(fā)病機制研究進展[J];中國實驗方劑學雜志;2012年22期

9 安麗萍;王英平;劉曉梅;王春梅;詹巾卓;孫匯;李娜;王拓;杜培革;孫志偉;;五味子油對鏈脲佐菌素誘導的2型糖尿病大鼠的影響[J];中草藥;2012年03期

10 李根培;;《東醫(yī)四象新編》作者考證[J];中國民族醫(yī)藥雜志;2012年02期

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1 吉鴻飛;PINK1介導的線粒體自噬在糖尿病小鼠足細胞氧化應激損傷中的作用及機制研究[D];鄭州大學;2017年

2 徐麗紅;溶血磷脂酸對結(jié)腸炎小鼠腸道離子轉(zhuǎn)運體SLC26A3表達的影響及機制分析[D];華中科技大學;2014年

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1 陳俊莉;阿魏酸通過誘導線粒體自噬保護糖氧剝奪引起的內(nèi)皮細胞損傷[D];廣州中醫(yī)藥大學;2016年

2 華燕青;藁本中活性成分的初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2004年

本文編號：2756166