【摘要】：研究背景:隨著全球經(jīng)濟的發(fā)展,人們生活水平普遍提高,飲食習(xí)慣轉(zhuǎn)向高糖、高油和高脂,導(dǎo)致2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)的發(fā)病率逐年升高,目前已成為不可忽視的全球性健康問題。西醫(yī)認為T2DM的發(fā)病機制是胰島素抵抗和胰島β細胞功能障礙,然而隨著研究的深入,腸道菌群與T2DM之間的密切聯(lián)系被學(xué)者們發(fā)現(xiàn),腸道菌群已成為研究T2DM機制及T2DM防治方向的新靶點。中醫(yī)認為,T2DM屬于“消渴”范疇,其發(fā)病機制是陰虛和燥熱,治宜清熱潤燥、養(yǎng)陰生津,多采用中藥治療及針灸推拿治療。其中振腹推拿是以振腹操作為主,以神闕穴的獨特作用為基礎(chǔ),通過調(diào)理任督二脈及臟腑的俞募穴,以達到培補元氣、調(diào)理氣機作用的具有獨特的理論體系的推拿療法,以其良好的治療效果受到患者推崇。但振腹推拿改善T2DM的相關(guān)機制仍未完全闡明。研究目的:本研究通過以高糖高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(30mg/(kg·bw))誘導(dǎo)T2DM大鼠模型,通過分析空白組、模型組、推拿組三組組間差異及推拿組在振腹干預(yù)前后血糖血脂以及腸道菌群等指標(biāo)的變化,探討振腹推拿對T2DM大鼠的作用機制以及與腸道菌群的相關(guān)性。研究方法:在適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,對36只8周齡SPF級雄性Wistar大鼠進行正式造模。隨機選取6只作為空白組繼續(xù)基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),另外30只作為T2DM造模大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。連續(xù)喂養(yǎng)4周后,將所有大鼠禁食12個小時,T2DM造模大鼠快速腹腔注射2%鏈脲佐菌素溶液,正常大鼠腹腔注射同等劑量的檸檬酸鈉緩沖液,造模大鼠繼續(xù)高糖高脂飼養(yǎng),分別在第3天和第7天測量空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FBG),以兩次FBG≥11.1mmol/L作為成模標(biāo)準(zhǔn)進行篩選。將成模的大鼠隨機分為模型組和推拿組。推拿組大鼠以自制鼠袋固定并給予振腹推拿干預(yù),每次15分鐘,每周5次,連續(xù)6周;空白組和模型組大鼠以鼠袋固定但不振腹,每次15分鐘,每周5次,連續(xù)6周。實驗期間,空白組始終以普通飼料喂養(yǎng),而推拿組與模型組以高糖高脂飼料喂養(yǎng)。每周觀察大鼠的一般情況、測FBG,干預(yù)前以及末次干預(yù)后,檢測2h餐后血糖(2 Hour Hypoglycemia,2hPG),胰島素(insulin,INS)、總膽固醇(Cholesterol Total,TC)、甘油三酯(Trimyristate Glycerin,TG)、低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)、總膽汁酸(Total Bile Acid,TBA);并取干預(yù)前各組大鼠糞便以及干預(yù)后推拿組大鼠糞便以檢測腸道菌群。檢測方法:采用GPO-PAP酶法測定TG含量;用COD-PAP酶法測定TC含量;用直接法測定LDL-C及HDL-C;用酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定INS含量;用酶比色法測定TBA含量;用葡萄糖氧化酶法測定大鼠FBG及2hPG,并使用公式計算出胰島素抵抗指數(shù)(Homeostatic Model Assessment For Insulin Resistance,HOMA-IR);對糞便標(biāo)本進行DNA提取后進行PCR擴增、純化,采用Illumina MiSeq平臺進行高通量測序。研究結(jié)果:1.與空白組大鼠相比,T2DM大鼠皮毛色澤暗淡、發(fā)黃,飲水量較空白組增多,尿量及排便量較空白組明顯增多,且尿液粘稠泛白,味道腥臭,精神不振,經(jīng)振腹推拿干預(yù)后癥狀減輕。2.干預(yù)前,與空白組比較,模型組及推拿組的FBG明顯較高,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),模型組與推拿組的FBG無統(tǒng)計學(xué)差異;干預(yù)后,推拿組FBG自第3周開始呈下降趨勢,在第6周有顯著下降,與模型組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。3.干預(yù)前,與空白組相比,模型組與推拿組的2hPG、HOMA-IR水平高于空白組,而INS水平低于空白組,均具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異義(P0.01),模型組與推拿組組間均無統(tǒng)計學(xué)差異;干預(yù)后推拿組INS水平顯著升高,與模型組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。4.干預(yù)前,與空白組相比,模型組及推拿組的LDL-C、TC、TG及TBA水平均顯著升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。干預(yù)后,與模型組相比,推拿大鼠HDL-C水平較前升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);推拿組大鼠的血清LDL-C、TG及TBA水平明顯下降,差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);雖然干預(yù)后推拿組TC水平有所下降,但與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。5.腸道菌群多樣性分析:與正常大鼠相比,T2DM大鼠腸道菌群的群落豐富度較小,群落多樣性較低,但沒有統(tǒng)計學(xué)差異。6.菌群群落組成分析:T2DM大鼠與正常大鼠的腸道菌群有顯著差異,T2DM大鼠存在明顯的腸道菌群失調(diào),主要表現(xiàn)為T2DM大鼠乳酸桿菌、柔膜菌等益生菌豐度顯著低于正常大鼠,藍藻菌、變形菌、丹毒絲菌、棒狀桿菌等多個條件致病菌豐度顯著高于正常大鼠。推拿組在干預(yù)前后組成有很大差異和明顯的變化,主要表現(xiàn)為厚壁菌門/擬桿菌比值的降低,有益菌種如雙歧桿菌、蘇黎世桿菌的增多,條件致病菌如變形菌門及其相關(guān)綱目、棒狀桿菌的減少、對機體健康產(chǎn)生負面作用的布勞特氏菌、沃氏嗜膽菌、瘤胃菌、脫硫化弧菌等菌種的減少。結(jié)論:1.振腹推拿可以改善T2DM大鼠精神不振、皮毛色澤暗淡發(fā)黃、多尿等癥狀。2.振腹推拿可以降低T2DM大鼠FBG,提高INS水平,促進胰島素分泌。3.振腹推拿可以提高T2DM大鼠HDL-C水平,降低LDL-C、TG及TBA水平,改善T2DM大鼠脂代謝紊亂,調(diào)節(jié)TBA代謝平衡。4.振腹推拿可調(diào)節(jié)T2DM大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu),主要表現(xiàn)為:a)增加擬桿菌相對豐度、降低厚壁菌門/擬桿菌的比值;b)增加有益菌種如雙歧桿菌、蘇黎世桿菌的相對豐度;c)降低條件致病菌如變形菌門及其相關(guān)綱目、棒狀桿菌的相對豐度;d)降低對機體健康產(chǎn)生負面作用的布勞特氏菌、沃氏嗜膽菌、瘤胃菌、脫硫化弧菌等菌種的相對豐度等幾方面。5.振腹推拿通過改變腸道菌群結(jié)構(gòu),能夠起到如下作用:促進SCFA的生成、增強腸道屏障功能、正向調(diào)節(jié)腸道菌群、調(diào)節(jié)腸道穩(wěn)態(tài);增加多糖水解酶數(shù)量、提高機體的多糖利用能力;減少內(nèi)毒素的生成、緩解肥胖;減輕機體炎癥反應(yīng)、緩解IR和糖耐量異常;降低血糖、維持血糖穩(wěn)定。6.振腹推拿對腸道菌群的改變可能是影響血清相關(guān)指標(biāo)及T2DM相關(guān)癥狀發(fā)生改變的原因。綜上所述,振腹推拿可以改善T2DM大鼠糖脂代謝水平,調(diào)節(jié)TBA代謝平衡,減輕機體炎癥反應(yīng),其作用機制可能與其能調(diào)節(jié)腸道菌群,促進膽汁酸代謝有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R244.1

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本文編號：2687023