【摘要】：谷氨酸(Glutamate,GLU)是哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),在許多神經(jīng)生理過程中扮演著至關(guān)重要的角色,如神經(jīng)元的生長(zhǎng)發(fā)育、突觸的穩(wěn)定及可塑性、學(xué)習(xí)記憶和影響其他神經(jīng)遞質(zhì)等。然而,谷氨酸在突觸間的積累可引起神經(jīng)元的毒性損傷、衰老及死亡,被稱為神經(jīng)元的“興奮性毒性”。阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的特征性病理改變?yōu)棣碌矸蹣拥鞍壮练e形成的細(xì)胞外老年斑,Tau蛋白過度磷酸化形成的細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié),以及神經(jīng)元丟失伴膠質(zhì)細(xì)胞增生等。谷氨酸介導(dǎo)的神經(jīng)毒性損傷是阿爾茨海默病發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。因此,如何有效的抑制谷氨酸引起的神經(jīng)毒性細(xì)胞凋亡成為治療AD的一條重要途徑。艾煙提取物是從艾灸療法艾煙中提取的有效混合物,含有多種生物活性成分,具有抗自由基、殺菌、抗凋亡、抗氧化應(yīng)激等作用。關(guān)于艾灸機(jī)理研究的前期實(shí)驗(yàn)表明艾灸及艾煙的干預(yù)治療通過抗氧化,調(diào)節(jié)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和減少A β毒性等,能改善AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示艾煙及艾灸療法可用于AD防治,艾煙提取物可能是一種治療AD很有前途的藥物。在此基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用艾煙提取物干預(yù)一日齡SD大鼠前額葉皮層和海馬組織原代培養(yǎng)的正常神經(jīng)細(xì)胞及谷氨酸誘導(dǎo)建立的神經(jīng)毒性損傷細(xì)胞模型,觀察其對(duì)正常細(xì)胞及損傷細(xì)胞模型的抗凋亡作用,并探討艾煙提取物對(duì)正常神經(jīng)細(xì)胞及谷氨酸介導(dǎo)的神經(jīng)元毒性損傷模型的作用通路,以闡明艾煙提取物對(duì)正常神經(jīng)細(xì)胞及AD細(xì)胞模型的保護(hù)作用及分子機(jī)制,為臨床應(yīng)用艾灸及艾煙提取物防治AD提供理論基礎(chǔ)。目的:探討艾煙提取物對(duì)前額葉皮層和海馬神經(jīng)元及谷氨酸介導(dǎo)的神經(jīng)毒性損傷模型凋亡的影響及潛在機(jī)制。方法:采用24小時(shí)內(nèi)新生SD大鼠乳鼠前額葉皮層及海馬組織原代培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞,谷氨酸誘導(dǎo)建立神經(jīng)毒性損傷病理模型。實(shí)驗(yàn)分兩部分:1)檢測(cè)不同濃度艾煙提取物對(duì)正常神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究,實(shí)驗(yàn)分組:空白對(duì)照組、艾煙提取物組、艾煙提取物+PI3K/AKT信號(hào)通路阻斷劑組;2)檢測(cè)艾煙提取物對(duì)神經(jīng)毒性損傷細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究,實(shí)驗(yàn)分組:空白對(duì)照組、損傷模型組、艾煙提取物+損傷組、艾煙提取物+損傷+PI3K/AKT信號(hào)通路阻斷劑組。運(yùn)用MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率,TUNEL及DAPI免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,以及Western Blot檢測(cè)凋亡蛋白的表達(dá)。結(jié)果:(1)MTT和TUNEL檢測(cè)顯示谷氨酸能降低神經(jīng)細(xì)胞的存活率和增加其凋亡率,并呈劑量依賴性(P0.001);0.1-1.0μg/mL艾煙提取物能夠促進(jìn)正常神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)并減少其凋亡(P0.01-0.001);0.2-1.2μg/mL艾煙提取物能提高谷氨酸誘導(dǎo)的毒性損傷細(xì)胞模型存活率并抑制其凋亡(P0.01-0.001);(2)Western Blot檢測(cè)顯示谷氨酸能夠降低抗凋亡蛋白P-Akt、Bcl-2的表達(dá),上調(diào)促凋亡蛋白active-Caspase-3的表達(dá)(P0.01-0.001);艾煙提取物能夠逆轉(zhuǎn)正常神經(jīng)細(xì)胞及谷氨酸誘導(dǎo)的P-Akt、Bcl-2表達(dá)下調(diào)和active-Caspase-3表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象(P0.01-0.001);PI3K/AKT通路阻斷劑LY294002能夠抑制艾煙提取物對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的挽救作用而降低P-Akt及Bcl-2表達(dá)并增加acti ve-Caspase-3表達(dá)(P0.05-0.001)。結(jié)論:一定濃度的艾煙提取物能促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)并延緩神經(jīng)細(xì)胞的凋亡,其機(jī)制可能通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路并調(diào)控下游的細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、active-Caspase-3的表達(dá)來拮抗各種因素引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R245
【圖文】：

ｇ／ｍＬ）艾煙提取物組較對(duì)照組相比，能顯著促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，延緩神經(jīng)細(xì)胞自然凋逡逑亡，細(xì)胞存活率呈拋物線增高，表現(xiàn)出一定濃度藥物依賴性（Ｐ＜0．邋０１－０．邋００１），但隨著逡逑艾煙提取物濃度的升高，在１．０邋ｕｇ／ｍＬ以上出現(xiàn)藥物毒性（見圖１）。逡逑４８逡逑

可能ＭＥ濃度太低，保護(hù)作用不明顯。而ＭＥ大于１．２邋ｕｇ／ｍＬ以上沒有發(fā)揮神逡逑經(jīng)保護(hù)作用，顯示出一定的藥物濃度毒性，提示混合物中存在部分有害物質(zhì)，需進(jìn)一逡逑步純化（見圖１）。ＴＵＮＥＬ染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了邋ＭＥ對(duì)谷氨酸介導(dǎo)的神逡逑經(jīng)毒性損傷的保護(hù)作用（見圖２邋）。逡逑５８逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;朝薊水提取物[J];中草藥通訊;1972年05期

2 呂碩;;柚子皮提取物可預(yù)防高脂飲食引起的代謝紊亂[J];中國(guó)果業(yè)信息;2017年01期

3 徐文君;常嬌;徐丹;羅超;;貫葉金絲桃提取物片劑的制備[J];甘肅科技;2016年15期

4 鄧勇;王新喜;;中藥提取與提取物監(jiān)管的現(xiàn)狀及其完善探討[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2017年04期

5 吳英;郭良君;朱美銀;蔣珍珍;葉光明;傅明強(qiáng);孔飛飛;;骨瓜提取物及配伍穩(wěn)定性研究進(jìn)展[J];環(huán)球中醫(yī)藥;2015年S1期

6 劉辰;劉莉嘉;趙燦;郭麗娜;王如峰;;金蓮花總提取物人腸內(nèi)菌轉(zhuǎn)化前后的抗炎活性研究[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2016年03期

7 張明珠;何光照;曹燁君;何麗霞;鄧玉琴;;骨瓜提取物致過敏性休克36例文獻(xiàn)分析[J];中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師;2014年04期

8 ;生活·資訊[J];家庭生活指南;2016年12期

9 段國(guó)圣;;這座城市發(fā)生的事情[J];喜劇世界(下半月);2016年11期

10 ;爭(zhēng)做人參提取物行業(yè)的龍頭——撫松縣安東參業(yè)有限公司簡(jiǎn)介[J];中國(guó)食品;2017年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 徐艷花;;骨瓜提取物致不良反應(yīng)13例的觀察及護(hù)理[A];2014年河南省骨傷護(hù)理學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2014年

2 楊志業(yè);李漫莎;林錦鋒;魏鋒;;肉豆蔻薄層色譜用對(duì)照提取物的制備與應(yīng)用研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第七次中藥分析學(xué)術(shù)交流會(huì)會(huì)議論文集[C];2014年

3 陳浩達(dá);黃懷鵬;陶君;周永妍;;論對(duì)照提取物的標(biāo)定方法及應(yīng)用前景[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第七次中藥分析學(xué)術(shù)交流會(huì)會(huì)議論文集[C];2014年

4 章文紅;王彬輝;張曉芬;吳敏;王石健;;高效液相色譜測(cè)定麻杏薏甘湯提取物中苦杏仁苷的含量[A];2012年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)臨床藥學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨醫(yī)院藥事管理質(zhì)控中心、臨床藥學(xué)分會(huì)十周年慶典大會(huì)論文集[C];2012年

5 陳眉;龔敏操;;郁金提取物對(duì)小鼠神經(jīng)病理性疼痛干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[A];浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第二屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨2012年學(xué)術(shù)年會(huì)文集[C];2012年

6 畢和平;張立偉;韓長(zhǎng)日;陳光英;;三叉苦水提取物清除過氧化氫作用的研究[A];第六屆全國(guó)藥用植物和植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

7 應(yīng)景艷;麻佳蕾;徐亞萍;曾蘇;王以;陳亞坤;姚彤煒;;活性指導(dǎo)下的雞肝散提取物及其制劑的質(zhì)量研究[A];藥用植物化學(xué)與中藥有效成分分析研討會(huì)論文集（上）[C];2008年

8 肖輝;張?jiān)旅?盧曉梅;張文清;;沙棗提取物抗腫瘤作用及機(jī)制的研究[A];膳食變遷對(duì)民眾健康的影響：挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)——第二屆兩岸四地營(yíng)養(yǎng)改善學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)報(bào)告及論文摘要匯編[C];2010年

9 李玉潔;楊慶;翁小剛;陳穎;朱曉新;;參蓮提取物抗炎藥理活性評(píng)價(jià)[A];2010年全國(guó)中藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

10 范超君;畢和平;陳湛娟;陳光英;鮑長(zhǎng)余;;番木瓜提取物對(duì)豬油抗氧化作用的研究[A];海南省藥學(xué)會(huì)二○一○年學(xué)術(shù)年會(huì)會(huì)議論文集[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 醫(yī)保商會(huì) 張中朋;植提物出口覓徑[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2018年

2 任靜;越橘提取物緩解眼疲勞再添新證據(jù)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2017年

3 余世琪 于志斌 中國(guó)醫(yī)保商會(huì);提取物產(chǎn)業(yè)步入調(diào)整期[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2017年

4 本報(bào)記者 張東風(fēng);提取物行業(yè)再次騰飛 值得期待[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2017年

5 記者 劉海英;花椰菜芽提取物有助控制血糖[N];科技日?qǐng)?bào);2017年

6 本報(bào)記者 馬飛;提取物供給收緊重構(gòu)產(chǎn)業(yè)布局[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2013年

7 中國(guó)醫(yī)保進(jìn)出口商會(huì)中藥部 霍衛(wèi);上半年提取物出口額增長(zhǎng)兩成[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2014年

8 中國(guó)醫(yī)藥保健品進(jìn)出口商會(huì) 閆慶松;提取物產(chǎn)業(yè)的國(guó)際化征途(上)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2012年

9 中國(guó)醫(yī)藥保健品進(jìn)出口商會(huì) 閆慶松;提取物產(chǎn)業(yè)的國(guó)際化征途(下)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2012年

10 曲穎;芬蘭用馴鹿骨提取物治骨折[N];中國(guó)食品報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 Haftom Yemane Gebrechristos;土豆皮提取物及其制備膜對(duì)豬肉、雞肉、魚肉的保鮮效果[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

2 李丹;姜提取物通過LTA4H和AKT通路抑制結(jié)腸癌生長(zhǎng)的機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2017年

3 張佑健;飲水有機(jī)提取物中TCEP濃度和細(xì)胞毒性以及TCEP聯(lián)合BaP致細(xì)胞炎性反應(yīng)的調(diào)控機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2018年

4 龐道睿;楊桃酚類物質(zhì)降脂作用及其改善肝脂變性的機(jī)理研究[D];華南理工大學(xué);2018年

5 王領(lǐng);抗敏止癢植物組合提取物制備工藝、功效及作用途徑研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 劉芳;黃芩、柴胡及其配伍的提取物對(duì)CVB_（3m）增殖及心肌組織細(xì)胞凋亡干預(yù)的比較研究[D];遼寧中醫(yī)學(xué)院;2005年

7 肖輝;阿魏蘑菇、黑加侖提取物抗腫瘤作用、機(jī)制和應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2005年

8 舒孝順;菝葜提取工藝的改進(jìn)及藥理學(xué)研究[D];華中科技大學(xué);2005年

9 孫杰;兩種海藻提取物的化學(xué)成分和生物活性的研究及其應(yīng)用[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2006年

10 伍義行;六棱菊標(biāo)準(zhǔn)提取物和抗炎膠囊抗炎保肝作用研究[D];浙江大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 冉芳靜;艾葉提取物對(duì)幾種篩選分離微生物生長(zhǎng)抑制效應(yīng)的評(píng)價(jià)[D];南陽師范學(xué)院;2019年

2 藍(lán)瓊妮;壯藥三角泡不同提取物對(duì)2型糖尿病小鼠治療作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

3 侯文成;黃金香柳葉提取物抗氧化和抑菌活性研究[D];海南大學(xué);2017年

4 唐軍;落葵果實(shí)提取物緩蝕劑的制備及性能研究[D];西南石油大學(xué);2018年

5 唐輝;胡椒石油醚相提取物對(duì)肉類關(guān)鍵致病菌和腐菌的抑菌機(jī)理及其應(yīng)用研究[D];海南大學(xué);2017年

6 李丹;艾煙提取物對(duì)原代培養(yǎng)神經(jīng)元凋亡的影響及機(jī)制探討[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

7 王淵學(xué);二精方多糖提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及對(duì)實(shí)驗(yàn)性Ⅱ型糖尿病小鼠血糖、血脂的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

8 侯爽;蜜蜂巢脾活性成分的提取、鑒定及功能性研究[D];哈爾濱商業(yè)大學(xué);2012年

9 李丹;鷹嘴豆芽素A緩解PM_(2.5)有機(jī)提取物所致炎癥作用機(jī)制研究[D];天津大學(xué);2018年

10 楊炯;核桃殼提取物的抗氧化及減肥活性[D];昆明理工大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2722357