【摘要】：目的建立先天腎虛仔鼠模型,以Cx43為切入點(diǎn),觀察其骨發(fā)育情況,從先天腎精角度驗(yàn)證“腎主骨發(fā)育”,初步明確先天腎虛與胎源性骨發(fā)育遲緩相關(guān)性及Cx43與腎精相關(guān)性;采用左歸丸含藥血清培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞,闡明Cx43蛋白對(duì)先天腎虛影響骨發(fā)育的調(diào)控機(jī)制。方法1)理論研究:闡明腎與骨關(guān)系以及先天腎虛影響胎源性骨發(fā)育的理論機(jī)制。2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):復(fù)制先天腎虛模型仔鼠,雌雄合籠制備30只孕鼠(選用SPF級(jí)30只SD雌鼠體重270±20g,15只SD雄鼠體重300±20g,合籠配對(duì)),將孕鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、補(bǔ)腎組,每組10只。采用模擬地震振動(dòng)、光電刺激復(fù)合應(yīng)激恐嚇整個(gè)孕期,至胎鼠出生,復(fù)制先天腎虛仔鼠模型。造模過(guò)程中,對(duì)照組孕鼠正常喂養(yǎng)給予生理鹽水灌胃至仔鼠出生,取仔鼠;模型組孕鼠模擬地震振動(dòng)、光電刺激復(fù)合應(yīng)激恐嚇同時(shí)給予生理鹽水灌胃至仔鼠出生,取仔鼠;補(bǔ)腎組模擬地震振動(dòng)、光電刺激復(fù)合應(yīng)激恐嚇同時(shí)給予左歸丸灌胃至仔鼠出生,取仔鼠;仔鼠出生后,為減小后天喂養(yǎng)影響,將每只孕鼠調(diào)整相同仔鼠量喂養(yǎng)至5周。取材膜內(nèi)化骨的顱骨骨縫和軟骨內(nèi)化骨的骨骺生長(zhǎng)板兩種骨發(fā)育典型部位,對(duì)先天腎虛骨發(fā)育情況,及Cx43、Sox9、PTHrP的分布規(guī)律及表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。檢測(cè)仔鼠3周內(nèi)平均身長(zhǎng)、5周內(nèi)股骨平均長(zhǎng)度、Micro CT檢測(cè)股骨皮質(zhì)骨及松質(zhì)骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)、第5周股骨鈣、磷、羥脯氨酸含量研究先天腎虛仔鼠骨發(fā)育的情況;取生后第1周仔鼠顱骨骨縫、第3周股骨生長(zhǎng)板及第5周股骨皮質(zhì)骨,石蠟包埋切片,分別采用HE、藩紅固綠、馬森染色,進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察;免疫熒光法、RT-PCR技術(shù)及WB技術(shù)檢測(cè)Cx43、Sox9、PTHrP的分布規(guī)律及表達(dá)情況,各組組間進(jìn)行比較,所得數(shù)據(jù)均用sx?表示,用SPSS 17.0軟件處理,單因素方差分析組間比較,采用t檢驗(yàn)。P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3)體外實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞,觀察細(xì)胞增殖、分化、成熟情況,及Cx43表達(dá)和其介導(dǎo)的GJIC功能情況。各組原代成骨細(xì)胞取材:雌雄合籠制備孕鼠,分為對(duì)照組和模型組;模型組給予模擬地震振動(dòng)、光電刺激復(fù)合應(yīng)激恐嚇至仔鼠出生,對(duì)照組正常喂養(yǎng)至仔鼠出生;取模型組仔鼠出生當(dāng)天顱蓋骨培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞,分為模型組細(xì)胞和補(bǔ)腎組細(xì)胞;對(duì)照組仔鼠出生當(dāng)天顱蓋骨培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞為對(duì)照組細(xì)胞。制備左歸丸含藥血清:采用大鼠灌胃左歸丸(1.89/Kg)2次/日,連續(xù)5天,末次給藥1h后,麻醉大鼠提取左歸丸含藥血清,滅菌、備用。原代成骨細(xì)胞培養(yǎng):三組均用膠原酶消化法獲得成骨細(xì)胞進(jìn)行原代成骨細(xì)胞培養(yǎng),差速貼壁法純化成骨細(xì)胞,待細(xì)胞鋪滿(mǎn)瓶底傳代培養(yǎng),對(duì)照組和模型組用小牛血清培養(yǎng),補(bǔ)腎組給予左歸丸含藥血清培養(yǎng)21D。倒置顯微鏡連續(xù)觀察細(xì)胞形態(tài);繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(MTT法)、檢測(cè)分化情況(ALP活性)、檢測(cè)成熟情況(茜素紅染色法);并分別于第7、14、21天檢測(cè)成骨細(xì)胞Cx43蛋白及mRNA表達(dá)情況,第21天時(shí)免疫熒光染色檢測(cè)Cx43蛋白表達(dá)和劃痕染料標(biāo)記示蹤法檢測(cè)GJIC功能檢測(cè),各組組間對(duì)比,所得數(shù)據(jù)均用sx?表示,用SPSS 17.0軟件處理,單因素方差分析組間比較,采用t檢驗(yàn)。P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1)妊娠期復(fù)合恐嚇刺激孕鼠,引起孕鼠腎精虧虛無(wú)力滋養(yǎng)胎鼠,導(dǎo)致模型組孕鼠胎產(chǎn)數(shù)減少(P0.01或P0.05),有顯著性差異。2)先天腎虛仔鼠平均身長(zhǎng)從出生當(dāng)天到第3周,發(fā)現(xiàn)第8天開(kāi)始至21天身長(zhǎng)變短(P0.05),有明顯性差異;第1、3、5周股骨長(zhǎng)度變短(P0.05),組間有明顯性差異。3)第1周顱骨骨縫形態(tài)學(xué)觀察,與對(duì)照組比較,模型組顱骨骨縫略增寬,骨縫內(nèi)圓形、卵圓形成骨細(xì)胞及其前體細(xì)胞數(shù)量減少;頂骨骨板變薄,板障空間減少。4)第3周股骨遠(yuǎn)端生長(zhǎng)板形態(tài)學(xué)觀察,模型組股骨生長(zhǎng)板增殖層變薄,軟骨細(xì)胞無(wú)序排列,細(xì)胞稀疏,補(bǔ)腎組生長(zhǎng)板各層軟骨細(xì)胞與對(duì)照組形態(tài)排列上無(wú)明顯差異。先天腎虛仔鼠,先天腎精不足,影響膜內(nèi)化骨典型部位股骨生長(zhǎng)板發(fā)育遲緩。5)第5周股骨檢測(cè)骨礦鹽密度,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與骨礦鹽密度水平下降相應(yīng),模型組骨Ca、P含量減少,各組有明顯差異(P0.01或P0.05)。股骨干皮質(zhì)骨膠原纖維馬森染色觀察股骨基質(zhì)中Ⅰ型膠原纖維形態(tài),各組在形態(tài)學(xué)上無(wú)明顯差異。Micro CT掃描檢測(cè)通過(guò)檢測(cè),模型組皮質(zhì)骨厚度、外徑周長(zhǎng)、皮質(zhì)骨面積均下降(P0.01或P0.05);掃描遠(yuǎn)端松質(zhì)骨微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),模型組在骨小梁厚度、數(shù)量、骨體積分?jǐn)?shù)、骨密度上雖有減少表現(xiàn),但組間比較并無(wú)顯著性差異(P0.05)。6)Cx43顱骨骨縫表達(dá)結(jié)果石蠟包埋切片后行免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Cx43蛋白在各組織中均染色為棕色,在顱骨骨縫組織中呈高水平表達(dá),主要集中在骨縫邊緣區(qū)域的成骨細(xì)胞及其前體細(xì)胞胞漿(成骨細(xì)胞、成骨樣細(xì)胞),與對(duì)照組比較,模型組表達(dá)降低(P0.05),有顯著性差異,與模型組比較,補(bǔ)腎組表達(dá)升高(P0.05),有顯著性差異;WB檢測(cè)顱骨骨縫Cx43蛋白含量:與對(duì)照組比較,模型組條帶最細(xì)平均灰度值相比較有明顯性差異(P0.01),有顯著性差異;與模型組比較,補(bǔ)腎組的條帶粗細(xì)和灰度增粗(P0.05),有明顯性差異;RT-PCR檢測(cè)顱骨骨縫Cx43 mRNA含量表達(dá):與對(duì)照組比較,模型C x43 mRNA含量顯著性降低(P0.05);與模型組比較,補(bǔ)腎組Cx43 mR NA含量顯著性升高(P0.05);對(duì)照組與補(bǔ)腎組比較二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異。7)Cx43股骨表達(dá)結(jié)果石蠟包埋切片后行免疫組化檢測(cè):股骨生長(zhǎng)板主要在儲(chǔ)備層、其次增殖層表達(dá)于軟骨細(xì)胞的胞漿內(nèi),各組間無(wú)顯著性差異(P0.05);股骨干皮質(zhì)骨表達(dá)于骨小梁邊緣成骨細(xì)胞及骨基質(zhì)中的骨細(xì)胞胞漿上,各組間無(wú)顯著性差異(P0.05);WB檢測(cè)股骨生長(zhǎng)板、股骨皮質(zhì)骨Cx43蛋白含量:股骨生長(zhǎng)板各組條帶的粗細(xì)和灰度均無(wú)明顯差異(P0.05),股骨皮質(zhì)骨,各組條帶的粗細(xì)和灰度均無(wú)明顯差異(P0.05);RT-PCR檢測(cè)股骨生長(zhǎng)板、股骨皮質(zhì)骨Cx43 mRNA含量:各組股骨生長(zhǎng)板、股骨皮質(zhì)骨Cx43 mRNA含量組間比較:三組股骨干皮質(zhì)骨Cx43 m RNA均有表達(dá)。與對(duì)照組比較,模型Cx43 mRNA含量降低,但不顯著性降低(P0.05),無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組比較,補(bǔ)腎組Cx43 mRNA含量升高但不顯著性(P0.05),無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。8)Sox9股骨生長(zhǎng)板表達(dá)結(jié)果WB檢測(cè)股骨生長(zhǎng)板Sox9蛋白含量:與對(duì)照組比較,模型組條帶最細(xì)平均灰度值相比較有明顯性差異(P0.05),有顯著性差異;與模型組比較,補(bǔ)腎組的條帶粗細(xì)和灰度增粗(P0.05),有明顯性差異;RT-PCR檢測(cè)股骨生長(zhǎng)板Sox9 mRNA表達(dá):與對(duì)照組比較,模型Sox9 mRNA含量顯著性降低(P0.01);與模型組比較,補(bǔ)腎組Sox9 mRNA含量顯著性升高(P0.01);對(duì)照組與補(bǔ)腎組比較二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異。9)PTHrP股骨表達(dá)結(jié)果WB檢測(cè)股骨生長(zhǎng)板PTHrP蛋白含量:與對(duì)照組比較,模型組條帶最細(xì),平均灰度值相比較有明顯性差異(P0.05),有顯著性差異;與模型組比較,補(bǔ)腎組的條帶粗細(xì)和灰度增粗(P0.05),有明顯性差異。WB檢測(cè)股骨皮質(zhì)骨PTHrP蛋白含量:與對(duì)照組比較,模型組條帶最細(xì)平均灰度值相比較有明顯性差異(P0.05),有顯著性差異;與模型組比較,補(bǔ)腎組的條帶粗細(xì)和灰度增粗(P0.05),有明顯性差異。RT-PCR檢查股骨生長(zhǎng)板PTHrP mRNA表達(dá):與對(duì)照組比較,模型組仔鼠股骨生長(zhǎng)板PTHrP mRNA含量降低,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P0.05);與模型組比較,補(bǔ)腎組股骨生長(zhǎng)板PTHrP mRNA含量明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P0.05);補(bǔ)腎組與對(duì)照組PTHrP mRNA含量無(wú)明顯性差異(P0.05)。RT-PCR檢查股骨皮質(zhì)骨PTHrP mRNA表達(dá):與對(duì)照組比較,模型組仔鼠股骨干皮質(zhì)骨PTHrPmRNA含量降低,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P0.05);與模型組比較,補(bǔ)腎組股骨干皮質(zhì)骨PTHrP mRNA含量明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異P0.05);補(bǔ)腎組與對(duì)照組PTHrP mRNA含量無(wú)明顯性差異(P0.05)。10)PTHrP顱骨骨縫表達(dá)結(jié)果WB檢測(cè)顱骨骨縫PTHrP蛋白含量:與對(duì)照組比較,模型組條帶最細(xì)平均灰度值相比較有明顯性差異(P0.05),有顯著性差異;與模型組比較,補(bǔ)腎組的條帶粗細(xì)和灰度增粗(P0.05),有明顯性差異。RT-PCR檢測(cè)顱骨骨縫PTHrP mRNA含量表達(dá):與對(duì)照組比較,模型組仔鼠顱骨骨縫PTHrP mRNA含量降低,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P0.05);與模型組比較,補(bǔ)腎組顱骨骨縫PTHrP mRNA含量明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P0.05);補(bǔ)腎組與對(duì)照組PTHrP mRNA含量無(wú)明顯性差異(P0.05)。11)顱骨骨縫培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞MMT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖和細(xì)胞活力,模型組上升趨勢(shì)緩慢,但各組間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。ALP活性檢測(cè)成骨細(xì)胞分化情況,與對(duì)照組比較,模型組ALP活性顯著性降低(P0.05);與模型組比較,補(bǔ)腎組ALP活性顯著性升高(P0.05),有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。茜紅素染色評(píng)估成骨細(xì)胞成熟情況,與對(duì)照組比較,模型組鈣化結(jié)節(jié)面積顯著性降低(P0.05);與模型組比較,補(bǔ)腎組鈣化結(jié)節(jié)面積顯著性升高(P0.05),有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。12)成骨細(xì)胞Cx43蛋白結(jié)果Cx43蛋白熒光反應(yīng)沉積物主要呈線性點(diǎn)片狀沿細(xì)胞膜表面排列,模型組Cx43蛋白分布減少(P0.05);Cx43 mRNA表達(dá)隨著細(xì)胞分化的進(jìn)行,Cx43表達(dá)量逐漸增高,第7天模型組略低于對(duì)照組和補(bǔ)腎組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);第14、21天明顯低于另兩組,P0.05。Cx43蛋白表達(dá)結(jié)果與mRNA表達(dá)相對(duì)應(yīng),對(duì)照組與模型組對(duì)比,差異顯著(P0.05)。13)成骨細(xì)胞GJIC功能檢測(cè)結(jié)果各組細(xì)胞GJIC功能正常,各組都有熒光黃染料在細(xì)胞間的擴(kuò)散距離;染料擴(kuò)散面積熒光定量分析顯示,與對(duì)照組比較,模型組染料擴(kuò)散面積熒光定量降低,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補(bǔ)腎組明顯增加(P0.05)。結(jié)論本課題從母代腎精虧虛導(dǎo)致子代先天腎虛影響其骨發(fā)育的角度進(jìn)行了理論闡發(fā),首次提出“先天腎虛與胎源性骨病相關(guān)”的學(xué)術(shù)觀點(diǎn);改進(jìn)了“恐傷孕鼠腎精”以復(fù)制先天腎虛仔鼠動(dòng)物模型方法,發(fā)現(xiàn)先天腎虛仔鼠出現(xiàn)骨骼發(fā)育遲緩現(xiàn)象;首次以Cx43為切入點(diǎn),研究先天腎虛影響仔鼠骨發(fā)育的機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)立足“恐傷腎”理論,采用妊娠期模擬地震平臺(tái)復(fù)合光電刺激法導(dǎo)致孕鼠腎精虧虛,無(wú)力滋養(yǎng)胎兒,成功復(fù)制先天腎虛仔鼠模型,觀察仔鼠整體骨發(fā)育情況,發(fā)現(xiàn)模型仔鼠35天內(nèi),身長(zhǎng)及股骨長(zhǎng)均遲緩,故先天腎精與胎源性骨發(fā)育遲緩相關(guān);檢測(cè)顱骨骨縫發(fā)育,發(fā)現(xiàn)模型組仔鼠顱骨頂骨骨板變薄,顱骨骨縫發(fā)育遲緩,Cx43蛋白及mRNA表達(dá)均下降,認(rèn)為Cx43表達(dá)下調(diào)是影響先天腎虛仔鼠顱骨骨縫發(fā)育機(jī)制之一;檢測(cè)股骨發(fā)育,股骨遠(yuǎn)端骨骺生長(zhǎng)板增值層變薄,Cx43表達(dá)無(wú)明顯變化,但是局部PTHrP表達(dá)及Sox9表達(dá)下調(diào),故先天腎虛仔鼠股骨發(fā)育遲緩與局部PTHrP表達(dá)及Sox9表達(dá)相關(guān);培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)先天腎虛影響成骨細(xì)胞分化、成熟,Cx43表達(dá)下降,其介導(dǎo)GJIC下降,故Cx43介導(dǎo)GJIC調(diào)控成骨細(xì)胞分化成熟是影響顱骨骨縫膜內(nèi)成骨的可能分子機(jī)制之一;補(bǔ)腎組為左歸丸能治療妊娠期腎精虧虛,結(jié)果顯示身長(zhǎng)發(fā)育增快,故認(rèn)為左歸丸預(yù)防子代兒童期骨發(fā)育遲緩,其部分作用機(jī)制是調(diào)節(jié)Cx43介導(dǎo)GJIC阻斷仔鼠骨發(fā)育遲緩。結(jié)論歸納如下:1)妊娠期復(fù)合法恐嚇刺激孕鼠,影響先天腎虛仔鼠骨發(fā)育,故先天腎精與胎源性骨發(fā)育遲緩相關(guān)。2)Cx43表達(dá)下調(diào)是影響先天腎虛仔鼠顱骨骨縫發(fā)育機(jī)制之一。3)Cx43介導(dǎo)GJIC調(diào)控成骨細(xì)胞分化成熟是影響顱骨骨縫膜內(nèi)成骨的可能分子機(jī)制之一。4)腎精與Cx43介導(dǎo)GJIC功能一致,影響膜內(nèi)化骨調(diào)控骨生長(zhǎng)發(fā)育,因此,Cx43是腎精的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。5)左歸丸能治療妊娠期腎精虧虛,預(yù)防其子代兒童期骨發(fā)育遲緩。6)Cx43介導(dǎo)GJIC功能是左歸丸補(bǔ)腎填精的作用機(jī)制之一。7)先天腎虛仔鼠股骨發(fā)育遲緩與局部PTHrP表達(dá)及Sox9表達(dá)相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R277.5;R-332
【圖文】：
股骨生長(zhǎng)板HE染色對(duì)照組(20)對(duì)照組(20)對(duì)照組(20)
顱骨骨縫及骨縫板障空間HE染色對(duì)照組模型組補(bǔ)腎組
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7 杝小野;;心臟重構(gòu)當(dāng)補(bǔ)腎[A];第十屆中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)年會(huì)論文集[C];2012年
8 許兵;季日旭;金紅婷;劉慧;肖魯偉;童培建;;經(jīng)典骨質(zhì)疏松癥模型大鼠的腎虛證研究[A];2014浙江省骨質(zhì)疏松與骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)年會(huì)暨國(guó)家級(jí)繼教項(xiàng)目“骨質(zhì)疏松癥和骨質(zhì)疏松性骨折診治進(jìn)展”專(zhuān)題研討會(huì)論文匯編[C];2014年
9 許兵;金紅婷;葉小雨;肖魯偉;童培建;;經(jīng)典骨質(zhì)疏松癥模型大鼠的腎虛證研究[A];2014年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2014年
10 許兵;金紅婷;葉小雨;肖魯偉;童培建;;經(jīng)典骨質(zhì)疏松癥模型大鼠的腎虛證研究[A];2014年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2014年
相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條
1 林炳輝;方素欽;葉盈等;“脾虛及腎”理論有客觀依據(jù)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年
2 沈自尹;走向科學(xué)的前沿[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年
相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條
1 蕭閔;基于Cx43蛋白研究先天腎虛影響仔鼠骨發(fā)育的機(jī)制[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2019年
2 李亞妤;慢性腎病3期腎氣陰（血）虛證的臨床研究[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2012年
3 王林群;基于腎“其華在發(fā)”理論探討慢性腎臟病腎虛證的臨床基礎(chǔ)及“護(hù)腎Ⅱ號(hào)”作用機(jī)制的研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2015年
4 譚從娥;腎虛證在糖尿病中的分布特征及其免疫遺傳機(jī)制研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2009年
5 王琦;衰老進(jìn)程基因表達(dá)水平上的時(shí)空特征及淫羊藿總黃酮的干預(yù)效果研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年
6 沈姍姍;神經(jīng)性耳鳴腎虛證血清代謝組學(xué)研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2015年
7 鄭雯;參蛤細(xì)辛散時(shí)間給藥法治療小兒哮喘緩解期腎虛證的臨床研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2009年
8 周薇;壽胎丸治療體外授精—胚胎移植腎虛證的臨床療效評(píng)價(jià)及作用機(jī)制研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2017年
9 唐楊;陰陽(yáng)互根理論在腎虛證中的臨床應(yīng)用及機(jī)制探討[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 陳穎穎;骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞生物鐘的變化及其與腎虛證的關(guān)系[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2019年
2 牛巧能;自然衰老大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞因子的變化與腎虛證的相關(guān)性研究[D];河南中醫(yī)藥大學(xué);2017年
3 石偉;杜仲補(bǔ)腰合劑加安康信治療慢性非特異性腰痛（腎虛證）的療效分析[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2018年
4 王淳;不孕癥患者腎虛證型及體質(zhì)類(lèi)型分布特點(diǎn)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年
5 徐麗;補(bǔ)血疏肝湯治療經(jīng)行頭痛（肝郁腎虛證）的臨床觀察[D];長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué);2012年
6 耿俊良;基于《傷寒雜病論》探討腎虛相關(guān)病癥的辨治規(guī)律研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2017年
7 張邱巖;益腎調(diào)經(jīng)湯治療月經(jīng)過(guò)少腎虛證的臨床觀察[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2012年
8 陳顯;護(hù)骨消積方治療骨轉(zhuǎn)移癌的療效及NTX與腎虛證型的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年
9 陳興娟;基于中醫(yī)示范社區(qū)的高血壓人群防治研究—正常高值血壓人群證候與動(dòng)脈僵硬度的相關(guān)性研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2012年
10 劉南南;基于中醫(yī)示范社區(qū)的高血壓人群防治研究（山東平原模式）—社區(qū)正常高值血壓人群證素與證候特征[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2012年
本文編號(hào)：
2723299
