【摘要】：焦慮癥(Anxiety disorder,AD)分為慢性焦慮即廣泛性焦慮(Generalized Anxiety Disorder,GAD)與急性焦慮,以焦慮情緒體驗為主要特征。隨著社會經(jīng)濟的高速發(fā)展,人們面臨的問題逐漸增多,心理壓力負擔加重,從而使得焦慮癥的發(fā)病率逐漸呈上升趨勢,腸道系統(tǒng)作為人的“第二大腦”,參與人體多種生理活動,已有實驗證明腸道菌群與焦慮存在一些聯(lián)系,然而關于焦慮到底會引起腸道菌群如何變化的研究甚少,又因針刺在抗焦慮方面有著獨特的優(yōu)勢,故本實驗選擇用慢性束縛應激法制備小鼠焦慮模型,采用針刺療法,對焦慮模型小鼠的腸道菌群會產(chǎn)生的變化及針刺對焦慮模型小鼠腸道菌群的影響進行初探。目的通過研究針刺對焦慮模型小鼠行為學及腸道菌群結(jié)構與多樣性的影響,探索針刺的抗焦慮效果及其對焦慮模型小鼠腸道菌群的調(diào)控作用。方法SPF級雄性C57BL6小鼠24只,適應性飼養(yǎng)一周后,按隨機數(shù)字表法,分為四組-空白組、模型組、調(diào)神組、疏肝組,每組6只。采用慢性束縛應激法制備焦慮模型;調(diào)神組以每日針百會、印堂1次,留針1Omin,連續(xù)7日;疏肝組以每日針雙側(cè)合谷、太沖1次,留針10min,連續(xù)7日;第8日測黑白箱;第9日測高架十字迷宮;通過行為學測試記錄小鼠在白箱中停留時間,進入開放臂次數(shù)占比(0E%)及開放臂停留時間(0T);用16S rDNA V3+V4區(qū)域高通量測序技術分析小鼠腸道菌群結(jié)構和多樣性的變化情況。結(jié)果(1)白箱停留時間:與空白組相比,模型組小鼠在白箱停留時間縮短(P0.05);與模型組相比,調(diào)神組與疏肝組在白箱停留時間明顯延長(p0.01);調(diào)神組與疏肝組相比,兩組小鼠在白箱停留時間無統(tǒng)計學差異(p0.05)。(2)開放臂進入次數(shù)占比(0E%)與開放臂停留時間(0T):與空白組相比,模型組小鼠進入開放臂次數(shù)減少,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),在開放臂停留時間明顯縮短(p0.05);與模型組相比,調(diào)神組小鼠進入開臂次數(shù)占比顯著增多(p0.05),小鼠在開放臂停留時間明顯延長(P0.01);與模型組相比,疏肝組小鼠進入開臂次數(shù)增多,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),小鼠在開放臂停留時間延長(P0.01)。(3)群落結(jié)構組成分析:小鼠腸道菌群以擬桿菌門、厚壁菌門為主要組成,與空白組小鼠相比,在門水平上,模型組小鼠擬桿菌門占比降低,厚壁菌門占比升高,在屬水平上,模型組小鼠毛螺菌科未確定菌屬、擬桿菌屬、瘤胃菌科屬、另枝菌屬、羅氏菌屬所占比例升高,乳桿菌屬、擬普雷沃菌屬、Candidatus_Saccharimonas所占比例降低;與模型組小鼠相比,在門水平上,調(diào)神組與疏肝組使擬桿菌占比提升,厚壁菌占比降低,在屬水平上,調(diào)神組毛螺菌科未確定菌屬、擬桿菌屬、擬普雷沃菌屬所占比例降低,乳桿菌屬、另枝菌屬、羅氏菌屬、Candidatus_Saccharimonas所占比例升高,疏肝組毛螺菌科未確定菌屬、瘤胃菌科、擬普雷沃菌屬所占比例降低,擬桿菌屬、另枝菌屬、羅氏菌屬所占比例升高;LEfSe分析(LDA閾值為4)顯示,與空白組相比,模型組Muribaculaceae、理研菌科、瘤胃菌科顯著富集,差異明顯,空白組,模型組與調(diào)神組與疏肝組分別比較,皆顯示只在模型組中理研菌科顯著富集,存在差異。(4)alpha多樣性分析:alpha多樣性分析表明,模型組小鼠較空白組小鼠observed-species指數(shù)及shannon指數(shù)均升高(p0.05),在observed-species指數(shù)上,與模型組相比,調(diào)神組有一定程度升高(p0.05),疏肝組較模型組升高明顯(p0.05),在shannon指數(shù)上,與模型組相比,調(diào)神組及疏肝組皆有一定程度升高(p0.05)。(5)β多樣性分析:基于Unweighted Unifrac距離PCoA分析,模型組及針刺組各樣本在平面圖的分布區(qū)域與空白組明顯不同,相互距離較遠,分界清楚,而針刺組與模型組所處區(qū)域有重疊,組間距離較近,調(diào)神組與疏肝組較模型組距離比空白組更接近。結(jié)論(1)針刺可有效改善焦慮模型小鼠焦慮樣行為。(2)焦慮小鼠會產(chǎn)生腸道菌群結(jié)構紊亂及菌群多樣性增加,針刺干預小鼠能夠使小鼠紊亂的腸道菌群水平回調(diào),且小鼠腸道內(nèi)益生菌數(shù)量及菌群多樣性增加。綜上所述,針刺可能通過增加焦慮小鼠腸道內(nèi)益生菌數(shù)量及菌群多樣性,使差異菌群水平回調(diào)來緩解焦慮樣行為。
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R245;R-332
【圖文】：

氋架十字迷宮行為學中各組小鼠表現(xiàn)逡逑．１各組小鼠進入開放臂次數(shù)占比逡逑與空白組相比，模型組小鼠進入開放臂的次數(shù)占比有減少趨勢，但無統(tǒng)計學差異逡逑（ｐ＞邋０．０５）；與模型組相比，調(diào)神組與疏肝組小鼠進入開放臂次數(shù)占比皆增多，其中逡逑神組小鼠進入次數(shù)占比增長趨勢明顯（Ｐ＜邋０．０５），疏肝組小鼠與模型組小鼠相比，逡逑異無統(tǒng)計學意義（Ｐ＞邋０．０５）；與調(diào)神組相比，疏肝組小鼠進入開放臂次數(shù)無明顯差逡逑，差異無統(tǒng)計學意義（Ｐ＞邋０．０５）。見表３、圖２逡逑表３各組小鼠進入開放臂次數(shù)占比比較（Ｊ土ｓ，邋ｎ＝６）邐？逡逑ｍｉ邐動物只數(shù)（只）邐０Ｅ（％）逡逑空白組邐６邐０．３４±０．０６逡逑模型組邐６邐０．２９邋±０．０９逡逑調(diào)神組邐６邐０．５０±０．邋１５ａ逡逑疏肝組邐６邐０．３９邋±０．１１逡逑

３．２各組小鼠在開放臂停留時間（０Ｔ）比較逡逑與空白組小鼠相比，模型組小鼠在開放臂停留時間明顯縮短（Ｐ＜0．邋０５）；與模型逡逑組小鼠相比，疏肝組與調(diào)神組小鼠在開放臂停留時間明顯延長（ｐ＜0．0１，ｐ＜0．0１）；逡逑與調(diào)神組相比，疏肝組小鼠在開放臂停留時間稍短，但并無統(tǒng)計學差異（Ｐ＞邋０．０５）。逡逑見表４、圖３逡逑表４各組小鼠在開放臂停留時間比較Ｕ土ｓ，邋ｎ＝６）逡逑￣ｍ＼邐老鼠只數(shù)（只）邐０Ｔ邋（Ｓ）逡逑空白組邐６邐４０．５１邋＋邋６．０６逡逑模型組邐６邐２０．０３±２．２２＂逡逑調(diào)神組邐６邐６２．５０±９．４５１’逡逑疏肝組邐６邐６８．３８±３１．８４１＇逡逑注：與對照組相比，“ｐ＜邋０．０５；與模型組相比，＼＜邋０．０１逡逑

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本文編號：2726049