【摘要】：目的本研究通過觀察針灸干預酒精性肝損傷大鼠的肝臟的功能、纖維化程度及對組織形態(tài)學變化,通過其對各指標的影響以及相關蛋白的表達的影響,研究針刺與艾灸干預對酒精性肝損傷大鼠肝臟的保護作用,著重從針刺與艾灸干預對肝細胞功能的保護,抗氧化應激水平,調節(jié)肝細胞炎性因子以及減輕酒精肝損傷后出現的肝組織形態(tài)學改變,對其進行觀察分析,并重點研究和觀察了針刺與艾灸干預對于Wnt/β-catenin信號通路的影響,來探討針刺與艾灸干預對大鼠酒精性肝損傷過程中保護肝臟的可能作用機制。方法選取健康SD大鼠72只,SPF級,雄性,體重180~210g,正常對照組給予蒸餾水灌胃,并給予SPF級鼠糧,其余大鼠隨機分為:模型對照組、“強胃健脾”針刺干預組、“強胃健脾”艾灸干預組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預組,每組12只,采用白酒混合液灌胃配合高脂飼料飲食(56d),其中“強胃健脾”針刺干預組、“強胃健脾”艾灸干預組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預組分別給予穴位針刺和艾灸干預,在最后一次針灸干預后,剔除針刺和艾灸干預操作過程中引起局部血腫、燙傷以及解剖后胃腸穿孔的大鼠,并取血,分離血清,并取肝臟�？疾灬槾谈深A與艾灸干預對于酒精性肝損傷大鼠的保護作用以及不同腧穴配伍下針刺干預與艾灸干預的效果。微板法(ELISA法)檢測各組血清酶AST、ALT的活力,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測定各組大鼠血清中HA、LN、Hyp以及肝組織中PCⅢ、Ⅳ-C、SOD、MDA、TGF-β1、TIMP-1的含量。采用伊紅染色法制備肝臟切片并在光學顯微鏡下觀察大鼠肝組織病理學變化,免疫組織化學染色法檢測各組大鼠肝組織的α-平滑肌激動蛋白(α-SMA)的表達,和免疫印跡試驗(Western blotting)檢測各組大鼠肝組織Wnt蛋白、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、基質金屬蛋白酶-7(MMP-7)的表達。結果1與正常對照組比較,模型對照組大鼠血清谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)、透明質酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、羥脯氨酸(Hyp)含量增加明顯(P0.01)。與模型對照組大鼠比較,“強胃健脾”針刺與艾灸干預組、“柔肝養(yǎng)血”針刺與艾灸干預組的血清谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)、透明質酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、羥脯氨酸(Hyp)水平明顯低于模型對照組(P0.05或P0.01)。用HE染色觀察對照組大鼠肝組織和細胞的病理學特征,視野下肝細胞清晰可見,且無變性和壞死現象,模型對照組大鼠肝細胞出現脂肪變性、壞死等現象,并出現嚴重的肝組織結構破壞和肝索排列紊亂,在肝門管區(qū)和中央靜脈可見炎細胞浸潤,并看到異常增生的纖維組織,且延伸至小葉內形成假小葉。與模型對照組比較,“強胃健脾”針刺與艾灸干預組、“柔肝養(yǎng)血”針刺與艾灸干預組大鼠肝細胞的脂肪變性、水腫、壞死程度明顯低于模型對照組,并且“強胃健脾”針刺干預和“強胃健脾”艾灸干預組分別好于“柔肝養(yǎng)血”針刺干預組和“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預組。2通過實驗大鼠肝臟Masson染色觀察可見,正常對照組大鼠肝組織未見明顯膠原沉積于肝門管區(qū)內。而模型對照組大鼠有大量明顯增生的纖維組織和膠原沉積于肝門管區(qū)、中央靜脈和肝實質中,繼而生成假小葉,不同程度的形成了肝損傷和肝纖維化。與模型對照組比較,“強胃健脾”針刺干預組、“強胃健脾”艾灸干預組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預組膠原沉積明顯低于模型對照組,并且“強胃健脾”針刺干預組、“強胃健脾”艾灸干預組膠原沉積也分別較輕于“柔肝養(yǎng)血”針刺干預組和“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預組。3與正常對照組大鼠比較,模型對照組大鼠肝組織Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)、丙二醛(MDA)、基質金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)、轉化生長因子β1(TGF-β1)含量明顯上升(P0.01),超氧化物歧化酶(SOD)水平明顯下降(P0.01),與模型對照組比較“強胃健脾”針刺干預組、“強胃健脾”艾灸干預組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預組能夠顯著降低肝組織Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)、丙二醛(MDA)、基質金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)、轉化生長因子β1(TGF-β1)的含量(P0.05或P0.01),提高肝組織SOD含量(P0.01)。4與正常對照組大鼠比較,模型對照組大鼠肝組織α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達明顯增加(P0.01);與模型對照組相比,“強胃健脾”針刺干預組、“強胃健脾”艾灸干預組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預組的大鼠肝組織α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達顯著下降(P0.01)。與正常對照組大鼠比較,模型對照組大鼠肝組織Wnt蛋白(Wnt)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、基質金屬蛋白酶7(MMP-7)的表達量顯著上升(P0.01)。與模型對照組大鼠比較,“強胃健脾”針刺干預組、“強胃健脾”艾灸干預組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預組能夠明顯降低肝組織Wnt蛋白(Wnt)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、基質金屬蛋白酶7(MMP-7)的表達量(P0.05或P0.01)。結論1針刺與艾灸干預能有效的降低酒精性肝損傷大鼠血清中的AST、ALT含量,達到保護肝臟功能的目的。2針灸與艾灸干預可能通過調控肝細胞炎性因子水平,實現對酒精性肝損傷大鼠肝臟的保護作用。3針刺與艾灸干預可能通過降低大鼠肝細胞氧化應激水平,實現對酒精性肝損傷大鼠肝臟的保護作用。4針刺與艾灸干預可能通過對Wnt/β-catenin信號通路的干預來降低肝組織中Wnt,β-catenin,MMP-7的蛋白表達,實現對酒精性肝損傷大鼠肝組織和細胞的保護作用。5“強胃健脾”和“柔肝養(yǎng)血”針刺與艾灸干預對酒精性肝損傷大鼠肝臟均有保護作用,且“強胃健脾”針刺與艾灸干預組保護作用優(yōu)于“柔肝養(yǎng)血”針刺與艾灸干預組,提示“強胃健脾”可能更符合早中期酒精性肝損傷的防治。
【圖文】：

[141]，，結合本實驗的實際情況進行改良，給予乙醇混合液灌胃（1 ml/100 g/d）如圖1，每日1次，并模擬人類酒精性肝損患者飲食結構，給予高脂飼料飲食，飲水自由，在第56天，最后一次乙醇混合物灌胃結束3h后，實驗大鼠全部處死，預備進行血清和病理檢測，并剔除針刺和艾灸干預操作過程中引起局部血腫、燙傷以及解剖后胃腸穿孔的大鼠。表1 模型對照組和針灸干預組大鼠造模材料配置比例造模材料 成分組成和劑量灌胃乙醇混合液紅星牌 56 度白酒0.5ml/kg/d吡唑27.5 mg/kg/d食用玉米油2 ml/kg /d高脂飼料 SPF 級鼠糧 87% 膽固醇 3% 自制豬油 10%圖1實驗大鼠乙醇混合液灌胃2.2 實驗動物分組實驗動物適應性喂養(yǎng)1周后，將72只大鼠隨機分為6組，每組12只

“強胃健脾”干預組的大鼠腧穴定位照普通高等教育“十二五”規(guī)劃教材《實驗針灸學·大鼠針灸穴位圖北京：中國中醫(yī)藥出版社，2012）中，腧穴位置如下：足三里（后三外側，在腓骨小頭下約 5mm 處，在脛、腓骨間隙中；三陰交：后肢mm 皮下有趾深屈肌、脛神經及脛后動、靜脈分布 直刺 5mm；中脘：上約 20mm，皮下有腹壁動、靜脈及第 10 脊神經分布，直刺 2mm。針刺和艾灸操作手法刺干預組用華佗牌 0.18*13mm 規(guī)格的針灸針，足三里（大鼠穴位后毫針，直刺 2mm；三陰交：0.5 寸毫針，直刺 5mm；中脘：直刺 2mm用自制艾線，平均直徑在 2-3mm，采用懸灸法，每次單個穴位操作 3m
【學位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R245

【參考文獻】

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2 向武俠;陳蘭玲;;中醫(yī)對于“肝硬化”病名診斷的研究[J];中醫(yī)藥導報;2015年19期

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本文編號：2674540